一种基因VI型新城疫病毒强毒株的荧光RT-PCR检测方法技术

本发明专利技术属于动物病原检测技术领域，涉及一种基因VI型新城疫病毒强毒株的荧光RT‑PCR检测方法，先设计针对基因VI型新城疫病毒强毒株F基因的荧光RT‑PCR扩增引物和探针；再提取待测样品核糖核酸(RNA)，用扩增引物和探针进行荧光RT‑PCR反应，根据荧光RT‑PCR扩增曲线和Ct值判定样品中是否含有基因VI型新城疫病毒强毒株；本发明专利技术具有特异性强、灵敏度高、操作简便等特点，可实现基因VI型新城疫病毒强毒株快速检测，满足疫病早期诊断和疫情监测的需要，便于基层操作和推广应用。

Detection of a new virulent strain of Newcastle disease virus VI gene by fluorescence RT-PCR

The invention belongs to the field of animal pathogen detection technology, and relates to a fluorescent RT_PCR detection method for genotype VI virulent strain of Newcastle disease virus. First, fluorescent RT_PCR primers and probes are designed for F gene of genotype VI virulent strain of Newcastle disease virus, and then RNA is extracted from the sample to be tested and fluoresced with amplified primers and probes. The method has the characteristics of strong specificity, high sensitivity and simple operation, and can realize the rapid detection of virulent Newcastle disease virus strain of genotype VI and meet the needs of early diagnosis and epidemic monitoring. It is convenient for grass-roots operation and popularization and application.

【技术实现步骤摘要】
一种基因VI型新城疫病毒强毒株的荧光RT-PCR检测方法
：本专利技术属于动物病原检测
，具体涉及一种基因VI型新城疫病毒强毒株的荧光RT-PCR检测方法。
技术介绍
：新城疫(Newcastledisease,ND)是由新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)强毒感染引起的一种禽的急性、高度接触性传染病。新城疫传播迅速、死亡率高，是严重危害养禽业的重要疾病之一，已给养禽业造成巨大经济损失。我国农业部将ND列为一类动物疫病，世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告疫病。新城疫病毒具有多样性，根据新城疫病毒致病性差异，可分为弱毒株、中等毒力株和强毒株。根据新城疫病毒遗传学特性可分为两大类(I类和II类)，其中I类新城疫病毒包括10个基因型，均为弱毒株；II类新城疫病毒包括18个基因型，我国分离到的II类新城疫病毒主要为基因I型、II型、VI型、VII型等，其中基因VI型和VII型为强毒株。NDV具有较强的宿主特异性，目前，基因VII型是我国鸡群中流行的优势基因型。1980s后，基因VI型NDV一直在世界范围内的鸽群中流行和传播，并对鸡表现出一定的感染风险本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因VI型新城疫病毒强毒株的荧光RT‑PCR检测方法，其特征在于先进行引物和探针设计，设计针对基因VI型新城疫病毒强毒株F基因的荧光RT‑PCR扩增引物和探针，再提取待测样品核糖核酸，用扩增引物和探针进行荧光RT‑PCR反应，根据荧光RT‑PCR扩增曲线和Ct值判定样品中是否含有基因VI型新城疫病毒强毒株。

【技术特征摘要】
1.一种基因VI型新城疫病毒强毒株的荧光RT-PCR检测方法，其特征在于先进行引物和探针设计，设计针对基因VI型新城疫病毒强毒株F基因的荧光RT-PCR扩增引物和探针，再提取待测样品核糖核酸，用扩增引物和探针进行荧光RT-PCR反应，根据荧光RT-PCR扩增曲线和Ct值判定样品中是否含有基因VI型新城疫病毒强毒株。2.根据权利要求1所述的一种基因VI型新城疫病毒强毒株的荧光RT-PCR检测方法，其特征在于所述的引物设计：选取II类新城疫强毒株和弱毒株的F基因序列，根据MEGA软件的核苷酸序列比对结果，其中II类新城疫强毒株包括基因III型、VI型、VII型、XII型，II类新城疫弱毒株包括有基因I型、II型；通过PrimerPremier软件设计针对基因VI型新城疫病毒强毒株的上游引物、下游引物和探针，上游引物、下游引物扩增片段长度为223bp，探针5’端连接荧光基团，3’端连接淬灭基团，引物和探针序列分别为：上游引物：5’-CTCAGACAGGGTCAATCATAGT-3’；下游引物：5’-GCAACCCCAAGAGCTACA-3’；探针：5’-ATGAAGCGCTTCTGCCTCCTTCCTCC-3’。3.根据权利要求2所述的一种基因VI型新城疫病毒强毒株的荧光RT-PCR检测方法，其特征在于所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王静静，吕艳，罗瑶瑶，赵云玲，郑东霞，刘华雷，王志亮，
申请(专利权)人：中国动物卫生与流行病学中心，
类型：发明
国别省市：山东,37