一种检测猫白血病病毒的引物对、引物组、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种检测猫白血病病毒的引物对、引物组、试剂盒及应用。所述引物对以外源性FeLV保守的3’LTR核苷酸序列为扩增区域设计而成，具有灵敏度高、特异性好、方便检测等优点。所述引物组包括上述引物对及检测猫内源性白血病病毒的对照引物对，所述引物组能快速、方便、高效地检测外源和内源FeLV，特异性好，灵敏度高。对临床检测和流行病学调查的开展具有指导意义，为宠物市场的安全发展提供一定的保障。

Primer pair, primer group, kit and application for detection of feline leukemia virus

The invention relates to the field of molecular biology, in particular to a primer pair, primer group, reagent kit and application for detecting feline leukemia virus. The primers are designed to amplify the 3'LTR nucleotide sequence conserved by exogenous FeLV, and have the advantages of high sensitivity, good specificity and convenient detection. The primer group includes the primer pair and the control primer pair for detecting the feline endogenous leukemia virus. The primer group can detect the exogenous and endogenous FeLV quickly, conveniently and efficiently, with good specificity and high sensitivity. It has guiding significance for clinical detection and epidemiological investigation, and provides certain guarantee for the safe development of pet market.

【技术实现步骤摘要】
一种检测猫白血病病毒的引物对、引物组、试剂盒及应用
本专利技术涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种检测猫白血病病毒的引物对、引物组、试剂盒及应用。
技术介绍
猫白血病病毒(FeLV)是肿瘤病毒亚科的一种反转录病毒，能导致猫白血病，持续感染可引起严重的免疫抑制、严重非再生性贫血及肿瘤等。FeLV有FeLV-A、FelV-B、FeLV-C和FeLV-T四个亚型。A型几乎存在于所有FeLV感染猫中，可以导致严重的免疫抑制。B型存在于大约50％FeLV感染猫中，可以引起肿瘤。C型仅存在于约1％FeLV感染猫中，可导致严重的贫血。若感染机体后不发生免疫反应，病毒可能会导致持续的病毒血症(40％)成为病毒的携带者。病毒血症通常在FeLV感染2～4周后出现，大约50％患持续病毒血症的猫感染FeLV后在1年内死亡。FeLV存在内源和外源之分，多以“前病毒”形式存在，猫内源性白血病病毒在临床上不致病，功能上很大程度上未知。猫内源性白血病病毒对分子生物学检测FeLV感染存在很大的干扰，很容易出现误诊。至今为止我国未曾有可区分外源和内源FeLV的方法或试剂盒。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种检测猫外源性白血病病毒(FeLV)的引物对，以外源性FeLV保守的3'LTR核苷酸序列为扩增区域，设计出所述引物对，具有灵敏度高、特异性好、方便检测等优点。本专利技术的第二目的在于提供一种检测猫白血病病毒的引物组，所述引物组包括上述引物对及检测猫内源性白血病病毒的对照引物对，所述引物组能快速、方便、高效地检测外源和内源FeLV，特异性好，灵敏度高。本专利技术的第三目的在于提供一种检测猫白血病病毒的试剂盒，其包括如上所述的引物对或引物组，具有包装良好、使用方便的优点。本专利技术的第四目的在于提供如上所述的引物对或引物组或试剂盒在制备猫白血病病毒检测试剂中的应用。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种检测猫外源性白血病病毒的引物对，所述引物对的上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO：1和2所示。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术所述的引物对或引物组通过了对该引物的特异性、敏感性和重复性的试验，证实此引物能用于快速、方便、高效地检测猫白血病病毒，且特异性好，灵敏度高。(2)本专利技术发现猫白血病病毒的内源和外源序列在LTR上的碱基序列不同，内源和外源FeLV均含有编码糖蛋白的gp70基因序列。通过参考与比对GenBank中所有FeLV的LTR和gp70基因序列，分别选择外源性FeLV特异性的3'LTR核苷酸序列和内源性FeLVgp70的保守序列作为扩增区域，设计了两对检测猫外源性和内源性白血病病毒的PCR引物。可减少猫内源性白血病病毒对分子生物学检测FeLV感染存在的干扰，从而降低误诊率。(3)对于临床检测和流行病学调查的开展具有指导意义，为宠物市场的安全发展提供一定的保障。