血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物及应用，本发明专利技术的血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物是在血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的结构基础上连接MIPA‑AEEA‑基团而构成的一种肽衍生物。该肽衍生物除保持F56的拮抗血管内皮细胞生长因子(VEGF)与其受体1(VEGFR1)结合作用、具有抗血管生成和抗肿瘤活性外，其作用时间较多肽F56具有明显延长，可用于抗血管生成及抗肿瘤治疗。

Derivatives and application of vascular endothelial growth factor receptor antagonistic peptide F56

The invention provides a derivative of vascular endothelial growth factor receptor antagonist peptide F56 and its application. The derivative of the vascular endothelial growth factor receptor antagonist peptide F56 is a peptide derivative composed of a MIPA_AEEA_group connected to the structure of the vascular endothelial growth factor receptor antagonist peptide F56. In addition to maintaining the binding effect of F56 on vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptor 1 (VEGFR1), the peptide derivative has anti-angiogenesis and anti-tumor activity, and its action time is longer than that of F56. It can be used in anti-angiogenesis and anti-tumor therapy.

【技术实现步骤摘要】
血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物及应用
本专利技术是关于一种血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物及应用，具体地说，本专利技术是关于一种血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物、该衍生物的制备方法、以及该衍生物在抗血管生成及抗肿瘤治疗领域中的应用。
技术介绍
恶性肿瘤的生长和转移有赖于新生血管的形成，如果没有血管的生成，肿瘤将长期处于直径小于1.5～2mm的“休眠”状态。而针对抗血管生成的治疗策略具有抗瘤谱广、不易产生耐药及药物易于到达靶部位等特点，故这一策略已被认为是肿瘤治疗的最有前景的手段之一。抗血管生成药物如VEGF抗体Avastin等已成功用于对肿瘤的治疗。目前在美国已有数十种不同类型的血管生成阻断剂处于不同的临床试验期；国内在该领域的研究与国外有较大差距，进入临床试验且具自主知识产权的血管生成阻断剂也极为有限，急需加强该领域的自主开发研究。在众多促血管生成因子当中，血管内皮细胞生长因子(VascularEndothelialGrowthFactor,VEGF)是公认的主要的诱导血管生成的物质，它能强烈促进血管内皮细胞的有丝分裂和新生血管形成，是肿瘤血管生成的最有效刺激因子，与肿瘤的生长发展密切相关。VEGF不但可通过表达于血管内皮细胞膜上VEGF受体VEGFR1(Flt1)和VEGFR2的结合促进内皮细胞的增殖和血管的生成，进而促进肿瘤的生长和转移，同时也可以作用于肿瘤细胞的VEGF受体，直接促进肿瘤细胞的增殖和侵袭转移因此，VEGF及其受体也成为抗血管生成的最重要靶点。本案专利技术人所在课题组在前期工作中利用VEGF受体VEGFR1筛选噬菌体肽库，获得了一个具有中和VEGF活性及抑制荷瘤小鼠肿瘤生长的含12个氨基酸的多肽F56，该多肽可以通过抑血管生成而发挥抗肿瘤生长和转移作用，有潜在的临床应用前景，相关研究结果已发表在Int.J.Cancer等杂志，并已获得北京市科技进步二等奖(肿瘤细胞的VEGF自分泌及噬菌体肽库中VEGF受体阻断剂的筛选，2004)；作为成果的一部分，在2012年也获得了国家科学技术进步奖一等奖(肿瘤血管生成机制及其在抗血管生成治疗中的应用)。关于多肽F56的应用已分别获得中国专利技术专利权(作为VEGF受体Flt-1拮抗剂的肽，专利技术专利号：ZL01823615.4)及美国专利技术专利权(AntagonistpeptidestoVEGFreceptorFlt-1,专利技术专利号：US7,250,395B2)。然而，虽然多肽F56在体内外实验中表现出良好的抗血管生成及抑制肿瘤生长和转移的作用，但其半衰期过短，这是将其推向临床应用所面临的重要问题。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物，其作用时间较多肽F56具有显著延长。本专利技术的另一目的在于提供所述F56的衍生物的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供所述F56的衍生物的应用。一方面，本专利技术提供了一种血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物。该衍生物是在血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的基础上连接MIPA-AEEA-基团而构成的肽衍生物，本专利技术中亦称其为F56修饰肽或F56修饰多肽。