本发明专利技术公开了一种重组马立克病毒毒株SCA13株，其生物保藏号为：CGMCC NO.15285，SCA13株基因组中整合有ALV LTR，并能稳定存在。本发明专利技术还基于其BAC克隆，利用Red E/T重组技术缺失meq、vTR基因，构建了MDV SCA13株meq、vTR基因的缺失株，其生物保藏号为：CGMCC NO.15286，基于SCA13株构建的双基因缺失株完全丧失了对鸡的致死性和致肿瘤性，其免疫抑制性也丧失，具有更好的生物安全性，而且具有更好的水平传播能力，可以解决MD疫苗免疫过程中鸡只漏免导致发病的问题，在临床中对鸡群起到更好的免疫保护。
A recombinant Marek virus strain SCA13 and its application
The invention discloses a recombinant Marek strain SCA13 strain, whose biological preservation number is CGMCC NO.15285, and the genome of SCA13 strain is integrated with ALV LTR and can be stable. Based on its BAC clone, the deletion of the MDV SCA13 strain mEq and the vTR gene was constructed using the Red E/T recombination technique and the deletion of the mEq and vTR genes. The biological preservation number was CGMCC NO.15286. The double gene deletion plant based on the SCA13 strain completely lost the lethality and tumorigenality of the chicken, and its immunosuppression was also lost, With better biological safety and better ability of horizontal transmission, it can solve the problem of the disease caused by the only leakage and exemption of chicken in the immune process of MD vaccine, and better protect the chicken in the clinic.
【技术实现步骤摘要】
一种重组马立克病毒毒株SCA13株及其应用
本专利技术涉及动物病毒学领域，具体涉及一种重组马立克病毒毒株SCA13株及其应用。
技术介绍
马立克病(Marek′sdisease，MD)是由鸡的马立克病病毒(Marek′sdiseasevirus，MDV)引起的鸡的一种肿瘤性疾病，以淋巴细胞增生和肿瘤的形成为主要特征，以外周神经、生殖腺、脏器、免疫器官中单核细胞浸润以及由于外周神经肿瘤细胞的集聚而引起的半瘫痪或完全瘫痪为典型特征(Marek，1907)。MDV归属于α-疱疹病毒亚科中的马立克病毒属，其分为3个紧密联系而又有所不同的血清型，血清Ⅰ型病毒有致病性，可引起T细胞淋巴瘤以及其它病变；血清Ⅱ型与Ⅲ型病毒分别分离自鸡与火鸡体内，没有致病性。Isfort等首次发现将感染禽网状内皮增生病病毒(reticuloendotheliosisvirus，REV)和MDV的鸡胚成纤维细胞连续传代，不同种属的MDV与REV能够进行基因的自然重组。Davidson等采用“热点组合PCR”(hotspot-combinedPCR，orHS-cPCR)的方法从肿瘤病鸡的样品DNA中扩增出了含有REV-LTR片段的MDV的片段，证实在鸡体内同样可以发生MDV和REV间的基因重组。张志等在2001年从中国广西省分离到一株整合有REV的长末端重复序列(Longterminalrepeat,LTR)的MDV重组野毒株。随着细菌人工染色体(BacterialArtificiaIChromsomes，BAC)技术在构建MDV感染性克隆的广泛应用，人们开始关注MDV基因组结构与功能、病毒与宿主的关系以及MDV预防的新型疫苗。基于BAC克隆，利用RedE/T重组技术构建了MDV的多株基因突变株，进一步揭示了MDV的基因功能。2008年美国禽病学专家将MDV超强毒株Md5中主要的致肿瘤基因meq基因敲除掉，获得的meq基因缺失株-rMd5Δmeq完全丧失致病性，而且能提供比MD疫苗CVI988/Rispens更好的免疫保护。2010年，国内实验室敲除掉MDV超强毒GX0101的meq基因，构建的GX0101Δmeq证实完全丧失致瘤性，比CVI988/Rispens具有更好的免疫保护效果。敲除meq基因虽然能够使MDV强毒的致瘤性丧失，但meq基因缺失株仍能引起轻微的免疫抑制。MDV编码的vTR基因与鸡的chTR基因具有88％的同源性，研究表明vTR基因虽然与病毒早期的溶细胞感染没有直接关系，但是影响病毒引起T淋巴细胞瘤的产生。敲除MDV的vTR基因，显著降低病毒的致肿瘤率以及肿瘤大小。国内外尚没有同时敲除MDVmeq、vTR基因的报道。随着MDV疫苗的使用，MDV的毒力和致病性不断增强，已由弱毒株演变为超强毒株、特超强毒株。Witter等人比较了10株新的疫苗候选株但是免疫效果都不如CVI988/Rispens。近年来，一些免疫CV1988/Rispens的鸡群仍时有肿瘤发生，CV1988/Rispens呈现出对MDV野毒不能提供完全保护的趋势；另外，MD疫苗免疫过程中，鸡只的漏免导致感染MDV野毒引起发病，也是鸡群MD频发的常见原因。