液体酶制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及液体酶制剂，特别涉及液体的且稳定的制剂，其包含交联酶和/或酶修饰乳蛋白。本发明专利技术特别涉及液体的且稳定的转谷氨酰胺酶制剂。此外，本发明专利技术涉及用于制备液体酶制剂的方法。

Liquid enzyme preparation and preparation method thereof

The present invention relates to a liquid enzyme preparation, in particular to a liquid and stable preparation comprising crosslinking enzymes and/or enzymatically modified milk proteins. The present invention relates in particular to liquid and stable transglutaminase preparations. In addition, the invention relates to a method for preparing liquid enzyme preparations.

【技术实现步骤摘要】
液体酶制剂及其制备方法本申请是申请日为2012年10月31日、专利技术名称为“液体酶制剂及其制备方法”的中国专利申请201280053784.3(国际申请号PCT/FI2012/051048)的分案申请。专利
本专利技术涉及液体酶制剂，特别涉及液体的且稳定的制剂，其包含交联酶和/或酶修饰乳蛋白质。本专利技术特别涉及液体的且稳定的转谷氨酰胺酶制剂。此外，本专利技术涉及用于制备液体酶制剂的方法。专利技术背景包含交联酶和/或酶修饰乳蛋白，如漆酶、酪氨酸酶、过氧化物酶、巯基氧化酶或葡萄糖氧化酶的酶制剂是均可以通过商业途径在粉末制剂和液体制剂中获得。然而，转谷氨酰胺酶和蛋白谷氨酰胺酶产品目前在市场上仅为粉末形式。粉末酶产品的使用并不被完全接受，这是由于所有生产工厂中存在粉尘形成。因粉尘引起的健康危害尤其已经在工人中引起了担忧。来自茂原链轮丝菌(Streptoverticilliummobaraense)菌株的转谷氨酰胺酶及其制备方法已经公开于欧洲专利号0379606B1中。此外，使用从利迪链霉菌(Streptomyceslydicus)菌株分离的基因产生转谷氨酰胺酶的方法公开于欧洲专利号0777726B1中。与配制酶(如液体形式的转谷氨酰胺酶)相关的问题之一是制剂稳定性的缺乏。此外，与本液体酶制剂相关的缺点之一是它们含有至少一种防腐剂。专利技术简述本专利技术的目标因此是提供包含转谷氨酰胺酶和/或另一乳蛋白交联和/或修饰酶，如漆酶、酪氨酸酶、过氧化物酶、巯基氧化酶、葡萄糖氧化酶或蛋白谷氨酰胺酶的液体酶制剂，其是稳定的且可以在室温或冰箱和/或冷库温度下储存商业制剂所需的时间期限。本专利技术的另一目标是提供包含转谷氨酰胺酶的液体制剂，其是稳定的且可以在室温或冰箱和/或冷库温度下储存商业制剂所需的时间期限。本专利技术的其他目标是提供用于制备稳定的液体酶制剂的方法，所述酶制剂包含转谷氨酰胺酶和/或另一乳蛋白交联和/或修饰酶。本专利技术的甚至其他目标是提供用于制备稳定的液体制剂的方法，所述液体制剂包含转谷氨酰胺酶。通过独立权利要求中给出的制剂和方法完成本专利技术的目标。本专利技术的优选实施方案描述于从属权利要求中。本专利技术的其他目标、细节和优点将从以下详细说明和实施例中变得显而易见。