一种卵裂培养液及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种卵裂培养液及其制备方法，属于人类辅助生殖技术领域。本发明专利技术所述的卵裂培养液是向盐溶液内添加将丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、硫辛酸、透明质酸和螯合剂，不仅可以有效地保持胚胎的活力和营养，而且，螯合剂还可以螯合一些非必要的重金属离子，降低培养液的毒性，有利于促进早期胚胎的发育，提高辅助生殖技术的成功率，也为辅助生殖技术的安全性提供了有力保证。

【技术实现步骤摘要】
一种卵裂培养液及其制备方法
本专利技术涉及一种卵裂培养液及其制备方法，属于人类辅助生殖

技术介绍
人类辅助生殖技术中，卵裂培养液主要应用于胚胎的早期培养流程。目前，临床使用的常规的卵裂培养液为仅以碳酸氢钠为缓冲剂的人输卵管盐溶液(HTF)，不能有效地确保胚胎的发育，尤其对早期胚胎发育的体外培养效果欠佳。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种各项质控达标的卵裂培养液，不仅能有效地保持胚胎的活力，提高辅助生殖技术的早期胚胎发育率，也为辅助生殖技术的安全性提供有力保证。为解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案是：一种卵裂培养液，其特征在于：是将丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、硫辛酸、透明质酸和螯合剂溶解于含有抗菌素和指示剂的盐溶液中配制而成。优选的：所述盐溶液中，丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸的浓度均为0.02-1.50mmol/L；透明质酸的浓度为0.01-0.50mg/mL；硫辛酸的浓度为0.01-0.30mmol/L；螯合剂适量。优选的：所述的螯合剂为四元羧酸乙二胺四乙酸。优选的：所述抗菌素为庆大霉素，浓度为4-12μg/mL。优选的：所述指示剂为酚红，浓度4.5-10.0μg/mL。优选的：所述盐溶液是以碳酸氢钠为缓冲剂，以钠、钾、镁、钙离子为基础，并以葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、白蛋白为能量物质的化合物溶液；其中包含：氯化钠89.00-108.00mmol/L、氯化钾4.00-6.00mmol/L、硫酸镁0.10-1.20mmol/L、磷酸二氢钾0.3-0.6mmol/L、磷酸二氢钠0.10-0.50mmol/L、氯化钙1.60-2.50mmol/L、碳酸氢钠18.00-26.00mmol/L、葡萄糖0.30-0.80mmol/L、丙酮酸钠0.20-0.60mmol/L、乳酸钠9.00-23.00mmol/L、磷酸二氢钾0.20-0.50mmol/L；所述白蛋白为重组人血清白蛋白，是采用医疗级的重组人血清白蛋白干粉溶解于盐水溶液中制备而成，终浓度为0.0-6.0mg/mL。本专利技术所述卵裂培养液的制备方法，包括以下步骤：1、配制盐溶液：先按照盐溶液的各组分用量称量好各种组分，备用；再将除了抗菌素、指示剂、碳酸氢钠以外的各组分溶于超纯注射级用水中，溶解过程中遵循先固体后液体的原则；所述超纯注射级用水经0.1-0.2μM滤膜过滤，内毒素＜0.015EU/mL；然后，依次加入称量好的抗菌素、指示剂、碳酸氢钠，制得盐溶液；2、检测步骤1所得盐溶液的渗透压和pH值，并记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持为260-285mOsm/Kg，所述pH值保持为7.30-7.80；3、按照预配制的容量，将重组人血清白蛋白按终浓度为0.0-6.0mg/mL补充到盐溶液中；4、将丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸分别以0.02-1.50mmol/L的浓度溶解于盐溶液中；将透明质酸按照0.01-0.50mg/mL的浓度溶解于盐溶液中；将硫辛酸以0.01-0.30mmol/L的浓度溶解于盐溶液中；将适量螯合剂溶解于盐溶液中；到充分溶解止；5、将步骤4所得溶液经过0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；测试参数：A、20-30℃条件下pH值：7.30-7.80；B、渗透压：260-285mOsm/Kg；C、内毒素：＜0.15EU/mL；D、一细胞鼠胚培养到96小时：≥80％的囊胚形成率；6、将配制好的溶液在百级GMP车间进行无菌分装和标签。有益效果：本专利技术所述的卵裂培养液是向盐溶液内添加将丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、硫辛酸、透明质酸和螯合剂，不仅可以有效地保持胚胎的活力和营养，而且，螯合剂还可以螯合一些非必要的重金属离子，降低培养液的毒性，有利于促进早期胚胎的发育，提高辅助生殖技术的成功率，也为辅助生殖技术的安全性提供了有力保证。具体实施方式下面结合具体实施实施方式对本专利技术做进一步说明。本专利技术所述的卵裂培养液，是将丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、硫辛酸、透明质酸和螯合剂溶解于含有抗菌素和指示剂的盐溶液中配制而成。所述盐溶液中，丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸的浓度均为0.02-1.50mmol/L；透明质酸的浓度为0.01-0.50mg/mL；硫辛酸的浓度为0.01-0.30mmol/L；所述的螯合剂为四元羧酸乙二胺四乙酸，适量；所述抗菌素为庆大霉素，浓度为4-12μg/mL；所述指示剂为酚红，浓度4.5-10.0μg/mL。所述盐溶液是以碳酸氢钠为缓冲剂，以钠、钾、镁、钙离子为基础，并以葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、白蛋白为能量物质的化合物溶液；其中包含：氯化钠89.00-108.00mmol/L、氯化钾4.00-6.00mmol/L、硫酸镁0.10-1.20mmol/L、磷酸二氢钾0.3-0.6mmol/L、磷酸二氢钠0.10-0.50mmol/L、氯化钙1.60-2.50mmol/L、碳酸氢钠18.00-26.00mmol/L、葡萄糖0.30-0.80mmol/L、丙酮酸钠0.20-0.60mmol/L、乳酸钠9.00-23.00mmol/L、磷酸二氢钾0.20-0.50mmol/L；所述白蛋白为重组人血清白蛋白，是采用医疗级的重组人血清白蛋白干粉溶解于盐水溶液中制备而成，终浓度为0.0-6.0mg/mL。本专利技术所述卵裂培养液的制备方法，包括以下步骤：1、配制盐溶液：先按照盐溶液的各组分用量称量好各种组分，备用；再将除了抗菌素、指示剂、碳酸氢钠以外的各组分溶于超纯注射级用水中，溶解过程中遵循先固体后液体的原则；所述超纯注射级用水经0.1-0.2μM滤膜过滤，内毒素＜0.015EU/mL；然后，依次加入称量好的抗菌素、指示剂、碳酸氢钠，制得盐溶液；2、检测步骤1所得盐溶液的渗透压和pH值，并记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持为260-285mOsm/Kg，所述pH值保持为7.30-7.80；3、按照预配制的容量，将重组人血清白蛋白按终浓度为0.0-6.0mg/mL补充到盐溶液中；4、将丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸分别以0.02-1.50mmol/L的浓度溶解于盐溶液中；将透明质酸按照0.01-0.50mg/mL的浓度溶解于盐溶液中；将硫辛酸以0.01-0.30mmol/L的浓度溶解于盐溶液中；将适量螯合剂溶解于盐溶液中；到充分溶解止；5、将步骤4所得溶液经过0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；测试参数：A、20-30℃条件下pH值：7.30-7.80；B、渗透压：260-285mOsm/Kg；C、内毒素：＜0.15EU/mL；D、一细胞鼠胚培养到96小时：≥80％的囊胚形成率；6、将配制好的溶液在百级GMP车间进行无菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种卵裂培养液，其特征在于：是将丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、硫辛酸、透明质酸和螯合剂溶解于含有抗菌素和指示剂的盐溶液中配制而成。