因此，研制具有更好免疫效果的MD疫苗成为人们的迫切需求。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种重组马立克病毒毒株SCA13株，并基于其BAC克隆，利用RedE/T重组技术缺失meq、vTR基因，构建了MDVSCA13株meq、vTR基因的缺失株，使其完全丧失对鸡的致死性和致肿瘤性，其免疫抑制性也丧失，具有更好的生物安全性及免疫效力。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供一种重组马立克病毒毒株SCA13株，已于2018年1月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其生物保藏号为：CGMCCNO.15285。本专利技术所述的重组马立克病毒毒株SCA13株，在其基因组中整合有禽白血病病毒(avianleukosisvirus，ALV)LTR，并能稳定存在，所述ALVLTR的序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术所述的重组马立克病毒毒株SCA13株属于MDV强毒株，具有致病性和较强的水平传播能力。上述的重组马立克病毒毒株SCA13株在构建MD基因缺失疫苗和/或构建疱疹病毒与反转录病毒的重组模型中的应用也是本专利技术的保护范围。本专利技术的第二方面，提供一种重组马立克病毒meq和vTR双基因缺失株，已于2018年1月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其生物保藏号为：CGMCCNO.15286。本专利技术所述的重组马立克病毒meq和vTR双基因缺失株，是在重组马立克病毒毒株SCA13株的基因组中同时缺失了MDV致病性相关vTR基因和meq基因，其vTR基因序列如SEQIDNo.2所示，meq基因序列如SEQIDNo.3所示。本专利技术所述的重组马立克病毒meq和vTR双基因缺失株为血清I型，命名为MDVSDL161株，其对鸡无致肿瘤性，不引起接种鸡的死亡以及免疫抑制；而且具有更好的水平传播能力，可以解决MD疫苗免疫过程中鸡只漏免导致发病的问题，在临床中对鸡群起到更好的免疫保护。本专利技术的第三方面，提供上述重组马立克病毒meq和vTR双基因缺失株在制备防治鸡马立克病疫苗和/或药物中的用途。本专利技术的第四方面，提供上述重组马立克病毒meq和vTR双基因缺失株在作为载体构建病毒活载体疫苗中的用途。本专利技术的第五方面，上述重组马立克病毒meq和vTR双基因缺失株在禽类宿主中诱导抗鸡马立克病保护性免疫的用途。本专利技术的第六方面，提供一种疫苗组合物，由有效量的上述重组马立克病毒meq和vTR双基因缺失株及药学上接受的载体或佐剂制成。本专利技术的第七面，提供一种鉴别重组马立克病毒meq和vTR双基因缺失株疫苗、MD商品疫苗CVI988/Rispens和814的方法，包括如下步骤：设计两组引物对样品DNA进行PCR扩增，根据扩增情况进行判定；所述第一组引物的序列如SEQIDNO.16和SEQIDNO.17所示；所述第二组引物的序列如SEQIDNO.18和SEQIDNO.19所述。若采用第一组引物能够扩增出215bp条带，采用第二组引物能够扩增出200bp条带，则样品为重组马立克病毒meq和vTR双基因缺失株疫苗；如采用第一组引物不能扩增出条带，采用第二组引物能够扩增出1397bp条带，则样品为MD商品疫苗CVI988/Rispens和814。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术首次提供了一种重组MDVSCA13株，在其基因组中整合了ALVLTR片段，表明ALVLTR能够与MDV发生重组并且稳定存在，为今后重组病毒生物学研究提供了资源，也为今后研究人的疱疹病毒与反转录病毒的重组提供了模型；而且，本专利技术的重组MDVSCA13株具有致病性(属于MDV强毒株，致病性弱于MDV超强毒)和非常强的横向传播能力(即水平传播能力)，为具有更好免疫保护力的MDV疫苗的研制提供了亲本病毒资源。(2)基于本专利技术的重组MDVSCA13株，本专利技术缺失了重组MDVSCA13株的meq基因和vTR基因(各本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组马立克病毒毒株SCA13株，其生物保藏号为：CGMCC NO.15285。
【技术特征摘要】
1.一种重组马立克病毒毒株SCA13株，其生物保藏号为：CGMCCNO.15285。2.根据权利要求1所述的重组马立克病毒毒株SCA13株，其特征在于，其基因组中整合有ALVLTR；所述ALVLTR的序列如SEQIDNO.1所示。3.权利要求1或2所述的重组马立克病毒毒株SCA13株在构建MD基因缺失疫苗和/或构建疱疹病毒与反转录病毒的重组模型中的应用。4.一种重组马立克病毒meq和vTR双基因缺失株，其生物保藏号为：CGMCCNO.15286。5.根据权利要求4所述的组马立克病毒meq和vTR双基因缺失株，其特征在于，其在权利要求1或2所述的重组马立克病毒毒株SCA13株的基因组中同时缺失了MDV致病性相关vTR基因和meq基因，所述vTR基因序列如SEQIDNo.2所示，meq基因序列如SEQIDNo.3所示。6.权利要求4或5所述的重组马立克病...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏帅，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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