专利技术详述乳蛋白交联和/或修饰酶，如转谷氨酰胺酶、漆酶、酪氨酸酶、过氧化物酶、巯基氧化酶和蛋白谷氨酰胺酶催化乳蛋白的修饰。这些酶的作用之间，进一步与葡萄糖氧化酶的作用之间看起来存在协同作用。不受任何理论的束缚，葡萄糖氧化酶和/或过氧化物酶看起来催化这样的反应，其中通过过氧化氢的形成释放氧气。氧气然后可以催化(氧化)酪氨酸酶的交联。乳蛋白交联和/或修饰酶，如转谷氨酰胺酶、漆酶、酪氨酸酶、过氧化物酶、巯基氧化酶和蛋白谷氨酰胺酶任选地与葡萄糖氧化酶一起用于加工鱼、肉和蛋产品、浆料和pates、水果、浆果和蔬菜、豆制品、谷物制品、面包和烘焙产品的制造。以下乳蛋白交联和/或修饰酶在乳制品或其他食品范畴内的食品加工中是全部相关的。转谷氨酰胺酶是催化蛋白质分子中存在的谷氨酰胺与赖氨酸氨基酸残基之间产生共价键的酶家族(EC2.3.2.13)。当形成键时，会释放氨。来源于真菌和细菌，如真菌白腐菌(Trameteshirsute)的漆酶(EC1.10.3.2)催化碳水化合物与蛋白质之间的交联(氧化芳族化合物和半胱氨酸)，其在食品加工中具有应用，例如用于减少变应原性。酪氨酸酶(EC1.14.18.1)是催化酚类，如酪氨酸氧化的酶，其在食品加工中具有应用，例如用于减少变应原性。过氧化物酶(EC1.11.1.7)是催化芳族化合物氧化的酶家族，其在食品加工中具有应用，例如用于减少变应原性。巯基氧化酶(EC1.8.3.3)催化二硫键的形成、谷胱甘肽的氧化。蛋白谷氨酰胺酶催化蛋白质结合的谷氨酰胺的脱酰胺作用，并将谷氨酰胺转化成谷氨酸。葡萄糖氧化酶催化蛋白质交联的形成和戊聚糖的氧化胶凝。乳蛋白交联和/或修饰酶，如转谷氨酰胺酶、漆酶、酪氨酸酶、过氧化物酶、巯基氧化酶和蛋白谷氨酰胺酶用于乳制品工业，以稳定基于乳的产品结构。除了乳制品工业，这些酶用于加工鱼、肉和蛋产品、浆料和pates、水果、浆果和蔬菜、豆制品、谷物制品、面包和烘焙产品的制造。因此，液体酶制剂适合于例如乳制品、加工鱼、肉、蛋、浆料和pates、水果、浆果和蔬菜、大豆、谷物、面包和烘焙产品的制造。尤其在工业规模的制造中，液体酶制剂的使用比粉末制剂的使用会更实际且更有利。转谷氨酰胺酶在5.2-8的pH范围内是最活跃的。当液化的转谷氨酰胺酶储存在pH5.2或pH8时，该酶快速丧失其活性。在室温或冰箱温度下在pH5.2储存转谷氨酰胺酶7天后，仅剩余一半的活性。本专利技术基于这样的发现，当转谷氨酰胺酶、酪氨酸酶或蛋白谷氨酰胺酶储存在多元醇(如甘油或山梨糖醇)和水的悬浮液中pH范围在4.4-5.1之间时，其活性在室温下的储存过程中适度保持，而在冰箱和/或冷库温度下的储存过程中保持极好。此外，本专利技术基于这样的发现，当转谷氨酰胺酶与蛋白谷氨酰胺酶一起储存在多元醇和水的pH4.6的悬浮液中时，酶的活性在室温下的储存过程中保持适度，而在冰箱和/或冷库温度下的储存过程中保持极好。此外，本专利技术基于这样的发现，当转谷氨酰胺酶与蛋白谷氨酰胺酶和酪氨酸酶一起储存在甘油和水的pH4.6的悬浮液中时，酶的活性在室温下的储存过程中保持适度，而在冰箱和/或冷库温度下的储存过程中保持极好。此外，本专利技术的液体制剂在室温和冰箱和/或冷库温度下的储存过程中在微生物学上也是稳定的。此外，意外地发现，本专利技术的液体酶制剂在冰箱和/或冷库温度下在制剂中没有任何防腐剂的情况下维持其酶活性和微生物学纯度(没有微生物生长)。在一个实施方案中，多元醇-水悬浮液中的液体酶制剂具有范围在4.4-5.1内的pH值。在本专利技术的另一实施方案中，酶制剂的pH在4.4-4.8的范围内。在本专利技术的一个实施方案中，酶制剂的pH是4.4。在本专利技术的另一实施方案中，酶制剂的pH是4.6。