一种转基因油菜品系的检测试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种转基因油菜品系的检测试剂盒和方法，涉及转基因检测技术领域。该检测试剂盒包括下引物对中的一种或多种的组合：SEQ ID NO.1‑2、SEQ ID NO.3‑4、SEQ ID NO.5‑6、SEQ ID NO.7‑8、SEQ ID NO.9‑10、SEQ ID NO.11‑12、SEQ ID NO.13‑14、SEQ ID NO.15‑16和SEQ ID NO.17‑18；采用该试剂盒检测转基因油菜品系，具有较高的特异性和灵敏度、检测结果准确可靠。

【技术实现步骤摘要】
一种转基因油菜品系的检测试剂盒和方法
本专利技术涉及转基因检测
，具体而言，涉及一种转基因油菜品系的检测试剂盒和方法。
技术介绍
转基因作物在解决全世界日益严重的粮食危机的同时，也带来了食品安全和环境安全方面的诸多争议，世界各国都在逐步加强对重要目标食品中转基因油菜品系的监测与标识工作，并制定了相应的管理法规。随着转基因生物种类不断增加，被转入的外源基因的种类也越来越多，今后转基因产品的检测内容将增多，检测任务将越来越繁重。据报道，1998年全球转基因油菜种植面积为240x104hm2占全球油菜种植面积的9％，1999年增至280x104hm2，占全球油菜总面积的11％，2000年全球转基因作物面积为4420x104hm2，占全球作物种植面积的16％。随着转基因作物在全球商业化种植的迅速发展，转基因食品的安全性也越来越引起争议，目前尚无定论。我国自1993年底正式颁布《基因工程安全管理方法》，对境内开展的基因工程生物实验做出了明确的规定。国务院也在2001年6月颁布《农业转基因生物安全管理条例》，明确要求在我国境内销售的含有转基因成分的产品应该有明确的标识。同时2002年农业部颁布了有关农业转基因生物的安全评价、进口、标识等管理办法和管理程序。普通定性PCR法检测多指标、多样本时，效率低；巢式PCR法可以显著的提高检测灵敏度，引物设计难度较高，单次仅能检测一个指标，假阳性率高；多重PCR法可以在一个反应中同时扩增多个基因，常规的电泳检测分辨率不高，容易出现假阳性或假阴性结果；荧光定量PCR法检测灵敏度高，并行检测指标少，需要特定检测仪器，成本较高；目前，基因芯片法一般采用玻璃芯片作为固相支持物，杂交点荧光强度作为读出信号，需要特定检测仪器，操作相对复杂，检测成本高。建立检测转基因油菜品系的膜芯片检测方法，与转基因检测定的传统方法比较，缩短了检测周期，提高了检测灵敏度，能够特异性的区分具有相同农艺性状的转基因大豆品系。该方法的建立，能够实现对转基因大豆品系进行快速、准确检测，满足我国国内以及进出口的农产品与食品中转基因检测与标识的法规需要。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种转基因油菜品系的检测试剂盒，该检测试剂盒能够同时对常见的转基因油菜品系例如RF1、RF2、RF3、MS1、MS8、Topas19/2、Oxy235、T45、RT73/GT73等品系进行检测，具有检测速度快、灵敏度高、特异性好、高通量、操作便捷等特点。本专利技术的另一目的在于提供转基因油菜品系的检测方法，该检测方法能够同时对常见的转基因油菜品系例如RF1、RF2、RF3、MS1、MS8、Topas19/2、Oxy235、T45、RT73/GT73等品系进行检测，具有检测速度快、灵敏度高、特异性好、高通量等特点。本专利技术是这样实现的：一方面，本专利技术提供了一种转基因油菜品系的检测试剂盒，其包括核酸组合，所述核酸组合包括如下用于检测转基因油菜品系的引物对中的一种或多种的组合：包括SEQIDNO.1所示的上游引物和SEQIDNO.2所示的下游引物的用于检测RF1品系的第一引物对，包括SEQIDNO.3所示的上游引物和SEQIDNO.4所示的下游引物的用于检测RF2品系的第二引物对，包括SEQIDNO.5所示的上游引物和SEQIDNO.6所示的下游引物的用于检测RF3品系的第三引物对，包括SEQIDNO.7所示的上游引物和SEQIDNO.8所示的下游引物的用于检测MS1品系的第四引物对，