一种大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法技术

本发明专利技术涉及生物细胞培养技术领域，具体涉及一种大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法，包含以下步骤：①绑定静脉输液针与气管、②快速注入消化液、③肺入离心管、④吸取消化液、⑤缓慢注入消化液、⑥消化液再利用、⑦循环操作。本发明专利技术循环利用初始添加的消化液，反复吸取并注入肺中进行消化，使注入肺中的消化液量基本等于渗出肺的消化液量，保证消化液始终充满肺泡，从而使得消化持续稳定且快速，使消化更充分，消化总时间大大缩短，有效的增加了消化液消化效率和利用率，避免了消化液的浪费，增加了Ⅱ型肺泡上皮细胞原代产量。

【技术实现步骤摘要】
一种大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法
本专利技术涉及生物细胞培养
，具体涉及一种大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法。
技术介绍
大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞分离自肺组织；Ⅱ型肺泡上皮细胞有分裂、增殖并分化为Ⅰ型肺泡细胞的潜能，故具有修复受损伤上皮的作用。目前培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的方法主要为酶消化法，动物来源主要为目前生命科学研究领域最常见、最实用、最方便的实验动物--大鼠,现有技术中要提取大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的方法为,首先将胰酶和Ⅰ型胶原酶混合液（即消化液）注入大鼠的肺中后，把肺置于离心管中，再把装有肺的离心管置于37℃水浴缸中水浴消化20-30分钟（以达到将肺泡上皮细胞从肺泡内消化剥离的目的），每隔5分钟补充一次消化液，最后把肺切碎,加入终止液终止消化后，进行后续提取与培养操作。但是申请人在实际操作中发现，传统培养方法中水浴消化过程耗时长，而且首次注入消化液后，消化液会不断渗出肺外，也就不能保证所有肺泡内都始终存在消化液，导致肺泡内的上皮细胞未得到充分消化，降低消化效果与消化效率；为了使肺泡内的上皮细胞充分消化，传统方法中每隔5分钟中就会向肺中补充一次消化液，该方法无形中又增加了消本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法，其特征在于，它包含以下步骤：①绑定静脉输液针与气管：将支气管及其上连接的两肺从大鼠体内解剖下来，冲洗残余血液，去除坏死的组织，置于大培养皿中，将静脉输液针针尖处1cm用镊子弄断，保留1‑1.5cm的针头，将静脉输液针针头插入肺的气管中，用止血钳将气管与针头固定，再用黑线绑定好静脉输液针和气管；②快速注入消化液：将15ml0.25%胰酶和15ml0.1%Ⅰ型胶原酶倒入50ml离心管中混合均匀得消化液，用注射器将上述消化液抽出20ml后，将注射器与静脉输液针的导管相连，推压注射器，通过静脉输液针将消化液快速打入肺中，使两侧肺迅速充盈，判断肺有无漏液现象；若...

【技术特征摘要】
1.一种大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法，其特征在于，它包含以下步骤：①绑定静脉输液针与气管：将支气管及其上连接的两肺从大鼠体内解剖下来，冲洗残余血液，去除坏死的组织，置于大培养皿中，将静脉输液针针尖处1cm用镊子弄断，保留1-1.5cm的针头，将静脉输液针针头插入肺的气管中，用止血钳将气管与针头固定，再用黑线绑定好静脉输液针和气管；②快速注入消化液：将15ml0.25%胰酶和15ml0.1%Ⅰ型胶原酶倒入50ml离心管中混合均匀得消化液，用注射器将上述消化液抽出20ml后，将注射器与静脉输液针的导管相连，推压注射器，通过静脉输液针将消化液快速打入肺中，使两侧肺迅速充盈，判断肺有无漏液现象；若无漏液现象，则继续将50ml离心管中余下的10ml消化液倒入大培养皿中；③肺入离心管：右手提起静脉输液针连接的肺组织放置于50ml离心管中,再把离心管放在管架上；④吸取消化液：将注射器与静脉输液针的导管脱开，左手食...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈博文，陈淼，蒲清湖，王洪亮，刘国跃，
申请(专利权)人：遵义医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：贵州,52