一种采用植物微组织直接RT-PCR检测多种植物病毒的方法技术

本发明专利技术公开了一种采用植物微组织直接RT‑PCR检测多种植物病毒的方法，依次包括以下步骤：(1)模板RNA提取和逆转录：在实体显微镜下，用无菌注射器针刺入待检植物组织样品的某一部位(茎、叶柄或根)，并停留2‑3秒，然后将带有植物微组织的无菌注射器针尖直接浸入逆转录混合物中进行反应，以便进行逆转录，得到cDNA；(2)PCR反应：将步骤(1)得到的cDNA进行PCR反应，得到反应产物；(3)结果判断：将步骤(2)所得的反应产物进行电泳分析，得到检测结果；本发明专利技术方法不需要单独步骤来分离提取待检测样品的RNA，能在较短的时间内制备用于PCR反应的RNA模板，方便快捷，且不需要仪器设备；广谱性高，可检测多种植物病毒，大大提高植物病毒检测的效率和准确性。

【技术实现步骤摘要】
一种采用植物微组织直接RT-PCR检测多种植物病毒的方法
本专利技术涉及植物病毒检测
，尤其涉及一种采用植物微组织直接逆转录聚合酶链反应快速检测多种植物病毒的方法。
技术介绍
为了防止植物病毒在国家和地区之间的移动，控制植物病毒性疾病，植物病毒检测在检疫检查中是必要的。长期以来，人们一直致力于开发简单有效的植物病毒检测方法，包括酶联免疫吸附试验(ELISA)，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)(Jamesetal.,2006)、real-timeRT-PCR(Mirmajlessetal.,2015)和逆转录环介导等温扩增(RT-loop-mediatedisothermalamplification，RT-LAMP，Luetal.,2018)，微阵列(Liuetal.,2017)和下一代测序(Jonesetal.,2017)。其中，由于其灵敏度高且操作较简便，RT-PCR的方法已广泛应用于病毒检测(Jamesetal.,2006；Janetal.,2011)。现有的RT-PCR检测植物病毒的过程中，RNA模板的制备需要RNA的分离和纯化。RNA的分离是一项技术性强、耗时长的工本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种采用植物微组织直接RT‑PCR检测多种植物病毒的方法，其特征在于，依次包括以下步骤：(1)模板RNA的提取和逆转录：在实体显微镜下，用无菌注射器针刺入待检植物组织样品的某一部位，并停留2‑3秒，然后将带有植物微组织的无菌注射器针尖直接浸入逆转录混合物中进行反应，以便进行逆转录，得到cDNA；(2)PCR反应：将步骤(1)得到的cDNA进行PCR反应，得到反应产物；(3)结果判断：将步骤(2)所得的反应产物进行电泳分析，得到检测结果。

【技术特征摘要】
1.一种采用植物微组织直接RT-PCR检测多种植物病毒的方法，其特征在于，依次包括以下步骤：(1)模板RNA的提取和逆转录：在实体显微镜下，用无菌注射器针刺入待检植物组织样品的某一部位，并停留2-3秒，然后将带有植物微组织的无菌注射器针尖直接浸入逆转录混合物中进行反应，以便进行逆转录，得到cDNA；(2)PCR反应：将步骤(1)得到的cDNA进行PCR反应，得到反应产物；(3)结果判断：将步骤(2)所得的反应产物进行电泳分析，得到检测结果。2.根据权利要求1所述的采用植物微组织直接RT-PCR检测多种植物病毒的方法，其特征在于：步骤(1)所述待检植物组织样品为已鉴定为感染葡萄卷叶病毒3即GLRav-3、苹果茎沟病毒即ASGV、马铃薯卷叶病毒即PLRV或黄瓜花叶病毒即CMV其中一种的样品。3.根据权利要求1所述的采用植物微组织直接RT-PCR检测多种植物病毒的方法，其特征在于：步骤(1)所述的某一部位为茎、叶柄或根。4.根据权利要求1所述的采用植物微组织直接RT-PCR检测多种植物病毒的方法，其特征在于：步骤(1)所述无菌注射器针大小为26G、25G或23G。5.根据权利要求4所述的采用植物微组织直接RT-PCR检测多种植物病毒的方法，其特征在于：步骤(1)所述无菌注射器针最适大小为26G。6.根据权利要求1所述的采用植物微组织直接RT-PCR检测多种植物病毒的方法，其特征在于：步骤(1)所述逆转录混合物包含5μL5XTRUERTMasterMix和20μLRNase-freeddH20。7.根据权利要求1所述的采...

【专利技术属性】
技术研发人员：李姣，
申请(专利权)人：四川师范大学，
类型：发明
国别省市：四川,51