一种用细菌发光速测肝脏疾病的试剂盒及其用法制造技术

本发明专利技术涉及发光细菌对人体感染病毒检测的试剂领域，具体涉及一种用细菌发光速测肝脏疾病的试剂盒，所述试剂盒包括提纯防干扰液，发光细菌，发光细菌培养液，效果稳定剂，所述提纯防干扰液由乙醇和十二烷基硫酸钠构成，所述发光细菌为青海弧菌Q67，所述发光细菌培养液由酵母浸出液0.8 g、胰蛋白胨0.8 g、甘油0.3 g、NaCl 3 g、Na2HPO4 0.8 g、KH2PO4 0.8g和蒸馏水100 mL构成，所述效果稳定剂为含有1.8 wt%NaCl溶液，本发明专利技术试剂盒适应于窗口期检测，在肝脏检测领域具有重大的先进意义。

【技术实现步骤摘要】
一种用细菌发光速测肝脏疾病的试剂盒及其用法
本专利技术涉及发光细菌的综合感染病毒检测试剂领域，具体涉及一种用细菌发光速测肝脏疾病的试剂盒和该试剂盒的用法。
技术介绍
2015年3月在土耳其伊斯坦布尔召开的亚太肝脏病年会上发布了首个慢性乙型肝炎(CHB)的预防、关怀和治疗指南(以下简称WHO乙型肝炎防治指南)。与已有的欧洲肝病学会(EASL)、亚太肝病学会(APASL)、美国肝病学会(AASLD)乙型肝炎防治指南不同的是，WHO乙型肝炎防治指南更关注中低收入国家的指南执行能力WHO，乙型肝炎防治指南推荐医疗机构在判读APＲI结果时使用APＲI＞2的单一高值作为肝硬化的诊断依据。但是采用这样的判读标准只能有效诊断约1/3的肝硬化患者，HBV酶联免疫试剂是目前诊断乙肝的主要手段。乙肝“两对半”酶联免疫试剂目前已经普遍用于临床，急诊，血液筛查等各个领域。但是，酶联免疫方法作为一种间接滞后的检测方法，他所检测的目标是人体内产生的抗体而不是病原体本身。因此，虽然酶联免疫方法经过几代的改良和进化，在灵敏度、特异性、精确度和稳定性等方面有了巨大的提高。但是任然不能消除对“窗口期”标本的漏检。所谓“窗口期”，是指从感染病原体开始，直至用酶联免疫学检测方法能够检测到该病原体存在为止的这一段时间。乙肝的“窗口期”比较长，大约为59天，因此，HBV酶联免疫试剂容易造成漏检，不利于乙肝的早期诊断。近年来核酸分子检测技术在检验医学和临床研究中显示出强大的优势，相比较免疫诊断技术具有灵敏度高、特异性强、诊断快速等优点。血清中的HBVDNA是病毒复制和肝炎进程的确切标志，所以血清中HBVDNA的检测，已成为诊断乙肝的“金标准”方法。近几年来，通过荧光定量PCR方法直接检测HBVDNA已经成为一种通用乙肝医学检测方法，大大提高了乙肝的检测准确性，有利于疾病的早期诊断，但是该种检测只是可接近“窗口期”的临近。无法再整个窗口期内适用，同时，也无法对感染程度和发展等级精细准确的检测和预判，也无法为患者提供治疗防御的医学检测基础。目前，国内已有多种其它检测技术应用于临床中，如色谱类技术、化学发光法、比色法、免疫色谱法等；有些则通过多种检测结果的联合作用效果反映肝脏感染病毒的情况。但这些方法都需要昂贵的检测仪器和复杂的前处理，并且由于仪器测定条件变化与检测结果密切相关，需要非常专业的分析测试人员操作。因此，只有专业分析测试机构和研究机构的中心实验室才具备测试条件，需根据检测病例发展到一定的周期才能检测出结果，检测过程复杂，检测成本较高，不适合医疗中快速和预防治疗疾病的需要。
技术实现思路
在
技术实现思路
部分中引入了一系列简化形式的概念，这将在具体实施方式部分中进一步详细说明。本专利技术的
技术实现思路
部分并不意味着要试图限定出所要求保护的技术方案的关键特征和必要技术特征，更不意味着试图确定所要求保护的技术方案的保护范围，下文在说明技术方案方法步骤为例对本专利技术进行描述。为了解决上述之一问题，本专利技术提供了一种用细菌发光速测肝脏疾病的试剂盒，所述试剂盒包括提纯防干扰液，发光细菌，发光细菌培养液，效果稳定剂，所述提纯防干扰液由乙醇和十二烷基硫酸钠构成，所述发光细菌为青海弧菌Q67，所述发光细菌培养液由酵母浸出液0.8g、胰蛋白胨0.8g、甘油0.3g、NaCl3g、Na2HPO40.8g、KH2PO40.8g和蒸馏水100mL构成，所述效果稳定剂为含有1.8wt%NaCl溶液。本专利技术的另一个目的为提供一种使用该试剂盒的方法，包括如下步骤：步骤一.取试剂盒待测的血清样品进行预处理：在待检测血清区域中采用随机多点取样法选取采样点，采集中上层血清内的血样后，将血样混合均匀，置于血清袋后在室温下阴凉处降温，去除表层血脂，排空气后于室温避光保存备用；步骤二.用所述提纯防干扰液对步骤一中的样品进行提纯防干扰处理：称取步骤一制备的血样，过滤膜后用乙醇索氏提取，离心旋转沉淀，加入十二烷基硫酸钠后将该混合物继续离心沉淀备用；步骤三.对提纯防干扰处理后的样品用发光细菌进行感染病毒检测：取加入发光细菌后的发光细菌培养液，加入步骤二中的样品、1.8wt.%NaCl溶液和纯净水，混匀后静置，测定发光强度衰减；步骤四.样品感染病毒的结果算法：测量步骤三静置后混合液的发光强度衰减算出样品的感染程度。进一步地，所述步骤一选取8个采样点。进一步地，所述步骤二中称取3~8g步骤一制备的血样，过2mm滤膜后用乙醇索氏提取16h，离心旋转沉淀至8mL，加入3~8mL十二烷基硫酸钠，然后将混合物继续离心沉淀至8mL备用。进一步地，所述步骤三培养后的发光细菌培养液、样品提纯防干扰液、1.8wt.%NaCl溶液和纯净水的体积比为1：2：4：13。进一步地，所述步骤三取80μL培养后的发光细菌培养液，加入100μL样品提纯防干扰液、200μL1.8wt.%NaCl和680μL纯净水。进一步地，所述步骤三中培养后的发光细菌培养液的制备过程如下：取发光细菌培养液和蒸馏水100mL混合均匀，调节pH值至6.8~7.0；第一代斜面菌种在20℃温度下培养24h后，立即接入第二代斜面培养12h后备用；将上述菌龄满12h的新鲜斜面菌体接入盛有80mL培养液的三角瓶中，接种量不超过1环，20℃、210r/min振荡培养，每2h测定1次培养液发光强度衰减。进一步地，所述步骤三中取培养16~18h后的发光细菌培养液。进一步地，所述步骤三中混匀后静置1.8min。进一步地，所述步骤四中通过HQ-51型生物感染病毒测试仪检处理后测待的样品对对发光细菌的发光强度衰减。本专利技术的有益效果：1.本专利技术采用发光细菌检测试剂盒，构成简单、成本低廉，使用容易，对病毒感染检测速度与传统毒理学方法相比较快，适应整个窗口期的检测精细预判，无需根据检测病例发展到一定的周期才能检测出结果，能实现早诊断早治疗，并能进行综合感染的评价，与色谱检测技术相比，发光细菌法是建立在细菌发光生物传感技术基础上的感染病毒检测技术，具有检测快速、灵敏度高、适应性强以及重复性好等优点，能够适应样品量小的物质的综合感染病毒检测；生物发光是发光细菌生理状况的一个反映,发光细菌在生长对数期发光能力最强。当环境条件不良或有毒物质存在时,因细菌荧光素酶活性或细胞呼吸受到抑制,其发光能力受到影响或减弱,减弱的程度与环境有毒物质感染病毒的大小正相关。因此本方法完全能够用于血清综合感染病毒检测。2.选择乙醇/十二烷基硫酸钠作为提纯防干扰液对样品中的感染病毒物质进行提纯防干扰，先用对感染病毒物质具有很好提纯防干扰效果的乙醇对样品液进行提纯防干扰。由于，乙醇对发光细菌具有强测试影响，因此无法对感染病毒物质提取液直接进行发光度检测。需要再用对发光细菌低毒的十二烷基硫酸钠对感染病毒物质进行萃取，然后用十二烷基硫酸钠最终提取液进行发光度检测。3.本试剂盒及其用法利用发光细菌试剂盒进行检测，样品与发光细菌的反应时间短，能够迅速获得检测结果，适应大批量样品的快速检测，大大缩短了综合感染病毒的检测时间，提高了检测效率和准确度。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显：本专利技术实施方式的下列附图在此作为本专利技术的一部分用于理解本专利技术。附图中示出了本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用细菌发光速测肝脏疾病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括提纯防干扰液、发光细菌、发光细菌培养液、效果稳定剂，所述提纯防干扰液由乙醇和十二烷基硫酸钠构成，所述发光细菌为青海弧菌Q67，所述发光细菌培养液由酵母浸出液0 .8 g、胰蛋白胨0 .8 g、甘油0 .3 g、NaCl 3 g、Na2HPO4 0 .8 g、KH2PO4 0 .8g和蒸馏水100 mL构成，所述效果稳定剂为含有1.8 wt .%NaCl溶液。

