一种水体中蛙病毒的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种水体中蛙病毒的检测方法，属于病毒检测领域。本发明专利技术结合水体中病毒富集的方法和PCR技术构建出对养殖水体中蛙病毒的检测方法。对NaCl‑AlCl3·6H2O沉淀法富集水体病毒的方法进行改进，缩短富集时间。特异性PCR引物的改进，对大鲵蛙病毒、虎纹蛙病毒、普通产婆蟾病毒和蛙病毒3型病毒等蛙病毒属的主要衣壳蛋白进行多序列比对，对比对序列的保守区域设计引物，从而规避病毒在进化过程中因序列变异而导致检测的假阴性，有效的填补了目前市面上对于水体中蛙病毒检测方法的空白，具有极大的社会效益和经济效益。

【技术实现步骤摘要】
一种水体中蛙病毒的检测方法
本专利技术涉及一种病毒的检测领域，尤其涉及一种水体中蛙病毒的检测方法。
技术介绍
蛙病毒(Ranavirus)是一种危害鱼类、两栖动物和爬行动物的DNA病毒，可感染的养殖动物包括中华鳖、虎纹蛙、黑斑蛙、大鲵和大鳄龟等多种水生经济养殖动物，给水产养殖业造成了巨大的经济损失。该病原可通过水体进行水平传播感染，因此快速检测养殖水体中是否含蛙病毒对指导疾病的防控策略尤为重要。然而目前还未见对养殖水体进行蛙病毒检测方法。
技术实现思路
本专利技术为了解决上述技术问题提供一种水体中蛙病毒的检测方法，填补了目前水体中蛙病毒检测领域的空白。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种水体中蛙病毒的检测方法，包括以下步骤：A、取待测养殖水样用纱布过滤，得滤液；B、将A步骤所得的滤液用酸性试剂将PH调至3-5；C、将B步骤中调好的溶液按照质量比为步骤B中得到的溶液：NaCl：AlCl3·6H2O＝100：1：2.4的比例加入NaCl和AlCl3·6H2O，然后静置3-5h；D、将步骤C中溶液静置后的上清液部分倒掉，再用0.45μL滤膜过滤底部的絮状沉淀；E、将步骤D中过滤后的絮本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水体中蛙病毒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A、取待测养殖水样，用纱布过滤，得滤液；B、将A步骤所得的滤液用酸性试剂将pH调至3‑5；C、向B步骤中得到的溶液中加入NaCl和AlCl3·6H2O，然后静置3‑5h，步骤B得到的溶液：NaCl：AlCl3·6H2O三者的质量比为100：1：(2‑2.4)；D、将步骤C中溶液静置后的上清液倒掉，再用0.45μL滤膜过滤底部的絮状沉淀；E、将步骤D中过滤后的絮状沉淀烘干，放入EP管中，加入PBS缓冲液吹打溶解；F、将步骤E中得到的溶液反复冻融3‑5次，冻融时将样品放到‑80℃的环境下冷冻5min，然后放到37℃的培养箱等待完全融化，吸取...

【技术特征摘要】
1.一种水体中蛙病毒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A、取待测养殖水样，用纱布过滤，得滤液；B、将A步骤所得的滤液用酸性试剂将pH调至3-5；C、向B步骤中得到的溶液中加入NaCl和AlCl3·6H2O，然后静置3-5h，步骤B得到的溶液：NaCl：AlCl3·6H2O三者的质量比为100：1：(2-2.4)；D、将步骤C中溶液静置后的上清液倒掉，再用0.45μL滤膜过滤底部的絮状沉淀；E、将步骤D中过滤后的絮状沉淀烘干，放入EP管中，加入PBS缓冲液吹打溶解；F、将步骤E中得到的溶液反复冻融3-5次，冻融时将样品放到-80℃的环境下冷冻5min，然后放到37℃的培养箱等待完全融化，吸取冻融后的溶液，在4℃的温度下采用转速为12000-14000r/min离心4-6min；G、取步骤F离心后的上清液，加入饱和酚，剧烈摇动4-6min，静置4-6min，在4℃的温度下采用转速为12000-14000r/min离心4-6min；H、取步骤G中离心后的上清液，加入相同体积的饱和酚和氯仿，剧烈摇动4-6min，静置4-6min，在4℃的温度下采用转速为12000-14000r/min离心4-6min；I、重复一次步骤H，取最后离心过的上清液加入氯仿，混匀，在4℃的温度下采用转速为12000-14000r/min离心14-16min；J、取步骤I中离心后的上清液，加入体积为上清液体积1-2倍的异丙醇，混匀，静置10-20min，再在4℃的温度下采用转速为12000-14000r/min离心14-16min；K、将步骤J中的上清液倒掉，剩下絮状沉淀用4℃体积浓度为75％的酒精洗涤，在4℃的温度下采用转速为12000-14000r/min离心4-6min；L、将步骤K中的上清液倒掉，剩下絮状沉淀用干...

【专利技术属性】
技术研发人员：耿毅，余泽辉，牟维豪，王世震，白明焕，欧阳萍，陈德芳，黄小丽，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51