在本专利技术的其他实施方案中，酶制剂的pH是4.8。在本专利技术的甚至其他实施方案中，酶制剂的pH是5.1。多元醇，如甘油、山梨糖醇、木糖醇和/或甘露醇可以用于本专利技术的液体酶制剂中。多元醇的混合物，如甘油和其他多元醇的混合物也是可行的。适合于配制本专利技术酶制剂的多元醇与水的悬浮液或两种或多种多元醇与水的混合物可以含有25％高至100％，优选50％高至100％(w/w％)的多元醇，如甘油、山梨糖醇、木糖醇和/或甘露醇。在本专利技术的一个实施方案中，酶溶解在25％多元醇/75％水(w/w)悬浮液中。在本专利技术的另一实施方案中，酶溶解在50％多元醇/50％水(w/w)悬浮液中。在本专利技术的其他实施方案中，酶溶解在75％多元醇/25％水(w/w)悬浮液中。适合于配制本专利技术酶制剂的甘油与水的悬浮液可以含有25％高至100％，优选50％高至100％的甘油。在本专利技术的一个实施方案中，酶溶解在25％甘油/75％水悬浮液中。在本专利技术的另一实施方案中，酶溶解在50％甘油/50％水悬浮液中。在本专利技术的其他实施方案中，酶溶解在75％甘油/25％水悬浮液中。此外，适合于配制本专利技术酶制剂的山梨糖醇与水的悬浮液可以含有25％高至100％，优选50％高至100％的山梨糖醇。在本专利技术的一个实施方案中，酶溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.液体酶制剂，其在包含25％‑100％(w/w)多元醇并具有4.4‑5.1范围内pH值的多元醇‑水悬浮液中包含选自转谷氨酰胺酶、酪氨酸酶或蛋白谷氨酰胺酶的至少一种乳蛋白交联和/或修饰酶，其中选自转谷氨酰胺酶、酪氨酸酶或蛋白谷氨酰胺酶的至少一种乳蛋白交联和/或修饰酶在所述制剂中保持其活性。

【技术特征摘要】
2011.11.01 FI 201160741.液体酶制剂，其在包含25％-100％(w/w)多元醇并具有4.4-5.1范围内pH值的多元醇-水悬浮液中包含选自转谷氨酰胺酶、酪氨酸酶或蛋白谷氨酰胺酶的至少一种乳蛋白交联和/或修饰酶，其中选自转谷氨酰胺酶、酪氨酸酶或蛋白谷氨酰胺酶的至少一种乳蛋白交联和/或修饰酶在所述制剂中保持其活性。2.权利要求1的制剂，其中所述多元醇-水悬浮液包含50％-75％的多元醇。3.权利要求1的制剂，其中所述多元醇是甘油或山梨糖醇。4.权利要求1的制剂，其中pH是4.6。5.权利要求1的制剂，其中所述制剂包含转谷氨酰胺酶和蛋白谷氨酰胺酶。6.权利要求5的制剂，其中所述制剂还包含漆酶和/或酪氨酸酶。7.权利要求1的制剂，其中所述制剂不含防腐剂。8.用于制备液体酶制剂的方法，其中向包含25％-100％(w/w)多元醇并具有4.4-5.1范围内pH值的多元醇-水悬浮液中加入选自转谷氨酰胺酶、酪氨酸酶或蛋白谷氨酰胺酶的至少一种乳蛋白交联和/或修饰酶。9.权利要求8的方法，其中所述方法包括以下步骤：a)利用食品级的酸将多元醇-水悬浮液的pH调整至4.4-5.1的范围内的值，b)向悬浮液中加入选自转谷氨酰胺酶、酪氨酸酶或蛋白谷氨酰胺酶的至少一种乳蛋白交联和/或修饰酶，c)任选地加入防腐剂。10.权利要求8的方法，其中所述方法包括以下步骤：a)向包含25％-100％多元醇的多元醇-水悬浮液中加入选自转谷氨酰胺酶、酪氨酸酶或蛋白谷氨酰胺酶的至少一种乳蛋白交联和/或修饰酶，b)利用食品级的酸将悬...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·拉亚卡里，K·霍塔凯宁，P·米拉里宁，
申请(专利权)人：维利奥有限公司，
类型：发明
国别省市：芬兰,FI