牛贾第虫、隐孢子虫多重PCR检测试剂盒及其方法技术

本发明专利技术公开一种牛贾第虫、隐孢子虫多重PCR检测试剂盒及其方法，根据十二指肠贾第虫TPI基因、微小隐孢子虫18S rRNA基因与安氏隐孢子虫18S rRNA基因的部分保守序列设计引物，建立三重PCR检测方法，通过优化PCR反应的退火温度等反应条件来提高其灵敏性和准确性，扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳后观察结果方便、快捷。本发明专利技术扩增的三种目的片段在琼脂糖凝胶电泳中大小差异显著，易于区分，且敏感性可达到1×10

【技术实现步骤摘要】
牛贾第虫、隐孢子虫多重PCR检测试剂盒及其方法
本专利技术提供一种同时检测牛十二指肠贾第虫(Giardiaduodenalis,G.duodenalis)、微小隐孢子虫（C.parvum）与安氏微小隐孢子虫(C.andersoni)三重PCR检测方法，本专利技术还提供了该试剂盒的制备方法和用法，属于寄生虫检测

技术介绍
贾第虫（Giardia）与隐孢子虫(Cryptosporidium)属于重要的人兽共患病原虫，隐孢子虫包括微小隐孢子虫（C.parvum）与安氏隐孢子虫(C.andersoni)等，主要引起幼龄动物的消化道和呼吸道疾病，导致其生产性能下降或死亡。贾第虫又分为6种，包括敏捷贾第虫(Giardiaagi-lis)、苍鹭贾第虫(Giardiaardeae)、鹦鹉贾第虫(Giardiapsittaci)、微小贾第虫(Giardiamicroti)、鼠贾第虫(Giardiamuris)和十二指肠贾第虫(Giardiaduodenalis,G.duodenalis)，有些文献也称为蓝氏贾第鞭毛虫(Giardialamblia)或肠贾第虫(Giardiain-testin本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于扩增牛十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫的nest‑PCR扩增引物，具有以下序列：十二指肠贾第虫PCR引物：F1 ：5'‑CGACCTGACTATGACCAACTC‑3'；R1 ：5'‑GTCCTGAAGCATCTCAACACT‑3'；微小隐孢子虫PCR引物：F2：5'‑CCTTACTCCTTCAGCACCTTATG‑3'；R2 ：5'‑TGTTACGACTTCTCCTTCCTCTAA‑3'；安氏隐孢子虫PCR引物：F3：5'‑TACCGTGGCTATGACGGGTA‑3'；R3：5'‑CACCAGACTTGCCCTCCAAT‑3'；所述的牛十二指肠贾第虫特异基因序列如SEQ ...

【技术特征摘要】
1.用于扩增牛十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫的nest-PCR扩增引物，具有以下序列：十二指肠贾第虫PCR引物：F1：5'-CGACCTGACTATGACCAACTC-3'；R1：5'-GTCCTGAAGCATCTCAACACT-3'；微小隐孢子虫PCR引物：F2：5'-CCTTACTCCTTCAGCACCTTATG-3'；R2：5'-TGTTACGACTTCTCCTTCCTCTAA-3'；安氏隐孢子虫PCR引物：F3：5'-TACCGTGGCTATGACGGGTA-3'；R3：5'-CACCAGACTTGCCCTCCAAT-3'；所述的牛十二指肠贾第虫特异基因序列如SEQNo.1所示；所述的微小隐孢子虫特异基因序列如SEQNo.4所示；所述的安氏隐孢子虫特异基因序列如SEQNo.7所示。2.一种牛贾第虫、隐孢子虫多重PCR检测试剂盒，其特征在于：（1）配制牛十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫的PCR反应液：2.5mMdNTPs、终浓度为10pmol/μL的上游引物和下游引物、10×PCRbuffer，rTaqDNA聚合酶、DNA模板和ddH2O；（2）如权利要求1所说牛十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫的三重PCR引物：（3）阳性对照：阳性对照的粪便基因组DNA模板为十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫与安氏微小隐孢子虫基因组DNA，用于比较三重PCR产物以及监测三重PCR操作过程是否正确；（4）...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫鹏涛，张西臣，高宇航，李显赫，任文陟，李建华，杨举，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22