PK15细胞驯化悬浮方法和二阶病毒生产工艺技术

本发明专利技术涉及PK15细胞驯化悬浮方法和二阶病毒生产工艺。具体而言，本发明专利技术涉及驯化PK15细胞使其适应无血清悬浮培养，并以其为宿主细胞，采用二阶培养接毒方式生产能在悬浮PK15细胞上病变或有敏感性的病毒，即，细胞长至2.0～20.0×106细胞/mL时，用生产培养基稀释1～5倍，使密度在1.0～10.0×106细胞/mL间，然后接毒，或在稀释前接毒。本发明专利技术的悬浮PK15细胞适应在无血清和化学成分确定的培养基中悬浮生长，其二阶病毒生产工艺简单，易放大，不换液，培养基利用率高；生产和生长培养基可相同或不同，二者按照比例混合，即可使细胞二次生长并促进病毒表达。

【技术实现步骤摘要】
PK15细胞驯化悬浮方法和二阶病毒生产工艺
本专利技术涉及PK15细胞驯化悬浮方法和悬浮PK15细胞相关疫苗生产领域，具体涉及30L及以上的生物反应器培养悬浮PK15细胞、以二阶培养方法培养悬浮PK15细胞以生产疫苗的工艺技术。
技术介绍
哺乳动物细胞大规模培养技术是生物制药企业下游通用技术之一，其在该行业发挥极为重要的作用。该项技术的关键在于实现哺乳动物细胞的悬浮无血清大规模培养，从而提高产能，降低成本，并易于放大。贴壁细胞培养时的通常做法是在培养基中添加一定量血清使细胞贴壁生长，而血清化学成分不确定，且质量不稳定，有批间差，用此种细胞生产的生物制品，质量难以控制，很难通过食品药品监督管理局的审批，而悬浮无血清培养相对于常见的贴壁培养来说，单位体积内能生长更多的细胞，从而能生产更多的生物制品。PK15是猪肾传代细胞系，其父母代源自1955年美国Stice提供的成年猪肾细胞PK-2a，后被美国ATCC收藏(收藏号为ATCC-CCL33)。PK15细胞现已广泛应用于猪圆环病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪细小病毒等的分离、体外增殖以及多种兽用疫苗的生产。现有的PK15细胞驯化悬浮的缺陷在于：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种悬浮PK15细胞疫苗生产的二阶培养方法，其包含如下步骤：6)细胞生长：悬浮PK15细胞在生长培养基中生长至2.0×106细胞/mL～20.0×106细胞/mL；7)接毒：接毒量在10‑1～10‑5MOI之间，或者在步骤3)之后按照此接毒量接毒；8)稀释/补加生产培养基：用生产培养基稀释1～5倍，稀释后细胞密度到1.0×106细胞/mL～10.0×106细胞/mL；9)二次生长：细胞二次生长；10)任选地，收获病毒液纯化制苗。

【技术特征摘要】
1.一种悬浮PK15细胞疫苗生产的二阶培养方法，其包含如下步骤：6)细胞生长：悬浮PK15细胞在生长培养基中生长至2.0×106细胞/mL～20.0×106细胞/mL；7)接毒：接毒量在10-1～10-5MOI之间，或者在步骤3)之后按照此接毒量接毒；8)稀释/补加生产培养基：用生产培养基稀释1～5倍，稀释后细胞密度到1.0×106细胞/mL～10.0×106细胞/mL；9)二次生长：细胞二次生长；10)任选地，收获病毒液纯化制苗。2.根据权利要求1所述的悬浮PK15细胞疫苗生产的二阶培养方法，其中悬浮PK15细胞生长为悬浮罐培养，培养工作体积为30L及以上。3.根据权利要求1或2所述的悬浮PK15细胞疫苗生产的二阶培养方法，其中步骤1)中细胞密度在5.0×106细胞/mL～16.0×106细胞/mL，优选地，6.0×106细胞/mL～15.0×106细胞/mL，最优选地，8.0×106细胞/mL。4.根据权利要求1至3任一项所述的悬浮PK15细胞疫苗生产的二阶培养方法，其中步骤2)中细胞接毒量在10-1～10-4MOI之间，更优接的，10-1～10-3MOI，最优接的，10-2MOI。5.根据权利要求1至4任一项所述的悬浮PK15细胞疫苗生产的二阶培养方法，其中步骤3)中悬浮PK15细胞生产培养基稀释为1～4倍，更优...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡仕君，王嘉琪，
申请(专利权)人：甘肃健顺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：甘肃,62