本发明专利技术公开了一株高地芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用。该菌株为高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)菌株YT2002。该菌株已于2018年1月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.15213。实验表明：高地芽孢杆菌菌株YT2002生物制剂对番茄根结线虫具有较好的防治效果，最后一次施药后14d其防治效果为63.03％。从番茄长势看，高地芽孢杆菌菌株YT2002对番茄具有明显的促进生长效果，没有药害，安全可靠。
A Highland Bacillus strain and its application in the control of tomato root knot nematode
The invention discloses a Bacillus altissima strain and its application in the control of tomato root knot nematode. The strain is Bacillus altitudinis strain YT2002. The strain was preserved in the General Microbial Center of the China Council for the Preservation of Microbial Species on January 15, 2018, and its storage number is CGMCC No. 15213. The results showed that the biological preparation of Bacillus altissima strain YT2002 had a good control effect on tomato root knot nematode, and the control effect was 63.03% 14 days after the last application. From the growth of tomatoes, Bacillus altissima strain YT2002 has obvious growth promoting effect on tomatoes. It has no pesticide damage and is safe and reliable.
【技术实现步骤摘要】
一株高地芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用
本专利技术属于植物病害生物防治
具体而言，本专利技术涉及一株高地芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用，本专利技术还涉及采用该高地芽孢杆菌制备的生物防治制剂。
技术介绍
根结线虫(Meloidogynespp.)是危害番茄的主要病害之一，它广泛分布于世界各地。随着保护地蔬菜生产面积的增加，特别是日光温室的大面积推广以来，复种指数增加，加之重茬严重，导致根结线虫危害日趋严重，一般可造成减产10％～20％，严重可达30％～40％，甚至绝产。根结线虫对番茄的危害一方面表现在根结线虫取食时食道腺分泌物刺激寄主细胞产生巨形细胞或合细胞，从而使植物体内矿物质代谢、蛋白质和碳水化合物的合成、呼吸作用等正常生理功能改变；另一方面，根结线虫取食和侵入造成的伤口有利于其他病原物侵入，形成复合病害。目前防治番茄根结线虫的方法包括农业防治和化学防治。其中，农业防治效率低、劳动量大，而且防治作用并不明显；而化学防治的长期用药，使番茄根结线虫产生抗药性，最终导致防治效果不理想，再加上化学药剂的大量使用对番茄质量安全与环境造成许多负面影响。而生物防治具有对人畜安全、环境兼容性好且病原菌不易产生抗药性等优点，因此番茄根结线虫的绿色无公害生物防治越来越多的受到人们关注。芽孢杆菌易从土壤和植株中分离得到，能产生耐热、抗逆性的芽孢，具有生长速度快、营养需求简单、有较强的耐热性及抗逆性、在植物表面易于存活与繁殖、对人畜无害、不污染环境、制剂稳定、施用方便等优点，不仅符合人们对绿色食品的需求，而且为农业的可持续发展提供了保障。因此，芽孢杆菌作为一种较为理想的生防微生物，逐渐成为近年来研究的热点。目前，用于防治植物病害的芽孢杆菌主要有枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、侧孢芽孢杆菌(B.laterosporus)、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)、短小芽孢杆菌(B.pumilus)等。对高地芽孢杆菌的研究报道较少。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株用于高效防治番茄根结线虫的新的微生物——高地芽孢杆菌菌株YT2002。本专利技术的高地芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产孢量大、抗逆性强，在植物表面能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术所提供的菌株为高地芽孢杆菌(Bacillusaltitudinis)菌株YT2002，是从烟台市牟平养马岛海滩泥沙中分离获得的，已于2018年1月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCCNo.15213。其具有以下生物学特性：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB(Luria-Bertani)培养基上该菌株菌落形状呈圆形，中部透明，颜色微黄，边缘不整齐；在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状。经革兰氏染色呈阳性(以大肠杆菌为对照)。经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形或柱状。