包括SEQIDNO.9所示的上游引物和SEQIDNO.10所示的下游引物的用于检测MS8品系的第五引物对，包括SEQIDNO.11所示的上游引物和SEQIDNO.12所示的下游引物的用于检测Topas19/2品系的第六引物对，包括SEQIDNO.13所示的上游引物和SEQIDNO.14所示的下游引物的用于检测Oxy235品系的第七引物对，包括SEQIDNO.15所示的上游引物和SEQIDNO.16所示的下游引物的用于检测T45品系的第八引物对，包括SEQIDNO.17所示的上游引物和SEQIDNO.18所示的下游引物的用于检测RT73/GT73品系的第九引物对。本专利技术提供的检测试剂盒中的引物对通过合理的设计，可以使得上述的9种引物对在同一PCR反应体系进行多重PCR，避免非特异性扩增，提高检测的灵敏度和特异性，能够同时对常见的转基因油菜品系RF1、RF2、RF3、MS1、MS8、Topas19/2、Oxy235、T45、RT73/GT73等实现检测。例如使用上述试剂盒的检测方法可以是：以待测油菜样品的总DNA为模板，以上述9对特异性引物组合进行PCR扩增，各对引物的目标序列分别为转基因油菜品系特异性靶序列，同时以多重PCR扩增产物设计得到探针，将各探针固定在膜芯片上，最后将扩增产物与探针杂交后使用显色液显色，并通过肉眼或成像仪观察检测结果。如果样品中有相应的转基因成分则扩增出的PCR产物与对应的探针杂交，并被显色观察，实现检出效果。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，上述核酸组合还包括内参引物对，其包括SEQIDNO.31所示的上游引物和SEQIDNO.32所示的下游引物。该内参引物对可检测油菜的内源性基因PEP的内参引物对，该内参引物对包括SEQIDNO.31所示的上游引物和SEQIDNO.32所示的下游引物。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述试剂盒还包括膜芯片，所述膜芯片上固定有碱基序列如SEQIDNO.20-28所示的探针中的一种或多种。各探针对应的扩增产物分别如下：SEQIDNO.20为RF1探针，可与第一引物对的PCR产物杂交；SEQIDNO.21为RF2探针，可与第二引物对的PCR产物杂交；SEQIDNO.22为RF3探针，可与第三引物对的PCR产物杂交；SEQIDNO.23为MS1探针，可与第四引物对的PCR产物杂交；SEQIDNO.24为MS8探针，可与第五引物对的PCR产物杂交；SEQIDNO.25为Topas19/2探针，可与第六引物对的PCR产物杂交；SEQIDNO.26为Oxy235探针，可与第七引物对的PCR产物杂交；SEQIDNO.27为T45探针，可与第八引物对的PCR产物杂交；SEQIDNO.28为RT73/GT73探针，可与第九引物对的PCR产物杂交。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述膜芯片上还固定内参探针，其碱基序列如SEQIDNO.33所示。该内参探针可与内参引物对的PCR产物杂交结合。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述膜芯片上还固定有如下对照探针中的一种或两种：阳性对照探针和阴性对照探针；所述阳性对照探针的碱基序列如SEQIDNO.29所示；所述阴性对照探针的碱基序列如SEQIDNO.30所示。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述核酸组合还包括：用于与阳性探针杂交结合的阳性寡核苷酸单链DNA分子，该阳性寡核苷酸单链DNA分子的碱基序列如SEQIDNO.19所示。阳性寡核苷酸单链DNA可与阳性探针结合，而不与阴性探针结合。因此，在膜芯片上的阳性探针位置有斑点而阴性探针位置没有斑点说明杂交结果可靠，检测结果更可信。