羊贾第虫与隐孢子虫双重PCR检测试剂盒及其方法技术

本发明专利技术公开一种羊贾第虫与隐孢子虫双重PCR检测试剂盒及其方法，根据十二指肠贾第虫TPI基因、微小隐孢子虫18S rRNA基因部分保守序列设计引物，建立双重PCR检测方法，并且通过优化PCR反应的退火温度等反应条件来提高其灵敏性和准确性，扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳后观察结果方便、快捷。不同目的片段的区分是双重PCR检测方法建立的关键之一，本发明专利技术扩增的两种目的片段在琼脂糖凝胶电泳中大小差异显著，易于区分，且敏感性可达到5×10

【技术实现步骤摘要】
羊贾第虫与隐孢子虫双重PCR检测试剂盒及其方法
本专利技术提供一种同时检测羊十二指肠贾第虫(Giardiaduodenalis,G.duodenalis)、微小隐孢子虫（C.parvum）双重PCR检测方法，本专利技术还提供了该试剂盒的制备方法和用法，属于寄生虫检测

技术介绍
贾第虫（Giardia）与隐孢子虫(Cryptosporidium)属于重要的人兽共患病原虫，其感染宿主广，感染后临床症状以腹泻为主，并对畜牧业与养殖业造成巨大的经济损失。微小隐孢子虫（C.parvum）为体积微小的人兽共患性寄生虫，广泛存在多种脊椎动物体内，寄生于人和大多数哺乳动物，引起的疾病为隐孢子虫病，主要以腹泻为主，严重时可危及生命。十二指肠贾第虫是重要的人兽共患性寄生虫，寄生于人体的胆囊和小肠，主要寄生于十二指肠，引起的疾病为贾第虫病，临床表现主要为腹痛、腹泻、腹胀、呕吐、发热和厌食等。微小隐孢子虫与十二指肠贾第虫的感染多因水源被其卵囊污染继而引发感染，且其感染的共同症状主要为腹泻，同样均为艾滋病检查的而重要指标之一，所以对微小隐孢子虫与十二指肠贾第虫的检测在公共安全方面尤为重要。羊作为重要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于扩增羊十二指肠贾第虫与微小隐孢子虫双重PCR的nest‑PCR扩增引物，具有以下序列：十二指肠贾第虫PCR引物：F1 ：5'‑CGACCTGACTATGACCAACTC‑3'；R1 ：5'‑GTCCTGAAGCATCTCAACACT‑3'；微小隐孢子虫PCR引物：F2：5'‑CCTTACTCCTTCAGCACCTTATG‑3'；R2 ：5'‑TGTTACGACTTCTCCTTCCTCTAA‑3'；所述的羊十二指肠贾第虫特异基因序列如SEQ No.1所示；所述的羊微小隐孢子虫特异基因序列如SEQ No.4所示。

【技术特征摘要】
1.用于扩增羊十二指肠贾第虫与微小隐孢子虫双重PCR的nest-PCR扩增引物，具有以下序列：十二指肠贾第虫PCR引物：F1：5'-CGACCTGACTATGACCAACTC-3'；R1：5'-GTCCTGAAGCATCTCAACACT-3'；微小隐孢子虫PCR引物：F2：5'-CCTTACTCCTTCAGCACCTTATG-3'；R2：5'-TGTTACGACTTCTCCTTCCTCTAA-3'；所述的羊十二指肠贾第虫特异基因序列如SEQNo.1所示；所述的羊微小隐孢子虫特异基因序列如SEQNo.4所示。2.一种羊十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫双重PCR检测试剂盒，其特征在于：（1）在同一体系中制备羊十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫的PCR反应液：2.5mMdNTPs，终浓度为10pmol/μL的上游引物和下游引物，10×PCRbuffer，rTaqDNA聚合酶，DNA模板和ddH2O；（2）双重PCR引物：十二指肠贾第虫PCR引物：F1：5'-CGACCTGACTATGACCAACTC-3'；R1：5'-GTCCTGAAGCATCTCAACACT-3'；微小隐孢子虫PCR引物：F2：5'-CCTTACTCCTTCAGCACCTTATG-3'；R2：5'-TGTTACGACTTCTCCTTCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫鹏涛，张西臣，高宇航，李显赫，任文陟，李建华，杨举，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22