本专利技术高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002的培养方法或繁殖方法包括：(1)普通培养保存采用LB培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15～20g，蒸馏水1000mL，pH调至6.8～7.0。(2)实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至6.8～7.0。(3)固体培养基配方：固料和无机盐，所述固料和无机盐的质量比为98.7∶0.3；所述固料按质量比计为稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝50∶24∶20∶6；所述无机盐的组分及重量比为：磷酸二氢钾11％，硫酸镁9％，硫酸铵15％，轻质碳酸钙65％。(4)发酵培养配方：同(3)中固体培养基配方。本专利技术还提供了一种用于防治番茄根结线虫的生物防治制剂，所述生物防治制剂包括所述的高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002。并且，本专利技术还提供了一种用于防治番茄根结线虫的生物防治方法，所述生物防治方法包括向具有根结线虫的番茄植株施用上述高地芽孢杆菌(B.altitudinis)菌株YT2002或者上述生物防治制剂。本专利技术也提供了上述高地芽孢杆菌菌株或者上述生物防治制剂在防治番茄根结线虫中的用途。本专利技术所述的生物防治制剂的制备方法包括以下步骤：(1)制备高地芽孢杆菌菌株YT2002的种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液接种到固体培养基中，27～29℃下恒温培养；(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水按质量比1∶15的比例混合，过滤，将滤液接种至发酵培养基，在室温27～29℃、相对湿度85％以上的发酵室中进行发酵培养。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述制备方法包括以下步骤：(1)将所述高地芽孢杆菌的孢子移植到LB液体培养基，27～29℃摇床振荡培养3～5d得到种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液按质量比10％的比例接种到固体培养基中，27～29℃下振荡培养3～5d；(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水按质量比1∶15的比例混合，过滤，将滤液按体积比1∶6的比例接种至发酵培养基，室温27～29℃、相对湿度85％以上的发酵室中发酵培养8～9d；活性菌可达到70～80亿/克。其中，步骤(1)中的LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至6.8～7.0。步骤(2)中的固体培养基由固料和无机盐组成，所述固料和无机盐的质量比为98.7∶0.3；所述固料按质量比计为稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝50∶24∶20∶6；所述无机盐的组分及重量比为：磷酸二氢钾11％，硫酸镁9％，硫酸铵15％，轻质碳酸钙65％。步骤(3)中的发酵培养基同步骤(2)的固体培养基。实验表明，本专利技术的高地芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产孢量大、抗逆性强，在植物表面能够快速大量定殖等特点，具有良好的应用前景。高地芽孢杆菌菌株YT2002生物制剂对番茄根结线虫具有较好的防治效果，最后一次施药后14d其防治效果为63.03％。从番茄长势看，高地芽孢杆菌菌株YT2002对番茄具有明显的促进生长效果，没有药害，安全可靠。该微生物制剂可以作为生物农药或生物肥料，防治番茄根结线虫。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是示例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均在本专利技术的保护范围内。实施例11、高地芽孢杆菌(B.altitudinis)YT2002的分离与纯化本专利技术的高地芽孢杆菌(B.altitudinis)YT2002是从烟台市牟平养马岛海滩泥沙中采用稀释平板法和平板划线法分离获得的，分离方法为：(1)菌株的分离样品于2014年4月30日采集自烟台市牟平养马岛海滩泥沙。称取1g泥沙样品于10本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)菌株YT2002，所述菌株的保藏编号为：CGMCC No.15213。
【技术特征摘要】
1.高地芽孢杆菌(Bacillusaltitudinis)菌株YT2002，所述菌株的保藏编号为：CGMCCNo.15213。2.权利要求1所述的高地芽孢杆菌菌株YT2002在防治番茄根结线虫中的用途。3.一种生物防治制剂，包括权利要求1所述的高地芽孢杆菌菌株YT2002。4.权利要求3所述的生物防治制剂的制备方法，其特征是，包括以下步骤：(1)制备高地芽孢杆菌菌株YT2002的种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液接种到固体培养基中进行培养；(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水混合，过滤，将滤液接种至发酵培养基，在室温27～29℃、相对湿度85％以上的发酵室中进行发酵培养。5.如权利要求4所述的生物防治制剂的制备方法，其特征是，步骤(2)中的固体培养基包括固料和无机盐，所述固料和无机盐的质量比为98.7∶0.3；所述固料按质量比计为稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝50∶24∶20∶6；所...
【专利技术属性】
技术研发人员：毕乃亮，牛赡光，刘宜鑫，张淑静，牛兆颖，李宗泰，
申请(专利权)人：毕乃亮，
类型：发明
国别省市：山东,37
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