一种胡椒种质瘟病抗性的鉴定方法技术

本发明专利技术涉及植物生理技术领域，公开了一种胡椒种质瘟病抗性的鉴定方法。该鉴定方法将待检测胡椒切取插条苗进行栽培育苗，在栽培苗胡椒主蔓周围挖一个小穴，把制备好的接种菌包放进小穴内，覆土浇水培养；接种3天后，用接种针在胡椒主蔓地下部分刺伤形成伤口；用无菌水浸湿的无菌棉块为对照；接种10d后开始统计发病级别，每隔10d统计1次，共统计3次，计算平均病情指数，进行胡椒种质抗瘟病性划分。本发明专利技术通过制备接菌包、采用土壤接种以及制定适宜的病情分级和抗瘟病性划分标准来鉴定胡椒种质瘟病抗性，该方法操作简便，能够对胡椒种质抗瘟病性进行更准确的鉴定，可以有效解决在胡椒科研、育种及生产中准确鉴定出抗瘟病较好的胡椒种质的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种胡椒种质瘟病抗性的鉴定方法
本专利技术涉及植物生理
，具体涉及一种胡椒种质瘟病抗性的鉴定方法。
技术介绍
胡椒瘟病是危害胡椒生产的首要病害，也是影响胡椒产业可持续健康发展的重要因素。胡椒瘟病是由疫霉菌(Phytophthoracapsici)感染引起的一种传染力很强的土传性病害，病情严重的胡椒园损失达90％以上，甚至全园毁灭，严重制约着胡椒产业的发展。该病属于土传性病害，彻底根除较为困难，一般采用综合防治的方法，主要以雨季及时排出椒园积水和喷淋化学农药(如甲霜灵、烯酰吗啉等)为主，但长期使用化学农药引发的病原菌抗药性、胡椒产品质量安全及农业生态环境污染等问题日益突出。选育抗病品种是实现胡椒瘟病绿色防控的重要途径之一。开展胡椒种质抗瘟病的评价和筛选是选育胡椒抗瘟病品种的基础。目前国内外关于胡椒种质抗瘟病鉴定采用叶片接种的方法，该方法虽然快速简便，但与胡椒瘟病是土传性病害的属性不相符，难以客观准确反映胡椒种质抗瘟病性状的表现程度。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种胡椒种质瘟病抗性的鉴定方法，使得所述鉴定方法能够对胡椒种质抗瘟病性进行更准确的鉴定，且方法简便。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种胡椒种质瘟病抗性的鉴定方法，包括：步骤1、制备接菌包备用；将待检测胡椒按胡椒种苗标准切取插条苗，进行栽培育苗；步骤2、在距栽培苗胡椒主蔓周围挖一个小穴，把一个所述接种菌包放进小穴内，覆土浇水培养；接种3天后，再用接种针在胡椒主蔓地下部分刺伤形成伤口；用无菌水浸湿的无菌棉块为对照；接种10d后开始统计发病级别，每隔10d统计1次，共统计3次，计算平均病情指数，进行胡椒种质抗瘟病性划分；其中，胡椒整株瘟病病情分级标准如下：0级：整株叶片健康，主蔓基部无病灶；1级：植株下层少数叶片出现病害症状，主蔓基部无病灶；3级：植株上下层均有叶片感病，主蔓基部无病灶；5级：植株长势变差，叶片失绿，无落叶或有少量落叶，主蔓基部局部出现病害症状；7级：植株发生青枯、大量落叶，主蔓基部变黑腐烂；平均病情指数公式如下：平均病情指数＝∑(各级病株数×该病级级值)/(调查胡椒株总数×最高病级值)×100抗瘟病性划分标准如下：免疫：病情指数为0；高抗：病情指数在10以下；抗病：病情指数在11～30；感病：病情指数在31～50；高感：病情指数在51以上。针对现有叶片接种方法鉴定胡椒种质瘟病抗性方法的不准确性，本专利技术形成一套采用土壤接种来鉴定胡椒种质抗瘟病的方法，大大提高了鉴定的准确性，操作简便，为快速准确筛选出抗瘟病性较好的胡椒种质提供了科学方法和理论依据。作为优选，所述步骤1为：制备接菌包备用；将待检测胡椒按胡椒种苗标准切取插条苗，将插条苗在苗床上培育1～2个月后，移植到规格(35～45)×(30～40)cm的育苗袋，栽培育苗1～2个月后备用。