The invention discloses a rapid genotyping detection kit for human parainfluenza virus without nucleic acid extraction, which comprises a PCR amplification reagent and a control reagent. The PCR amplification reagent is composed of a PCR reaction buffer A, an enzyme B and a HPIV1/2/3/4 primer probe mixture. The control reagent is mainly composed of a negative control and a positive control group. . The invention has the advantages of direct amplification of samples, multiple detection speed, high sensitivity and good specificity.
【技术实现步骤摘要】
一种人副流感病毒核酸免提取基因分型检测试剂盒
本专利技术涉及生物技术和医学领域，具体来说是一种人副流感病毒核酸分型检测试剂盒。
技术介绍
人副流感病毒(humanparainfluenzavirus，HPIV)属副粘病毒科，为负性单链RNA病毒，是常见的社区获得性呼吸道感染病原，因其诸多特性与流感病毒不同，且又陆续分离得到其他毒株，故被命名为副流感病毒，根据遗传学和血清学特征，HPIV可分为1型，2型，3型和4型。副流感病毒感染全年均可发生(尤其是第3型),秋季时，哮吼或喉气管支气管炎(第1，2型)可在儿童中流行,较再感染时通常轻度的上呼吸道疾病更为常见。然而，同一型副流感病毒，尤其是第1型和第3型，可引起多次感染。第1和第3型副流感病毒感染常流行发生于托儿所，小学等儿童场所,第3型为地方性流行，传染性强，四季均可发生，多数儿童1岁内可感染,由副流感病毒1型或2型引起的流行性疾病有每年均可发生并交替占主导地位的倾向。通常副流感病毒3型潜伏期为24～48小时，而1型为4～5天。疾病早期有中度咽喉痛和干咳，许多病例声音嘶哑和哮吼症状突出。人副流感病毒存在于呼吸道分泌物...
【技术保护点】
1.一种人副流感病毒核酸免提取、快速基因分型检测试剂盒，其特征在于：包括PCR扩增试剂和对照试剂，所述的PCR扩增试剂由PCR反应缓冲液A、酶系B和HPIV1/2/3/4引物探针混合液构成，所述的对照试剂主要由阴性对照和阳性对照组成。
【技术特征摘要】
1.一种人副流感病毒核酸免提取、快速基因分型检测试剂盒，其特征在于：包括PCR扩增试剂和对照试剂，所述的PCR扩增试剂由PCR反应缓冲液A、酶系B和HPIV1/2/3/4引物探针混合液构成，所述的对照试剂主要由阴性对照和阳性对照组成。2.根据权利要求1所述的一种人副流感病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于：所述的PCR反应缓冲液A的成分为50mMTris-HCl、75mMKCl、3.5mMMgCl2、10mMDTT、3％甲酰胺、0.3mg/mlBSA，所述的酶系B主要由HotStartHiTaqDNA聚合酶、Super-M-MLV反转录酶、RNA酶抑制剂构成，所述的HPIV1/2/3/4引物探针混合液主要由标记不同荧光报告基团的人副流感病毒1/2/3/4的探针和引物按照一定的浓度组合而成。3.根据权利要求2所述的PCR反应缓冲液A中加入3％甲酰胺，作为离子表面活性剂，主要用来破坏细胞膜、释放核酸，使蛋白变性；所述的0.3mg/ml的BSA主要保护taq酶的稳定性和活性，作为PCR的增强剂；所述的RNA酶抑制剂主要是用来防止RNA酶降解裂解的RNA，便于后期cDNA的形成和扩增，其他成分均作为RT-PCR正常扩增成分。4.根据权利要求1所述的一种人副流感病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于：所述的HPIV1型、HPIV2型、HPIV3型、HPIV4型的探针和引物的具体序列和序号如下：HPIV1型上游引物：AGAACTAGGTGTGACAGACACASEQIDNO.1HPIV1型上下游引物：CCCTATCAGCRGTGTCCTSEQIDNO.2HPIV1型上探针：5’-荧光报告集团-CCACTTCTATRGCTCCACCACCTGTG-荧光淬灭集团-3’SEQIDNO.3人副流感病毒2型HPIV2型上游引物：GGCAATGGGCCACAATCAATCSEQIDNO.4HPIV2型下游引物：GCGACCACCATATACAGGAAATSEQIDNO.5HPIV2型探针：5’-荧光报告集团-CCTAGATGATAGATCCCGCTTCCAACTG-荧光淬灭集团-3’SEQIDNO.6HPIV3型上游引物：CATTCATCTGTATCCTCAGAGSEQIDNO.7HPIV3型下游引物：CCACTCCCATTGCATAACTCCSEQIDNO.8HPIV3型探针：5’-荧光报告集团-AGTTGCCTGGTGCGAACTCACCATG-荧光淬灭集团-3’SEQIDNO.9人副流感病毒4型HPIV4型上游引物：CTGAAGAGAGAMGRCTGGCYAAGSEQIDNO.10HPIV4型下游引物：AATTTTCCTKGCATCTGTTTGSEQIDNO.11HPIV4型探针：5’-荧光报告集团-TCYAACATCCTRCCCTGCTGCTTGT-荧光淬灭集团-3’SEQIDNO.12。5.根据权利要求1所述的一种人副流感病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于：所述的荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX、CY3、CY5荧光报告基团，所述的淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、TAMRA荧光淬灭基团。6.根据权利要求1所述的一种人副流感病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于：所述的HPIV1/2/3/4引物探针混合液中，所述的HPIV1型引物探针比例为：SEQIDNO.1：SEQIDNO.2：SEQIDNO.3为400nM：400nM：200nM；所述的HPIV2型引物探针比例为：SEQIDNO.4：SEQIDNO.5：SEQIDNO.6为600nM：600nM：300nM；所述的HPIV3型引物探针比例为：SEQIDNO.7：SEQIDNO.8：SEQIDNO.9为300nM：300n...
【专利技术属性】
技术研发人员：耿合员，汪圣强，吴海磊，易海华，陆正清，钱学铭，于九洋，孙悦，邢琛，秋雯，丁均，曹晓蕴，
申请(专利权)人：中华人民共和国无锡出入境检验检疫局，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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