诱导人胚胎干细胞定向分化为肝样组织的培养基及诱导方法和应用技术

本发明专利技术属于培养干细胞技术领域，公开了一种体外诱导人胚胎干细胞定向分化为肝样组织的专用培养基及诱导方法和应用。所述专用培养基包括依次使用的分化培养基I，分化培养基II，分化培养基III，分化培养基IV和分化培养基Ⅴ。本发明专利技术还公开了该分化培养基在体外诱导人胚胎干细胞定向分化为肝样组织的应用及其具体方法，利用所述培养基和方法可培养得到肝样组织，改变了现有单一胚层的诱导分化方案，实现多胚层的分化，进而分化成组织类器官，而非单一细胞。本发明专利技术制备得到的肝样组织，具有潜在的临床应用价值，可为药物筛选及肝脏发育等领域提供一个理想的研究平台。

Culture medium and induction methods for inducing human embryonic stem cells to differentiate into hepatocyte like tissue and its application

The invention belongs to the technical field of culture stem cells, and discloses a special medium for inducing human embryonic stem cells to differentiate into liver-like tissues in vitro, an inducing method and an application thereof. The special medium comprises a differentiation medium I, a differentiation medium II, a differentiation medium III, a differentiation medium IV and a differentiation medium V used in turn. The invention also discloses the application of the differentiation medium to induce the directional differentiation of human embryonic stem cells into liver-like tissues in vitro and the specific method thereof. The liver-like tissues can be obtained by the said medium and method, and the existing induction and differentiation scheme of a single embryonic layer is changed to realize the differentiation of multiple embryonic layers and then to differentiate into tissue-like organs. Rather than a single cell. The liver-like tissue prepared by the method has potential clinical application value and can provide an ideal research platform for the fields of drug screening and liver development.

【技术实现步骤摘要】
诱导人胚胎干细胞定向分化为肝样组织的培养基及诱导方法和应用
本专利技术属于培养干细胞
，更具体地，涉及一种诱导人胚胎干细胞定向分化为肝样组织的培养基及诱导方法和应用。
技术介绍
目前，对于肝功能衰竭（如肝坏死、肝硬化等）和肝脏相关的遗传性疾病的临床治疗尚无特效疗法和技术手段。原位肝移植是公认的治疗晚期肝病的有效治疗方法。但是，供体肝来源严重不足和移植排斥等问题限制了这一治疗手段的广泛开展。因此，干细胞技术的兴起及其应用有望成为解决晚期肝衰的最有潜力的方法之一。多能干细胞，包括胚胎干细胞（Embryonicstemcells，ESCs）和诱导多潜能干细胞（inducedPluripotentStemcells，iPSc），具有无限增殖能力，在合适的诱导条件下，可以分化为三胚层来源的功能细胞。随着干细胞研究特别是分化机制研究的不断深入，最近5年，干细胞生物学领域的重要进展是类组织和类器官培养。目前世界各地的科学家和研究者们陆续获得了类似肠、肝、肾、胰腺、前列腺、肺、胃等的3D组织。这些组织被称为类器官，虽然它们不是真实的人体器官，但也都具备模拟真实器官的部分结构和功能。2013年，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于诱导人胚胎干细胞定向分化为肝样组织的培养基，其特征在于，包括依次使用的以下五种培养基：分化培养基I：在RPMI 1640培养基的基础上添加5%～25% MTeSR™1，20～100ng/mL活化素A，5～50ng/mL骨形态发生蛋白4，1～5% 无胰岛素B27；分化培养基II：在RPIM1640培养基的基础上添加5%～25% MTeSR™1，20～100ng/mL活化素A，1～5%无胰岛素B27；分化培养基III：在RPIM1640培养基的基础上添加5%～25%% MTeSR™1，5～50ng/mL骨形态发生蛋白‑2，10～100ng/mL人成纤维细胞生长因子‑4，1～5% B27；分...

【技术特征摘要】
1.用于诱导人胚胎干细胞定向分化为肝样组织的培养基，其特征在于，包括依次使用的以下五种培养基：分化培养基I：在RPMI1640培养基的基础上添加5%～25%MTeSR™1，20～100ng/mL活化素A，5～50ng/mL骨形态发生蛋白4，1～5%无胰岛素B27；分化培养基II：在RPIM1640培养基的基础上添加5%～25%MTeSR™1，20～100ng/mL活化素A，1～5%无胰岛素B27；分化培养基III：在RPIM1640培养基的基础上添加5%～25%%MTeSR™1，5～50ng/mL骨形态发生蛋白-2，10～100ng/mL人成纤维细胞生长因子-4，1～5%B27；分化培养基IV：是在RPIM1640培养基的基础上添加了5%～25%%MTeSR™1，10～50ng/mL肝细胞生长因子，10～50ng/mL角化细胞生长因子，1～5%B27，5～20%胆固醇或含胆固醇为主小分子混合物MIX；分化培养基V：是在高糖DMEM培养基的基础上添加0.05～0.2%抗坏血酸，0.5～5%BSA-FAF，0.05～0.2%转铁蛋白，0.05～0.2%胰岛素，0.05～0.2%GA-1000，5～20ng/mL制瘤素，5～20%胆固醇或含胆固醇为主小分子混合物MIX。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，包括依次使用的以下五种培养基：分化培养基I：在RPIM1640培养基的基础上添加25%MTeSR™1，100ng/mL活化素A，10ng/mL骨形态发生蛋白4，2%B27；分化培养基II：在RPIM1640培养基的基础上添加25%MTeSR™1，100ng/mL活化素A，2%B27；分化培养基III：在RPIM1640培养基的基础上添加25%MTeSR™1，20ng/mL...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐安龙，吴芬芳，吴迪，任勇，陈尚武，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44