一种原代奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法技术

本发明专利技术公开了一种原代奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法：将泌乳期奶牛的乳腺组织剪切成组织块后用胶原酶/透明质酸酶消化液消化，将消化后呈乳糜状的组织块接种在培养皿进行培养，1～2天后组织块周围即有细胞游离出组织并贴壁生长，之后培养期间，每天采用机械刮除法去除梭形样成纤维细胞，直至大约4～5天后大量铺路石样乳腺上皮细胞成簇成片生长并互相融合时进行首次传代。首次传代时利用差速消化法使用胰蛋白酶消除可能混杂的极少量成纤细胞，即得到纯度很高的奶牛乳腺上皮细胞。本方法中乳腺上皮细胞可以在短时间从乳糜状组织中迁出；并且主要采用机械刮除法去除少量混杂的成纤维细胞污染，因此获得的乳腺上皮细胞损伤小、纯度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞生物学领域，具体涉及一种快速分离奶牛乳腺上皮细胞的方法。
技术介绍
奶牛乳腺炎是对奶牛养殖业危害最大、最常见的疾病之一。奶牛乳腺炎所带来的危害引导着国内外学者对乳腺炎从病因、发病机理、诊断、治疗以及预防等多角度、多方面进行了深入的研究，而对乳腺炎的研究最为常用的就是建立体外乳腺上皮细胞感染的乳腺炎细胞模型。此外，乳腺上皮细胞被公认为是制作乳腺生物反应器的靶细胞，即利用体外培养的乳腺上皮细胞，基于转基因技术平台使外源基因导入动物基因组中并定位表达于动物乳腺，在动物的乳汁中生产一些具有重要价值产品，如小分子多肽或蛋白质。另外，乳腺上皮细胞也是从细胞水平研究乳蛋白表达、奶牛乳腺发育和泌乳机制以及作为抗病转基因奶牛育种供体细胞的有利工具。从1957年Lasfargures利用胶原酶消化法第一次实现乳腺上皮细胞的直接培养开始(Lasfargues E Y.Cultivat1n and behav1r in vitro of the normal mammaryepithelium of the adult mouse.The Anatomical Record，19本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种原代奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法，其特征在于：包括以下步骤：1)将奶牛乳腺组织剪切成0.5～1mm3大小的组织块，将所述组织块用磷酸盐缓冲液清洗后置于胶原酶/透明质酸酶消化液中消化30～40分钟；2)经过步骤1)后，通过离心收集消化成乳糜状的组织块，将消化成乳糜状的组织块接种在培养皿中，并向培养皿中加入细胞培养液，然后于37℃进行培养；培养1～2天后，开始每天机械刮除从消化成乳糜状的组织块迁出生长的成纤维细胞，保留同样迁出生长的乳腺上皮细胞，并且每隔1～2天更换细胞培养液1次，直到培养至5～7天时机械刮除所述培养皿中所有残余组织块，然后弃掉细胞培养液，并用磷酸盐缓冲液冲洗；3)经过步骤2...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高明清，张涌，张文耀，和桂良，陈青，徐彤，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61