一种表达新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎重组病毒株及其构建方法和应用技术

一种表达新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎重组病毒株及其构建方法和应用，涉及重组病毒疫苗领域。本发明专利技术针对利用ILTV非必须基因US9位点开展外源免疫原基因的重组病毒构建和应用的问题，提供了一种传染性喉气管炎病毒重组疫苗株，命名为rILTV△US9‑NDV‑F，微生物保藏号是：CGMCC No.14738，该病毒株是将新城疫病毒F基因(NDV‑F)替换传染性喉气管炎病毒的US9基因，构建获得缺失US9基因并在其相应位置插入NDV‑F表达盒的重组新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎病毒，本发明专利技术获得的重组传染性喉气管炎病毒疫苗株可用于制备预防传染性喉气管炎和其他鸡传染病的疫苗。

Infectious laryngotracheitis recombinant virus strain expressing F protein of Newcastle disease virus and its construction method and Application

An infectious laryngotracheitis recombinant virus strain expressing F protein of Newcastle disease virus and its construction method and application relate to the field of recombinant virus vaccine. Aiming at the problem of constructing and applying recombinant virus with exogenous immunogenic gene by using the US9 locus of the non-essential gene of ILTV, the invention provides a recombinant vaccine strain of infectious laryngotracheitis virus, named rILTV US9_NDV_F, and the microbial preservation number is CGMCC No. 14738, which is the F gene of Newcastle disease virus (NDV). _F) Replaces the US9 gene of infectious laryngotracheitis virus, constructs the infectious laryngotracheitis virus with the recombinant NDV_F protein deleted US9 gene and inserts the NDV_F expression box in its corresponding position. The recombinant infectious laryngotracheitis virus vaccine strain obtained by the present invention can be used to prepare the vaccine strain for preventing infectious laryngotracheitis and other infectious laryngotracheitis. Vaccines for infectious diseases in chickens.

【技术实现步骤摘要】
一种表达新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎重组病毒株及其构建方法和应用
本专利技术涉及重组病毒疫苗领域，具体涉及一种表达新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎重组病毒株及其构建方法和应用。
技术介绍
传染性喉气管炎(InfectiousLaryngotracheitis,ILT)是由传染性喉气管炎病毒(InfectiousLaryngotracheitisvirus,ILTV)引起一种鸡急性上呼吸道病毒性传染病。传染性喉气管炎病毒主要感染鸡呼吸系统，尤其是气管上皮是病毒主要繁殖场所。感染鸡发病时表现为张口呼吸、咳血、结膜炎、流泪等症状，部分强毒感染致死率达100％。本病1925年在美国首次报道后，现已遍及世界许多养鸡地区。本病传播快，死亡率较高，在我国较多地区发生和流行，给养鸡业造成巨大经济损失，是危害养鸡业的重要疫病之一。传染性喉气管炎病毒的自然感染仅限于鸡，幼龄火鸡、野鸡、鹌鹑和孔雀也可感染，但以成年鸡症状最为特征。鸭、鸽、珍珠鸡、麻雀及所有哺乳动物不易感。病鸡、康复后的带毒鸡和无症状的带毒鸡是主要传染来源。传染性喉气管炎病毒与其它疱疹病毒一样，ILTV的潜伏和激活都可以引起该病在鸡群中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎重组病毒株，名称为rILTV△US9‑NDV‑F株，其微生物保藏号是：CGMCC No.14738。

【技术特征摘要】
1.一种表达新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎重组病毒株，名称为rILTV△US9-NDV-F株，其微生物保藏号是：CGMCCNo.14738。2.根据权利要求1所述的表达新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎重组病毒株，其特征在于，所述传染性喉气管炎重组病毒株缺失传染性喉气管炎病毒US9基因，该缺失位置插入NDV-F表达盒；所述NDV-F表达盒由CMV启动子、NDV-F基因以及PolyA终止子组成；所述US9基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，所述NDV-F表达盒的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，所述NDV-F表达盒上下游分别连有位于传染性喉气管炎病毒US9基因开放阅读框ORF两侧的侧翼序列：左同源臂US9L，其核苷酸序列如SEQIDNO:5所示；右同源臂US9R，核苷酸序列如SEQIDNO:6所示。3.一种权利要求1或2所述的表达新城疫病毒F蛋白的传染性喉气管炎重组病毒株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建含有EGFP表达盒的重组转移载体：通过PCR扩增分别获得传染性喉气管炎病毒US9基因开放阅读框ORF两侧的侧翼序列，即左同源臂US9L和右同源臂US9R；将左同源臂US9L、右同源臂US9R分别插入PUC18载体中，获得中间载体pILT△US9；然后插入EGFP表达盒，获得重组转移载体pILTΔUS9-EGFP，该载体中EGFP表达盒上下游分别连有左同源臂US9L与右同源臂US9R；所述EGFP表达盒是从pEGFP-N1载体上获得的，该表达盒由CMV启动子、增强型绿色荧光蛋白EGFP基因以及PolyA终止子组成；所述EGFP表达盒的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示；(2)提取传染性喉气管炎病毒的完整基因组DNA；(3)利用步骤(1)中获得的重组转移载体pILTΔUS9-EGFP与步骤(2)中获得的传染性喉气管炎病毒的完整基因组DNA共转染LMH细胞，通过蚀斑纯化法获得表达EGFP的传染性喉气管炎重组病毒；(4)构建NDV-F表达盒的重组转移载体：通过PCR扩增获得表达新城疫病毒F蛋白基因，将步骤(1)所述pILTΔUS9-EGFP重组载体中EGFP基因切除，然后插入上述新城疫病毒F蛋白基因，获得重组转移载体pILTΔUS9-NDV-F，该载体中NDV-F表达盒上下游分别连有左同源臂US9L与右同源臂US9R；所述NDV-F表达盒由CMV启动子、NDV-F基因以及PolyA终止子组成；所述NDV-F表达盒的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示；(5)提取步骤(3)中获得的表达EGFP的传染性喉气管炎重组病毒的完整基因组DNA；(6)利用步骤(4)中获得的重组转移载体pILTΔUS9-NDV-F与步骤(5)中获得的表达EGFP传染性喉气管炎重组病毒的完整基因组DNA共转染LMH细胞，通过蚀斑纯化法获得表达NDV-F的传染性喉气管炎重组病毒株；步骤(1)、(4)所述左同源臂US9L，其核苷酸序列如SEQIDNO:5所示；右同源臂US9R，其核苷酸序列如SEQIDNO:6所示。4.根据权利要求3所述传染性喉气管炎重组病毒株的构建方法，其特征在于，步骤(1)、(4)所述左同源臂US9L与右同源臂US9R序列通过PCR扩增获得，扩增模板为鸡传染性喉气管炎病毒CK/CH/LHLJ/120305株基因组，引物设计所参考的序列GenBank登陆号为NC_006623.1，所述左同源臂US9...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘胜旺，邵昱昊，孙军峰，韩宗玺，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23