为了能够更准确地模拟胡椒瘟病菌的侵染过程，使鉴定更加准确，本专利技术通过制备接菌包来进行待测胡椒种质的侵染。在本专利技术具体实施方式中，所述制备接菌包具体为：将胡椒瘟病菌转接到PDA培养基上培养，用打孔器沿菌落边缘制成菌饼，取无菌棉块，用无菌水浸湿，然后每个无菌棉块上放3个菌饼，包裹起来制成所述接菌包。更具体地，将胡椒瘟病菌转接到PDA培养基上，在27℃条件下培养7d长满培养皿后，用打孔器沿菌落边缘制成直径为1cm菌饼，取长5cm、厚0.4cm的无菌棉块，用无菌水浸湿，然后每个无菌棉块上放3个菌饼，包裹起来制成所述接菌包。其中，所述PDA培养基每升培养基由如下方法配制：200g马铃薯去皮，切块煮沸30min，用纱布过滤后加入16g葡萄糖和20g琼脂，用去离子水定容后加热融化分装，121℃灭菌20min。作为优选，步骤2为：在距栽培苗胡椒主蔓5cm处挖一个宽5cm、深4cm的小穴，把一个所述接种菌包放进小穴内，覆土浇水培养，每隔1d浇水1次；接种3天后，再用接种针在胡椒主蔓地下2cm处刺伤5～8次形成伤口；用无菌水浸湿的无菌棉块为对照；接种10d后开始统计发病级别，每隔10d统计1次，共统计3次；计算平均病情指数，进行胡椒种质抗瘟病性划分。在本专利技术具体实施方式中，本专利技术以巴西树胡椒、中华胡椒、蒌叶、柬埔寨小叶种和印尼大叶种作为待检测胡椒进行鉴定。由以上技术方案可知，本专利技术通过制备接菌包、采用土壤接种以及制定更加合理的病情分级和抗瘟病性划分标准来鉴定胡椒种质瘟病抗性，该方法操作简便，能够对胡椒种质抗瘟病性进行更准确的鉴定，可以有效解决在胡椒科研、育种及生产中准确鉴定出抗瘟病较好的胡椒种质的问题。附图说明图1所示为制备的接菌包；图2所示为接菌包包埋在胡椒主蔓附近小穴内；图3所示为胡椒发病统计病情指数。具体实施方式本专利技术公开了一种胡椒种质瘟病抗性的鉴定方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术所述鉴定方法经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的鉴定方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。以下就本专利技术所提供的一种胡椒种质瘟病抗性的鉴定方法做进一步说明。实施例1：采用本专利技术鉴定方法鉴定多种胡椒种质1、供试材料1.1供试胡椒种质盆栽苗选择抗瘟病表现稳定的胡椒种质：巴西树胡椒、中华胡椒、蒌叶、柬埔寨小叶种和印尼大叶种，均由香饮所胡椒种质圃提供。将以上胡椒种质的插条苗在苗床上培育1个月后，移植到规格40～35cm的育苗袋，盆栽45天后备用。1.2接种菌包的制备：将胡椒瘟病菌转接到PDA培养基上，在27℃条件下培养7d长满培养皿后，用打孔器沿菌落边缘制成直径为1cm菌饼。取长5cm、厚0.4cm的无菌棉块，用无菌水浸湿。然后每个无菌棉块上放3个菌饼，包裹起来做成接种菌包。2、试验方法2.1盆栽鉴定在离盆栽苗胡椒主蔓5cm处挖一个宽5cm、深4cm的小穴，把一个接种菌包放进小穴内，覆土浇水培养，每隔1d浇水1次。接种3天后，再用接种针在胡椒主蔓地下2cm处刺伤5～8次形成伤口。用无菌水浸湿的无菌棉块为对照。每份胡椒种质选取10棵盆栽苗，重复3次。接种10d后开始统计发病级别，每隔10d统计1次，共统计3次。计算平均病情指数，进行胡椒种质抗瘟病性划分。胡椒整株瘟病病情分级标准：0级：整株叶片健康，主蔓基部无病灶；1级：植株下层少数叶片出现病害症状，主蔓基部无病灶；3级：植株上下层均有叶片感病，主蔓基部无病灶；5级：植株长势变差，叶片失绿，无落叶或有少量落叶，主蔓基部局部出现病害症状；7级：植株发生青枯、大量落叶，主蔓基部变黑腐烂。