阿坎酸钙在抗SARS冠状病毒感染中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种针对SARS冠状病毒主蛋白酶的化合物。该化合物为阿坎酸钙，对SARS冠状病毒主蛋白酶具有显著的抑制活性，因此本发明专利技术提供的化合物有望成为冠状病毒主蛋白酶的小分子抑制剂。

【技术实现步骤摘要】
阿坎酸钙在抗SARS冠状病毒感染中的应用
本专利技术涉及酶学及药学的
，具体说是阿坎酸钙在抗SARS冠状病毒感染中的应用。
技术介绍
SARS冠状病毒属冠状病毒科，病毒体含单股正链RNA分子.基因组全长为29727个核苷酸，具有典型冠状病毒的11个开放读码结构分别编码纤突蛋白(S)、囊膜蛋白(E)、基质蛋白(M)、复制酶(Rep)及核衣壳蛋白(N)。主要结构蛋白和复制酶基因的排列顺序与其他已知的冠状病毒一致，在5’和3’末端含非常短的非翻译区。2003-04-12，加拿大科研人员率先公布了全球首份SARS冠状病毒基因组序列图谱，4月14日，美国科学家也宣布绘制出SARS冠状病毒基因组序列图。4月16口WHO正式宣布.确认冠状病毒的一个变种是引起SARS的病原体。SARS病毒在外界的生存能力比预想的要强。根据研究结果得知，在人体常见的3种排泄物(痰、粪便、尿液)和血液中，SARS病毒能长时间保持活力。虽然SARS目前没有大规模的爆发，但是其治疗药物至今也没有问世。因此，寻找SARS有效的治疗药物仍是一件具有重大意义的事。
技术实现思路
为了解决现有技术中用于治疗SARS冠状病毒感染的药物疗效不佳的问题，本专利技术提供了阿坎酸钙在SARS冠状病毒感染中的应用。本专利技术提供了针对以SARS冠状病毒为例的冠状病毒主蛋白酶的抑制剂，抑制剂为阿坎酸钙。本专利技术所涉及阿坎酸钙购买于topscience公司。通过设立阴性对照，发现阿坎酸钙对以SARS冠状病毒为例的冠状病毒主蛋白酶都有很好的抑制活性，因此这一类化合物有望作为抑制以SARS冠状病毒为例的冠状病毒主蛋白酶的潜在药物。本专利技术提供一种预防或治疗含有冠状病毒主蛋白酶感染的药物，其活性成分为阿坎酸钙，该药物包含上述含有阿坎酸钙以及一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、增效剂。该药物可制成注射剂、片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂的形式使用。其给药途径可为口服、经皮、静脉或肌肉注射。本专利技术具有的优点和积极效果是：本专利技术提供了针对以SARS冠状病毒为例的冠状病毒主蛋白酶的抑制剂，这种抑制剂为阿坎酸钙。阿坎酸钙对以SARS冠状病毒为例的冠状病毒主蛋白酶活性具有显著的抑制效果。附图说明图1为阿坎酸钙对SARS冠状病毒主蛋白酶抑制作用示意图具体实施方式以下通过具体实施例对本专利技术中的技术方案进行详细说明：本专利技术采用的SARS冠状病毒主蛋白酶的表达、纯化等方法步骤及化合物筛选方法参考文献方法(Rao,Z.H.etal.,PNAS,2003,100,13190-13195)，筛选方法是饶子和等在CN101418334A中公开的筛选方法。SARS冠状病毒主蛋白酶的活性测定采用纯度大于95％的荧光底物MCA-AVLQSGFR-Lys(Dnp)-Lys-NH2作为底物；荧光强度测定的仪器为FluoraskanAscent荧光仪(Thermo),激发光和发射光的波长分别为320nm和405nm；蛋白缓冲液组分为50mMTris,pH＝7.3,1mMEDTA；用缓冲液配置冠状病毒主蛋白酶(终浓度1μM),加入以DMSO溶解的抑制剂(终浓度为10μM),1200rpm震荡15s，30℃孵育3min,迅速加入荧光底物MCA-AVLQSGFRK(DNP)K,底物浓度为20μM，1200rpm震荡5s每2s记录一次荧光读数，共测定150个点。阴性对照为不加抑制剂，其他实验条件均相同。以时间为X轴，荧光值为Y轴可得酶活动力学曲线。通过酶标仪记录的酶反应的相关参数，根据荧光强度以及反应时间，采用GraphPadPrism5软件分析前20s的酶促反应的速率。设定V0为不加抑制剂的酶促反应的初速度，Vi为加抑制剂的酶促反应的初速度。根据酶促反应速率，计算出每个化合物的剩余活性Ra(ResidualActivity,Ra)(Vi/V0)以及抑制率Ir(InhibitionRate,Ir)(1-Vi/V0)。对于剩余活性<20％的化合物进行复筛，排除假阳性的可能。对于剩余活性低于15％的化合物，设计荧光淬灭实验。综合考虑化合物的剩余活性百分率和荧光淬灭率就可以判断化合物对SARS冠状病毒主蛋白酶的抑制效果。因为该体系主要是通过荧光强度筛选，所以，当有荧光的化合物或者是与MCA类似的化合物都会对体系产生干扰。另外，很多Dnp类似的结构会淬灭体系的荧光而造成假阳性，为了排除假阳性结果，我们采用先将蛋白酶与荧光底物反应一段时间，让体系荧光达到最大值Q1、再在体系中加入与实验组等量的化合物，并检测体系的荧光值大小为Q2。将两者的荧光值按照公式计算得出荧光淬灭率Qr((Qr＝Q1-Q2)/Q2*％)。当荧光淬灭率高于20％为假阳性结果需排除，当荧光淬灭率低于20％为阳性结果。以上所述仅为本专利技术的具体实施方式，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本专利技术涉及药学的
，具体说是阿坎酸钙在以SARS冠状病毒为例的冠状病毒感染中的应用，阿坎酸钙在抑制SARS冠状病毒主蛋白酶时候Ir>85％以上,在制备以SARS冠状病毒为例的冠状病毒主蛋白酶的小分子抑制剂方面有很大应用潜力。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.阿坎酸钙在抗SARS冠状病毒感染中的应用，其特征在于：阿坎酸钙的结构式为：

【技术特征摘要】
1.阿坎酸钙在抗SARS冠状病毒感染中的应用，其特征在于：阿坎酸钙的结构式为：2.根据权利要求1所述的阿坎酸钙在制备治疗SARS冠状病毒感染的药物中的应用。3.根据权利要求1所述的阿坎酸钙在制备治疗冠状病毒感染药物中的应用。4.一种治疗冠状病毒感染的药物，其特征在于它包含权利要求书1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨海涛，周凱旋，胡灿，王泽方，陈成，蔡岩，李爽，傅晟，
申请(专利权)人：天津国际生物医药联合研究院，
类型：发明
国别省市：天津,12