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，是利用MIPA-AEEA-基团中的AEEA-基团(2-amino-ethoxy-2-ethoxyaceticacid)与多肽F56连接，而MIPA-基团(maleimidopropionicacid)在体内正常生理条件下即可与位于白蛋白34位的半胱氨酸进行偶联，形成位置特异的白蛋白修饰肽。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的F56修饰肽，其中，MIPA-AEEA-基团是连接于多肽F56的氨基端、羧基端或中间区域。在本专利技术的一些具体实施方案中，MIPA-AEEA-基团连接于多肽F56的氨基端，构成修饰肽F56-AM，其具体结构为MIPA-AEEA-WHSDMEWWYLLG；在本专利技术的另一些具体实施方案中，MIPA-AEEA-基团连接于多肽F56的氨基酸序列的中间区域，构成修饰肽F56-BM，其具体结构为WHSDMEWK(-AEEA-MIPA)YLLG；在本专利技术的另一些具体实施方案中，MIPA-AEEA-基团连接于多肽F56的羧基端，构成修饰肽F56-CM，其具体结构为WHSDMEWWYLLGK-AEEA-MIPA。其中，MIPA-AEEA结构式为：根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的F56修饰肽具有如下式(1)、式(2)或式(3)所示结构：另一方面，本专利技术还提供了制备所述F56修饰肽的方法。该方法包括：按照从C端到N端的顺序合成所述F56修饰肽结构中的氨基酸序列，并链接Fmoc-NH-PEG2-CH2-COOH和MIPA，制备得到所述F56修饰肽。另一方面，本专利技术还提供了所述F56修饰肽的应用。本专利技术中主要是关于该修饰肽在抗血管生成及抗肿瘤治疗领域中的应用。本专利技术的F56修饰肽，除保持F56的拮抗血管内皮细胞生长因子(以下简称VEGF)与其受体1(以下简称VEGFR1)结合作用、具有抗血管生成和抗肿瘤活性外，其作用时间较多肽F56具有显著延长，可用于抗血管生成和/或抗肿瘤治疗。从而，本专利技术提供了所述的F56修饰肽在制备用于抗血管生成和/或抗肿瘤治疗的制剂中的应用。本专利技术的F56修饰肽，可以在体外温和条件下与人血清白蛋白(HSA)偶联形成复合物，偶联产物经质谱检测可以看到明显的特征峰。三种修饰肽中F56-AM及F56-CM与HSA结合效果更好。此外，专利技术人的研究结果还表明，当F56修饰肽F56-CM与HSA以不同分子比进行体外偶联反应时，偶联产物峰面积也有所不同，当F56-CM过量时，体外反应后存在游离的F56-CM修饰肽。而当F56-CM与HSA以1:1的比例进行反应或HSA过量时，未检测到游离的F56-CM，其与HSA形成稳定的共价复合物。从而，本专利技术还提供了所述的F56修饰肽在制备用于与人血清白蛋白(HSA)偶联形成复合物的制剂中的应用。本专利技术还提供了所述的F56修饰肽与人血清白蛋白(HSA)偶联形成的复合物(或称F56修饰肽与人血清白蛋白的结合物)。本专利技术的F56修饰肽，具有抑制VEGF引起的内皮细胞促管状形成的能力。从而，本专利技术还提供了所述的F56修饰肽在制备用于抑制内皮细胞管状结构形成的制剂中的应用。本专利技术的F56修饰肽，具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的能力。从而，本专利技术还提供了所述的F56修饰肽在制备用于抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的制剂中的应用。本专利技术的F56修饰肽，可以抑制肿瘤的生长。从而，本专利技术还提供了所述的F56修饰肽在制备用于抑制肿瘤生长的制剂中的应用。本专利技术的F56修饰肽，具有抑制肿瘤细胞转移效果。从而，本专利技术还提供了所述的F56修饰肽在制备用于抑制肿瘤细胞转移的制剂中的应用。本专利技术的F56修饰肽或其与人血清白蛋白的结合物，均具有显著的抑制内皮细胞迁移活性。从而，本专利技术还提供了所述的F56修饰肽或其与人血清白蛋白的结合物在制备用于抑制内皮细胞迁移的制剂中的应用。本专利技术的F56修饰肽或其与人血清白蛋白的结合物，均可以抑制VEGF引起的VEGFR1/PI3K磷酸化增强，具有拮抗VEGF与VEGFR1相互作用的活性，能够通过拮抗该通路发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物，该衍生物是在血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的结构基础上连接MIPA‑AEEA‑基团而构成的肽衍生物。

【技术特征摘要】
1.一种血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物，该衍生物是在血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的结构基础上连接MIPA-AEEA-基团而构成的肽衍生物。2.根据权利要求1所述的血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物，其中，MIPA-AEEA-基团连接于多肽F56的氨基端、羧基端或中间区域。3.根据权利要求1所述的血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物，其具有如下式(1)、式(2)或式(3)所示结构：4.一种制备权利要求1～3任一项所述的血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物的方法，该方法包括：按照从C端到N端的顺序合成所述F56修饰肽结构中的氨基酸序列，并链接Fmoc-NH-PEG2-CH2-COOH和MIPA，制备得到所述F56修饰肽。5.权利要求1～3任一项所述的血管内皮细胞生长因子受体拮抗肽F56的衍生物在制备用于抗血管生成和/或抗肿...

【专利技术属性】
技术研发人员：寿成超，赵传科，冯君楠，王立新，
申请(专利权)人：北京市肿瘤防治研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11