用于检测至少一个第一抑制区存在或不存在的方法技术

用于检测至少一个抑制区的存在或不存在的方法，所述方法包括由下述组成的步骤：沿着设置区设置一定体积的液体形式的样品，所述设置区沿着在琼脂培养基的表面处的轴线延伸，和由下述组成的步骤：将确定量的化学试剂设置在琼脂培养基的表面处，所述设置限定了潜在的抑制区，所述样品的设置区的轴线与潜在的抑制区相交。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测至少一个第一抑制区存在或不存在的方法
本专利技术的
是微生物学的
更具体而言，本专利技术涉及在化学试剂存在下，检测含有或易于含有微生物的样品的至少一个第一抑制区的存在或不存在。更具体而言，本专利技术涉及用于测定微生物对抗生素的敏感性的测试。
技术介绍
常规灵敏度测试是盘扩散测试，通常称为Kirby-Bauer方法。该标准化方法涉及用从微生物分离物获得的一般标准化为0.5McFarland的样品接种琼脂培养基(例如90mm或150mmMueller-Hinton琼脂)。接种可以通过常规手动方法，借助于拭子或环进行。可替代地，接种可以通过将琼脂用标准化至0.5McFarland的十分之一的悬浮液浸没来进行，随后去除过量的样品。在接种之后，在琼脂的表面上设置浸渍有确定浓度的抗生素的一个或多个纸盘。在温育期之后，一般为在35℃下16至20小时，盘周围的抑制区的直径使得能够测定接种样品中存在的微生物对每个盘中浸渍的每种抗微生物剂的敏感性。由于Kirby-Bauer方法的标准化，通过比较每个抑制区的直径与由监管机构如NCCLS(美国国家临床实验室标准委员会(NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards))或EUCAST(欧洲抗微生物药物敏感测试委员会(EuropeanCommitteeonAntimicrobialSusceptibilityTesting))公布的推荐值，来分析这种方法的结果。结果因此通常根据下述三个陈述之一进行分类：敏感、中等或抗性。这些推荐值因此反映在与每种抗生素相关的每种微生物的抑制区大小的相关参考敏感性阈值中。“敏感”意指在抗生素的存在下，由于一定浓度的抗生素，样品中存在的微生物的生长或甚至存活是不可能的。“中等”意指在抗生素的存在下，由于一定浓度的抗生素，微生物的生长受到损害。“抗性”意指在抗生素的存在下，微生物的生长是可能的，至少直到抗生素对于待治疗患者毒性的阈值。用于检测对抗生素的敏感性的另一种方法使用设置在琼脂培养基上的抗生素梯度。为此，用抗生素的浓度梯度浸渍纸或塑料测试条。以这种方式浸泡的测试条是有刻度的，以便指示沿着测试条存在的抗生素浓度值。可以将一个或多个测试条放置在Mueller-Hinton琼脂上，所述Mueller-Hinton琼脂预先以与上述方法相同的方式接种。在温育后，如果样品中存在的微生物对测试条中含有的抗生素敏感，则出现在每个测试条周围的微生物生长的卵圆形抑制区。因此能够推断关于微生物生长的最小抑制浓度(MIC)。使得能够抑制一般保留的微生物生长的抗微生物剂的最小浓度因此是可以直接在抑制区与测试条的长边缘之间的接触点下方的刻度上读取的浓度值。换言之，MIC是在微生物生长区和非生长区之间的边界处，在抑制区的极限处可见的浓度。更具体而言，可以通过记录在其下抑制区的卵形区域与测试条相交的点，并且通过记录相应的刻度来读取MIC。这些方法的缺点是它们难以自动化。特别地，通过浸没的接种步骤需要通过操作者对盘的环形运动和旋转，以便将样品设置物正确地分布在琼脂的整个表面上。这种特殊的运动需要进行其的操作者的一定技术能力，并且特别难以用机器再现。因此，为了以自动化方式进行，该方法需要用于目视检查沉积物的工具，以确保琼脂的整个表面被样品覆盖。可以使用的不同类型的液体样品之间，尤其是在直接获得自血培养物和再悬浮样品的样品之间的粘度变化，也使设置的自动化变得复杂。此外，用于去除过量样品的操作也需要用于精确检测和移液琼脂表面的工具。最后，这种方法需要毫升量级的大量样品，这增加了与通过操作者处理这些样品相关的生物学风险。用拭子或环设置的自动化也是漫长和繁琐的，尤其是为了覆盖培养基的整个表面。此外，从传统的接种方法，无论是盘还是测试条方法开始，抑制区的自动读取是特别困难的。抑制区尤其具有不太明显的对比度的边缘，这可能难以通过成像系统来鉴定。最后，另一个缺点是这些方法需要含有大量生物量的大体积样品，尤其是1ml校准到0.5McFarland的悬浮液。这个量通常需要在肉汤的存在下或在琼脂培养基上预先温育样品的先前步骤，以便能够收获必要量的微生物菌落。该先前步骤因此延迟了从业者可以作出适合于存在的微生物类型的抗生素治疗选择的时间。因此在等待敏感性结果的同时施用广谱抗生素是常见的，这种选择有时证明是无效的并且已知有利于抗性微生物的出现。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是因此提出用于检测至少一个第一抑制区的存在或不存在的方法，使得能够使用与常规方法相比减少量的待接种的生物量，并且因而使得可以减少产生这种生物量所需的预温育时间。更具体而言，期望能够可靠且快速地表征样品中存在或易于存在的微生物对化学试剂存在的应答。该应答优先获得自少于6小时的培养，重悬浮于小体积的缓冲液中。