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，每个引物对中的上游引物的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转基因油菜品系的检测试剂盒，其特征在于，其包括核酸组合，所述核酸组合如下用于检测转基因油菜品系的引物对中的一种或多种的组合：包括SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物的用于检测RF1品系的第一引物对，包括SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物的用于检测RF2品系的第二引物对，包括SEQ ID NO.5所示的上游引物和SEQ ID NO.6所示的下游引物的用于检测RF3品系的第三引物对，包括SEQ ID NO.7所示的上游引物和SEQ ID NO.8所示的下游引物的用于检测MS1品系的第四引物对，包括SEQ ID NO.9所示的上游引物和SEQ ID NO.10所示的下游引物的用于检测MS8品系的第五引物对，包括SEQ ID NO.11所示的上游引物和SEQ ID NO.12所示的下游引物的用于检测Topas19/2品系的第六引物对，包括SEQ ID NO.13所示的上游引物和SEQ ID NO.14所示的下游引物的用于检测Oxy235品系的第七引物对，包括SEQ ID NO.15所示的上游引物和SEQ ID NO.16所示的下游引物的用于检测T45品系的第八引物对，包括SEQ ID NO.17所示的上游引物和SEQ ID NO.18所示的下游引物的用于检测RT73/GT73品系的第九引物对。...

【技术特征摘要】
1.一种转基因油菜品系的检测试剂盒，其特征在于，其包括核酸组合，所述核酸组合如下用于检测转基因油菜品系的引物对中的一种或多种的组合：包括SEQIDNO.1所示的上游引物和SEQIDNO.2所示的下游引物的用于检测RF1品系的第一引物对，包括SEQIDNO.3所示的上游引物和SEQIDNO.4所示的下游引物的用于检测RF2品系的第二引物对，包括SEQIDNO.5所示的上游引物和SEQIDNO.6所示的下游引物的用于检测RF3品系的第三引物对，包括SEQIDNO.7所示的上游引物和SEQIDNO.8所示的下游引物的用于检测MS1品系的第四引物对，包括SEQIDNO.9所示的上游引物和SEQIDNO.10所示的下游引物的用于检测MS8品系的第五引物对，包括SEQIDNO.11所示的上游引物和SEQIDNO.12所示的下游引物的用于检测Topas19/2品系的第六引物对，包括SEQIDNO.13所示的上游引物和SEQIDNO.14所示的下游引物的用于检测Oxy235品系的第七引物对，包括SEQIDNO.15所示的上游引物和SEQIDNO.16所示的下游引物的用于检测T45品系的第八引物对，包括SEQIDNO.17所示的上游引物和SEQIDNO.18所示的下游引物的用于检测RT73/GT73品系的第九引物对。2.根据权利要求1所述的转基因油菜品系的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括膜芯片，所述膜芯片上固定有碱基序列如SEQIDNO.20-28所示的探针中的一种或多种。3.根据权利要求2所述的转基因油菜品系的检测试剂盒，其特征在于，所述膜芯片上还固定有如下对照探针中的一种或两种：阳性对照探针和阴性对照探针；所述阳性对照探针的碱基序列如SEQIDNO.29所示；所述阴性对照探针的碱基序列如SEQIDNO.30所示。4.根据权利要求3所述的转基因油菜品系的检测试剂盒，其特征在于，所述核酸组合还包括：用于与阳性探针杂交结合的阳性寡核苷酸单链DNA分子，该阳性寡核苷酸单链DNA分子的碱基序列如SEQIDNO.19所示。5.根据权利要求1-4任一项所述的转基因油菜品系的检测试剂盒，其特征在于，每个引物对中的上游引物的5’端或下游引物的5’端标记有地高辛、异硫氰酸荧光素和生物素中的任意一种标记物。6.一种转基因油菜品系的检测方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文静，刘菲，周航，
申请(专利权)人：四川华汉三创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51