汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用制造技术

本发明专利技术涉及汉黄芩素技术领域，具体涉及汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用。汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用，是申请人首次研究发现汉黄芩素具有抗轮状病毒的作用，填补了抗轮状病毒药物的空白，具有深远的意义和价值。其中，研究显示，抗轮状病毒的药物中，汉黄芩素的摩尔浓度为2.5umol/L～80umol/L。

【技术实现步骤摘要】
汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用
本专利技术涉及汉黄芩素
，具体涉及汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用。
技术介绍
轮状病毒(Rotavirus，RV)是导致婴幼儿急性腹泻的主要病原体，每年约有60万名婴幼儿因RV感染死亡，主要在秋冬季流行，其发生流行不受卫生状况影响。发达国家发病率与发展中国家相差不多，但发展中国家的死亡率却远远高于发达国家。RV一般通过粪-口途径传播，潜伏期2～4天。以前认为RV主要侵犯小肠细胞绒毛，病人最主要的症状是腹泻，起病急，日十余次到数十次，可伴有发热，感染后血液中很快出现特异性lgM、lgG抗体，肠道局部出现分泌型lgA，可中和病毒，对同型病毒感染有作用。病程3～5天或一周左右。最近的研究表明RV感染不仅限于肠道，还可侵犯其他的系统，引起许多并发症，如休克、脑病、心脏损害和肝外胆管阻塞。目前尚无治疗RV感染的特效药物。而有关RV疫苗方面，国内尚处于研究阶段，国外上市RV疫苗价格昂贵，RV毒株的多样性使其预防范围有限。现临床多采用WHO推荐的口服补液以缓解症状。因此，发现、开发安全有效的药物防治轮状病毒感染非常重要。汉黄芩素(结构式如下)是来源于中药唇形科黄芩属多年生草本植物黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)根的提取分离达到的黄酮类化合物，具有镇静、保肝、利胆、抗菌、消炎等作用，已有研究表明，汉黄芩素对流感病毒、单纯胞疹病毒、柯萨奇病毒、呼吸道合胞病毒、丙型肝炎病毒等有抑制作用，但汉黄芩素对RV是否有作用尚未报道。汉黄芩素的结构式。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：提供汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用。所述抗轮状病毒的药物中，所述汉黄芩素的摩尔浓度为2.5umol/L～80umol/L。所述抗轮状病毒的药物中，所述汉黄芩素对细胞产生毒性的摩尔浓度为大于160umol/L。所述抗轮状病毒的药物为片剂、颗粒剂、散剂、胶囊、微丸、液体制剂、半固体制剂、纳米、微乳或脂质体的制剂。所述抗轮状病毒的药物包括以汉黄芩素作为组份的组合物或复方制剂。本专利技术与现有技术相比较，有益效果在于：本专利技术的汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用，是申请人首次研究发现汉黄芩素具有抗轮状病毒的作用，填补了抗轮状病毒药物的空白，具有深远的意义和价值。附图说明图1是汉黄芩素的细胞毒性实验结果图。具体实施方式为了使本专利技术所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1。本实施例的汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用，是申请人首次研究发现汉黄芩素具有抗轮状病毒的作用，填补了抗轮状病毒药物的空白，具有深远的意义和价值。实施例2。本实施例的汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用，其中，抗轮状病毒的药物中，汉黄芩素的摩尔浓度为2.5umol/L～80umol/L。实施例3。本实施例的汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用，其中，抗轮状病毒的药物中，汉黄芩素对细胞产生毒性的摩尔浓度为大于160umol/L。实施例4。本实施例的汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用。其中，抗轮状病毒的药物为片剂、颗粒剂、散剂、胶囊、微丸、液体制剂、半固体制剂、纳米、微乳或脂质体的制剂。实施例5。本实施例的汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用。