一种去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法技术

本发明专利技术提供了一种去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法，所述方法利用新型复合型阴离子层析填料Capto adhere，通过层析纯化去除百日咳毒素(Pertussistoxin，PT)和丝状血凝素(Filamentous hemagglutinin，FHA)中的内毒素。所述方法可以在不带入外源物质的前提下，保持有效成分PT和FHA生物活性和回收率的同时，将PT和FHA中的内毒素去除至100 EU/mg以下。所述填料Capto adhere在处理样品时要求缓冲液的电导范围较广，减少了缓冲液置换的过程。相对于其它方法而言，在大批量制备PT和FHA时，使用Capto adhere层析介质去除内毒素是一种合理且高效的方法。

A method for removing endotoxin from acellular pertussis vaccine

The present invention provides a method for removing endotoxin from acellular pertussis component vaccines. The method utilizes capto adhere, a novel composite anion chromatography filler, to purify endotoxin from Pertussis toxin (PT) and filamentous hemagglutinin (FHA) by chromatography. The method can remove the endotoxin in PT and FHA below 100 EU/mg while maintaining the bioactivity and recovery of the active ingredients PT and FHA without introducing foreign substances. The filler Capto adhere requires a wide conductivity range of the buffer solution when processing the sample, thereby reducing the process of buffer replacement. Compared with other methods, capto adhere chromatography is a reasonable and efficient method to remove endotoxin in mass preparation of PT and FHA.

【技术实现步骤摘要】
一种去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法
本专利技术属于生物制药
，特别涉及一种去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法。
技术介绍
百日咳杆菌是百日咳的病原菌，嗜血杆菌属，呈革兰氏阴性，短杆状或椭圆形，百日咳菌可产生外毒素和内毒素，以及其他许多抗原性的生物活性物质。其中内毒素产生于革兰氏阴性菌的细胞外壁，是引起发热等疫苗副反应的物质，新的抗原纯化方法的改进使得内毒素的去除问题显现出来，《英国药典》联合疫苗DTaP的内毒素要求为<100EU/剂，未来国内的质量标准对内毒素的要求也不能低于该规定。因此，无细胞百日咳疫苗生产中应尽量降低内毒素含量，以保证高质量的疫苗生产和使用。内毒素的本质是脂多糖，是热源的活性部分，含3个不同的化学区：包括内层的引起毒性反应的类脂A区、中层的核心寡糖区和外层的特异性多糖链区。内毒素相对分子质量从几千到几万不等，具有耐热性和化学稳定性，性质极不均一，很难找到一种高效且通用的内毒素去除方法，将其一次性彻底去除，有的甚至经过多个步骤处理后，仍然达不到要求。尤其在生物制品生产过程中，需要有严格的工艺控制对内毒素进行去除或者限量控制。百日咳组分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1）将百日咳杆菌发酵液离心，收集上清液经0.45μm滤膜过滤，再经超滤浓缩得到发酵上清，用含尿素的磷酸平衡缓冲液调节发酵上清的pH和电导，调整后样品上样于Capto SP ImpRes柱中，洗脱并分别收集PT组分和FHA组分；2）将步骤1）得到的PT组分继续上样于Capto MMC柱，洗脱得到进一步纯化后的PT组分；3）用含尿素的磷酸平衡缓冲液调节步骤2）收集的进一步纯化后的PT组分和步骤1）收集的FHA组分的pH和电导，而后分别上样于Captoadhere柱中洗脱，通过层析纯化去除内毒素，收集样品穿透峰，即得到...

【技术特征摘要】
1.一种去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1）将百日咳杆菌发酵液离心，收集上清液经0.45μm滤膜过滤，再经超滤浓缩得到发酵上清，用含尿素的磷酸平衡缓冲液调节发酵上清的pH和电导，调整后样品上样于CaptoSPImpRes柱中，洗脱并分别收集PT组分和FHA组分；2）将步骤1）得到的PT组分继续上样于CaptoMMC柱，洗脱得到进一步纯化后的PT组分；3）用含尿素的磷酸平衡缓冲液调节步骤2）收集的进一步纯化后的PT组分和步骤1）收集的FHA组分的pH和电导，而后分别上样于Captoadhere柱中洗脱，通过层析纯化去除内毒素，收集样品穿透峰，即得到目的蛋白PT和FHA。2.根据权利要求1所述的去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法，其特征在于，所述含尿素的磷酸平衡缓冲液为尿素浓度为1.5~2.5mol/L的磷酸平衡缓冲液。3.根据权利要求1所述的去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙明波，梁疆莉，高娜，顾琴，姬秋彦，马艳，李琦涵，史茘，杨净思，姚宇峰，杨晓蕾，车艳春，衡燮，和占龙，赵刚，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：云南,53