【技术特征摘要】
1.一种用细菌发光速测肝脏疾病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括提纯防干扰液、发光细菌、发光细菌培养液、效果稳定剂，所述提纯防干扰液由乙醇和十二烷基硫酸钠构成，所述发光细菌为青海弧菌Q67，所述发光细菌培养液由酵母浸出液0.8g、胰蛋白胨0.8g、甘油0.3g、NaCl3g、Na2HPO40.8g、KH2PO40.8g和蒸馏水100mL构成，所述效果稳定剂为含有1.8wt.%NaCl溶液。2.一种权利要求1所述的用细菌发光速测肝脏疾病的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一.取试剂盒待测的血清样品进行预处理：在待检测血清区域中采用随机多点取样法选取采样点，采集中上层血清内的血样后，将血样混合均匀，置于血清袋后在室温下阴凉处降温，去除表层血脂，排空气后于室温避光保存备用；步骤二.用所述提纯防干扰液对步骤一中的样品进行提纯防干扰处理：称取步骤一制备的血样，过滤膜后用乙醇索氏提取，离心旋转沉淀，加入十二烷基硫酸钠后将该混合物继续离心沉淀备用；步骤三.对提纯防干扰处理后的样品用所述发光细菌进行感染病毒检测：取加入发光细菌后的发光细菌培养液，加入步骤二中的样品、1.8wt.%NaCl溶液和纯净水，混匀后静置，测定发光强度衰减；步骤四.样品感染病毒的结果算法：测量步骤三静置后混合液的发光强度衰减算出样品的感染程度。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤一选取8个采样点。4.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱军，周长赞，许文智，
申请(专利权)人：邱军，
类型：发明
国别省市：山东,37