其中，抗轮状病毒的药物包括以汉黄芩素作为组份的组合物或复方制剂。实验：一、实验材料实验药品：汉黄芩素(上海源叶生物科技有限公司，纯度98％，批号：C19A8Q34235)。实验试剂：DMEM培养液、胎牛血清均为GIBCO公司提供；MTT(4，5，二甲基噻唑-2，5，二苯基四唑溴化物)，M1124Amresco公司提供；青霉素-链霉素混合溶液、胰蛋白酶、PBS、二甲基亚砜均为solarbio公司提供。试剂的配制和分装：(1)胎牛血清分装在灭菌的50ml离心管中，-20℃保存。(2)胰蛋白酶分装在灭菌的10ml离心管中，-20℃保存。(3)霉素-链霉素混合溶液分装在灭菌的10ml离心管中，-20℃保存。(4)MTT应用液：MTT粉50mg，PBS10ml，搅拌溶解，0.22μm滤膜滤过除菌，分装后-20℃避光保存备用。实验器材：96孔细胞培养板、可调式微量加样器、细胞培养瓶、滤器、吸管、恒温箱、消毒锅；洁净操作台SIK-202型，安徽蚌埠净化设备厂提供；OLYMPΜS倒置光学显微镜CKX41；酶联免疫检测仪DG3022A；二氧化碳孵育箱，美国Thermo公司提供；细胞与病毒；Caco-2细胞(结肠癌细胞)，MA104(恒河猴肾细胞)，Wa株轮状病毒。二、实验方法(一)细胞和病毒：Caco-2细胞在含10％胎牛血清，100μ/ml青霉素，100μg/ml链霉素的DMEM培养液中生长和传代。感染病毒为适应细胞培养增殖的人Wa株轮状病毒。(二)药物的细胞毒性实验：黄芩苷溶液配制：称取黄芩苷样品2mg，先用DMSO(二甲基亚砜)溶解后加入用适量DMEM溶解，以DMSO终浓度不超过0.5％为标准，并设置溶剂对照组。洁净台内无菌操作用一次性滤头过滤除菌。计算初浓度。各种药物终浓度25umol/L～200umol/L。细胞毒性实验：将Caco-2细胞以6×103个/ml的细胞密度，加入在96孔细胞培养板上每孔100μl。37℃5％CO2孵育至细胞生长成单层。吸出生长液，先按照1:1、1:10、1:100、1:1000的比例用不含血清的DMEM培养液进行稀释得到一系列浓度的药液，然后100μl/孔加入到96孔板内，每个浓度重复6孔。正常对照只加入等体积不含血清的DMEM维持液。37℃5％CO2孵育，光学显微镜连续观察，48小时之内若药物的第一、第二浓度之间有细胞毒性变化之外的其余三个药物浓度的细胞均正常。这表明有效浓度在1:1与1:100之间。按照1:1，1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64的比例得到一系列浓度药液，重复上述操作，光学显微镜下发现72小时以内高于1:4的药物浓度出现细胞毒性变化。37℃5％CO2孵育，光学显微镜连续观察2d后，将药液吸出，避光，加入5mg/ml的MTT25μl/孔(用不含血清的DMEM培养基配制，避光放置)，37℃5％CO2孵育4h后，800r/ml离心，弃上清，加入DMSO50μl/孔，室温下振荡约10min，待结晶溶解后，混匀，在酶标仪上检测490nm波长下每孔的光密度(opticaldensity,OD)值。按下列公式求出细胞存活率：细胞存活率％＝药物组平均吸光度值/细胞对照组平均吸光度值×100％。(三)病毒增殖和滴度测定：Wa株RV的增殖和滴度测定在MA104上进行。当细胞在培养瓶中生长至单层时接种RV。接种病毒前，细胞单层先用磷酸盐缓冲液(PBS，pH7)洗一次，用无血清DMEM培养液洗两次。接种前，将原始病毒液从-80℃冰箱中取出，4℃溶解，37℃与10μg/ml的胰酶作用30min，将长成单层的MA104细胞用PBS冲洗两次。随后加入与胰酶孵育后的病毒液，接种病毒后的细胞维持液为无胎牛血清,含1μg/ml胰本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用。

【技术特征摘要】
1.汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用。2.根据权利要求1所述的汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用，其特征在于：所述抗轮状病毒的药物中，所述汉黄芩素的摩尔浓度为2.5umol/L～80umol/L。3.根据权利要求1所述的汉黄芩素在制备抗轮状病毒药物的应用，其特征在于：所述抗轮状病毒的药物中，所述汉黄芩素对细胞产生毒性的摩尔浓度为...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋丽军，赵文昌，周若夏，
申请(专利权)人：广东医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44