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为一个实施方式中的猫白血病病毒PCR电泳结果图，泳道从左到右分别为M:2000DNAMarker，1：猫内源和外源白血病病毒阳性样品，2：猫外源性白血病病毒阳性样品，3：猫内源性白血病病毒阳性样品，4：空白对照；图2为一个实施方式中的猫白血病病毒特异性检测电泳结果图，泳道从左到右分别为M：2000DNAMarker；1：猫内源和外源白血病病毒阳性样品，2：猫艾滋病病毒，3：猫疱疹病毒，4：猫杯状病毒，5：猫瘟病毒，6：猫冠状病毒；图3为一个实施方式中的猫白血病病毒敏感性检测电泳结果图，泳道从左到右分别为M：2000DNAMarker，1-7代表10-1至10-7的模板稀释度。具体实施方式一种检测猫外源性白血病病毒的引物对，所述引物对的上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO：1和2所示。以外源性FeLV保守的3'LTR核苷酸序列为扩增区域，设计出所述引物对，具有灵敏度高、特异性好、方便检测等优点。一种检测猫白血病病毒的引物组，所述引物组包括如上所述的引物对和对照引物对；所述对照引物对为检测猫内源性白血病病毒的引物对，其上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO：3和4所示。本专利技术发现猫白血病病毒的内源和外源序列在LTR上的碱基序列不同，内源和外源FeLV均含有编码糖蛋白的gp70基因序列。通过参考与比对GenBank中所有FeLV的LTR和gp70基因序列，分别选择外源性FeLV特异性的3'LTR核苷酸序列和内源性FeLVgp70的保守序列作为扩增区域，设计了两对检测猫外源性和内源性白血病病毒的PCR引物,通过对该引物的特异性、敏感性和重复性进行试验，证实此引物能用于快速、方便、高效地检测猫白血病病毒，且特异性好，灵敏度高。一种检测猫白血病病毒的试剂盒，所述试剂盒包括上述的引物对或引物组。在一些实施方式中，所述引物的浓度均为8～12μmol/L。优选地，所述引物的浓度均为10μmol/L。引物在PCR反应体系中的浓度也为8～12μmol/L，优选为10μmol/L。如在一些实施例中，所述浓度还可以为8.5μmol/L、9μmol/L、11μmol/L、11.5μmol/L等，结果在该范围内基本一致。在一些实施方式中，所述试剂盒还包括阴性对照，所述阴性对照为除去所述猫外源性白血病病毒和所述猫内源性白血病病毒之外的其他种类的猫病毒的DNA或cDNA。在一些实施方式中，所述阴性对照为猫艾滋病病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫瘟病毒或猫冠状病毒中的一种或多种DNA或cDNA。优选地，在进行检测时，使用PCR鉴定，PCR产物在相应大小的位置有发亮条带为携带此基因，为降低假阳性和提高检测精确度，增加阴性对照，即待检测基因在相应大小的位置有发亮条带且阴性对照无条带判断为待测样品中含有此基因。在一些实施方式中，所述试剂盒还包括阳性对照，所述阳性对照为含有猫外源性白血病病毒和猫内源性白血病病毒的核酸模板。阳性对照理论上必然会出现发亮条带，若扩增不出条带，表明此次操作失败，应分析原因再次实验，如模板DNA质量不好、仪器问题等问题。阳性对照的设置可用来排除其他实验情况对结果产生的影响，进一步增加检测的准确度。在一些实施方式中，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液、MgCl2、dNTPs、DNA聚合酶、ddH2O、上样缓冲液和DNA分子量内标中的一种或多种。dNTPs即dATP,dCTP,dGTP和dTTP。在一些实施方式中，所述DNA聚合酶选自Taq、Bst、Vent、Phi29、Pfu、Tru、Tth、Tl1、Tac、Tne、Tma、Tih、Tf1、Pwo、Kod、Sac、Sso、Poc、Pab、Mth、Pho、ES4DNA聚合酶、Klenow片段。在一些实施方式中，所述DNA聚合酶为TaqDNA聚合酶。上述的引物对或引物组或试剂盒，在制备猫白血病病毒检测试剂中的应用。一种检测鉴定猫外源性和内源性白血病病毒的方法，包括：提取待测样品中的DNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测猫外源性白血病病毒的引物对，其特征在于，所述引物对的上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和2所示。

【技术特征摘要】
1.一种检测猫外源性白血病病毒的引物对，其特征在于，所述引物对的上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO：1和2所示。2.一种检测猫白血病病毒的引物组，其特征在于，所述引物组包括权利要求1所述的引物对和对照引物对；所述对照引物对为检测猫内源性白血病病毒的引物对，其上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO：3和4所示。3.一种检测猫白血病病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对或权利要求2所述的引物组。4.根据权利要求3所述的检测猫白血病病毒的试剂盒，其特征在于，所述引物的浓度均为8～12μmol/L；优选地，所述引物的浓度均为10μmol/L。5.根据权利要求3所述的检测猫白血病病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性对照，所述阴性对照为除去所述猫外源性白血病病毒和所述猫内源性白血病病毒之外的其他种类的猫病毒的DNA或cDNA；优选地，所述阴性对照为猫艾滋病病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫瘟病毒或猫冠状病毒中的一种或多种...

【专利技术属性】
技术研发人员：安娜，张伟伟，刘潇然，蒋勤军，
申请(专利权)人：联宠科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11