平均病情指数＝∑(各级病株数×该病级级值)/(调查胡椒株总数×最高病级值)×100。抗瘟病性划分标准：免疫：病情指数为0；高抗：病情指数在10以下；抗病：病情指数在11～30；感病：病情指数在31～50；高感：病情指数在51以上。2.2田间自然发病鉴定在海南胡椒瘟病进入自然发病盛期的9～11月份，对香饮所胡椒种质圃收集的上述5份胡椒种质，每月下旬进行一次胡椒瘟病自然感病病情指数调查。病情分级标准及病情指数计算方法同上2.1。3、试验结果表1不同胡椒种质抗瘟病鉴定结果表1结果表明：在供试的5份胡椒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胡椒种质瘟病抗性的鉴定方法，其特征在于，包括：步骤1、制备接菌包备用；将待检测胡椒按胡椒种苗标准切取插条苗，进行栽培育苗；步骤2、在栽培苗胡椒主蔓周围挖一个小穴，把一个所述接种菌包放进小穴内，覆土浇水培养；接种3天后，再用接种针在胡椒主蔓地下部分刺伤形成伤口；用无菌水浸湿的无菌棉块为对照；接种10d后开始统计发病级别，每隔10d统计1次，共统计3次，计算平均病情指数，进行胡椒种质抗瘟病性划分；其中，胡椒整株瘟病病情分级标准如下：0级：整株叶片健康，主蔓基部无病灶；1级：植株下层少数叶片出现病害症状，主蔓基部无病灶；3级：植株上下层均有叶片感病，主蔓基部无病灶；5级：植株长势变差，叶片失绿，无落叶或有少量落叶，主蔓基部局部出现病害症状；7级：植株发生青枯、大量落叶，主蔓基部变黑腐烂；平均病情指数公式如下：平均病情指数＝∑(各级病株数×该病级级值)/(调查胡椒株总数×最高病级值)×100抗瘟病性划分标准如下：免疫：病情指数为0；高抗：病情指数在10以下；抗病：病情指数在11～30；感病：病情指数在31～50；高感：病情指数在51以上。

【技术特征摘要】
1.一种胡椒种质瘟病抗性的鉴定方法，其特征在于，包括：步骤1、制备接菌包备用；将待检测胡椒按胡椒种苗标准切取插条苗，进行栽培育苗；步骤2、在栽培苗胡椒主蔓周围挖一个小穴，把一个所述接种菌包放进小穴内，覆土浇水培养；接种3天后，再用接种针在胡椒主蔓地下部分刺伤形成伤口；用无菌水浸湿的无菌棉块为对照；接种10d后开始统计发病级别，每隔10d统计1次，共统计3次，计算平均病情指数，进行胡椒种质抗瘟病性划分；其中，胡椒整株瘟病病情分级标准如下：0级：整株叶片健康，主蔓基部无病灶；1级：植株下层少数叶片出现病害症状，主蔓基部无病灶；3级：植株上下层均有叶片感病，主蔓基部无病灶；5级：植株长势变差，叶片失绿，无落叶或有少量落叶，主蔓基部局部出现病害症状；7级：植株发生青枯、大量落叶，主蔓基部变黑腐烂；平均病情指数公式如下：平均病情指数＝∑(各级病株数×该病级级值)/(调查胡椒株总数×最高病级值)×100抗瘟病性划分标准如下：免疫：病情指数为0；高抗：病情指数在10以下；抗病：病情指数在11～30；感病：病情指数在31～50；高感：病情指数在51以上。2.根据权利要求1所述鉴定方法，其特征在于，步骤1为：制备接菌包备用；将待检测胡椒按胡椒种苗标准切取插条苗，将插条苗在苗床上培育1～2个月后，移植到规格(35～45)×(30～40)cm的育苗袋，栽培育苗1～2个月后备用。3.根据权利要求1或2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：桑利伟，刘爱勤，高圣风，孙世伟，苟亚峰，王政，孟倩倩，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院香料饮料研究所，
类型：发明
国别省市：海南,46