【技术特征摘要】
1.一种卵裂培养液，其特征在于：是将丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、硫辛酸、透明质酸和螯合剂溶解于含有抗菌素和指示剂的盐溶液中配制而成。2.根据权利要求1所述的卵裂培养液，其特征在于：所述盐溶液中，丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸的浓度均为0.02-1.50mmol/L；透明质酸的浓度为0.01-0.50mg/mL、硫辛酸的浓度为0.01-0.30mmol/L；螯合剂适量。3.根据权利要求2所述的卵裂培养液，其特征在于：所述的螯合剂为四元羧酸乙二胺四乙酸。4.根据权利要求3所述的卵裂培养液，其特征在于：所述抗菌素为庆大霉素，浓度为4-12μg/mL。5.根据权利要求4所述的卵裂培养液，其特征在于：所述指示剂为酚红，浓度4.5-10.0μg/mL。6.根据权利要求5所述的卵裂培养液，其特征在于：所述盐溶液是以碳酸氢钠为缓冲剂，以钠、钾、镁、钙离子为基础，并以葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、白蛋白为能量物质的化合物溶液；其中包含：氯化钠89.00-108.00mmol/L、氯化钾4.00-6.00mmol/L、硫酸镁0.10-1.20mmol/L、磷酸二氢钾0.3-0.6mmol/L、磷酸二氢钠0.10-0.50mmol/L、氯化钙1.60-2.50mmol/L、碳酸氢钠18.00-26.00mmol/L、葡萄糖0.30-0.80mmol/L、丙酮酸钠0.20-0.60mmol/L、乳酸钠9.00-23.00mmol/L、磷酸二氢钾0.20-0.50...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯怀亮，
申请(专利权)人：瑞柏生物中国股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37