本专利技术的第二个目的是提出可以容易地自动化的方法，尤其是包括快速、可靠和可重复的设置样品和读取抑制区的步骤。为此，本专利技术涉及用于检测至少一个抑制区的存在或不存在的方法，所述方法包括由下述组成的步骤：a.提供琼脂培养基；b.提供液体形式的含有或易于含有微生物的样品；c.沿着设置区设置一定体积的液体形式的样品，所述设置区沿着在琼脂培养基的表面处的轴线延伸；d.将确定量的化学试剂设置在琼脂培养基的表面处，所述设置限定了潜在的抑制区，所述样品的设置区的轴线与潜在的抑制区相交；e.温育所述琼脂培养基；f.测定所述第一抑制区的存在或不存在。例如，如果微生物对化学试剂的敏感性是未知的，和/或如果微生物是未知的，和/或如果微生物在样品中的存在是未知的，则潜在的抑制区的大小可以被定义为琼脂的表面积。在另一种情况下，其中微生物的类型例如属、种或亚种是已知的，这种信息使得能够从监管机构(如NCCLS(美国国家临床实验室标准委员会)或EUCAST(欧洲抗微生物药物敏感测试委员会))的建议中获得关于对化学试剂的假定敏感性的信息。对于由化学试剂和给定的微生物形成的每一对，这些建议呈现了在温育给定时间后的潜在抑制区的大小，取决于微生物对化学试剂是敏感、中等还是抗性。因此，根据本专利技术的有利的检测方法，样品含有已知类型的微生物的培养物，潜在抑制区的面积然后由所述类型的微生物限定。样品的设置步骤尤其可以借助于机器臂或移液机器人来自动化，所述机器臂或移液机器人具有根据三个自由度平移移动的工具支架，例如MicrolabStar移液器。用于测定抑制区的存在的步骤可以尤其借助于包括光源和捕获工具的检测装置来进行，以便捕获设置在培养基上的样品的图像，然后通过进行目视检查或以这种方式获得的图像的自动化处理。本专利技术的优点因此是能够提出可以容易自动化的方法，尤其是因为设置一定体积的液体形式的样品的步骤根据沿着在琼脂培养基的表面处的轴线延伸的设置区进行。可编程的自动化设备因此很容易沿着轴线进行该设置步骤，所述轴线的坐标被预先编程或通过常规成像方法确定。此外，由于样品以及因此的抑制区位于培养基中更受限的区中的事实，所以与浸没或环接种的常规方法相比，读取检测方法的结果也得到极大促进。样品的设置轴线因此将是直线的，或者甚至是大致直线的。如果样品设置在紧邻化学试剂的设置区，则可以设想使用直线的连续部分、曲线部分或曲线的设置轴线的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测至少一个抑制区(9)存在或不存在的方法，所述方法包括由下述组成的步骤：a.提供琼脂培养基(2)；b.提供液体形式的含有或易于含有微生物的样品(1)；c.沿着设置区(8)设置一定体积的液体形式的样品(1)，所述设置区(8)沿着在琼脂培养基的表面处的轴线(7)延伸；d.将确定量的化学试剂(5)设置在琼脂培养基(2)的表面处，所述设置限定了潜在的抑制区(6)，所述样品的设置区的轴线与所述潜在的抑制区相交；e.温育所述琼脂培养基(2)；f.测定所述第一抑制区(9)的存在或不存在。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.09 FR 15564901.一种用于检测至少一个抑制区(9)存在或不存在的方法，所述方法包括由下述组成的步骤：a.提供琼脂培养基(2)；b.提供液体形式的含有或易于含有微生物的样品(1)；c.沿着设置区(8)设置一定体积的液体形式的样品(1)，所述设置区(8)沿着在琼脂培养基的表面处的轴线(7)延伸；d.将确定量的化学试剂(5)设置在琼脂培养基(2)的表面处，所述设置限定了潜在的抑制区(6)，所述样品的设置区的轴线与所述潜在的抑制区相交；e.温育所述琼脂培养基(2)；f.测定所述第一抑制区(9)的存在或不存在。2.根据权利要求1的方法：-其中借助于预定的设置技术设置所述体积的样品，所述设置技术对于一定体积的液体形式的样品中的微生物的给定生物量，适于将所述体积设置在琼脂培养基的最大表面积上，以便获得大于预定阈值的基本上均匀的微生物表面密度；-其中借助于粗制样品的预培养来获得所述样品，所述预培养包括微生物菌株的分离阶段，随后为所述菌株的温育阶段，以便增加微生物的生物量，所述生物量取决于温育的持续时间；和-其中所述粗制样品的温育持续时间选择为小于10小时，选择由预限定的设置技术设置的所述体积的样品的表面积，以获得所述密度。3.根据权利要求2的方法，其中获得用于在所述密度下设置在所述琼脂培养基的整个表面上的足够生物量所必要的温育持续时间大于20小时。4.根据前述权利要求的检测方法，所述样品包含已知类型的微生物的培养物，所述潜在的抑制区的面积由所述类型的微生物限定。5.根据前述权利要求之一的检测方法，其特征在于，所述步骤c)由下述组成：c.沿着设置区以连续线设置一定体积的液体形式的样品，所述设置区沿着在所述琼脂培养基的表面处的轴线延伸。6.根据前述权利要求的方法，其特征在于，所述样品的浓度在0.0005McFarland和0.5McFarland之间。7.根据前述权利要求之一的检测方法，其特征在于，所述步骤c)由下述组成：c.沿着设置区以液滴设置一定体积的液体...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·德拉泽克，A·杜邦菲拉德，F·平斯通，H·罗斯坦，
申请(专利权)人：生物梅里埃公司，
类型：发明
国别省市：法国,FR