含有枯草芽胞杆菌B2-3-2和枯草芽胞杆菌B19的复合菌剂及其应用制造技术

一种含有枯草芽胞杆菌B2‑3‑2和枯草芽胞杆菌B19的复合菌剂及其应用，枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)B2‑3‑2，于2017年12月21日保藏于北京中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.15114，枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)B19，于2017年12月21日保藏于北京中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.15113，复合菌剂以液体或固体型式按常规方法混合制成，1mL液体复合菌剂中含4.8～5.2×108cfu枯草芽胞杆菌B2‑3‑2、含4.8～5.2×108cfu枯草芽胞杆菌B19；1g固体复合菌剂中含2.48～2.52×109cfu枯草芽胞杆菌B2‑3‑2、含2.48～2.52×109cfu枯草芽胞杆菌B19。

【技术实现步骤摘要】
含有枯草芽胞杆菌B2-3-2和枯草芽胞杆菌B19的复合菌剂及其应用
本专利技术属于微生物肥料
，具体涉及到枯草芽胞杆菌B2-3-2和枯草芽胞杆菌B19复合菌剂。
技术介绍
随着可耕土地减少和设施栽培的发展，作物连作不可避免。但随之而来的连作障碍造成作物大面积减产甚至绝收。土传真菌病害和根结线虫危害是作物连作障碍的重要原因，生物防治在控制植物土传真菌病害和根结线虫危害方面具有重大的潜力。微生物肥料简称菌肥，是指含有特定微生物活体的制品，应用于农业生产，通过其中所含微生物的生命活动，增加植物养分的供应量或促进植物生长，提高产量，改善农产品品质及农业生态环境。微生物肥料包括微生物菌剂(即微生物接种剂)、生物有机肥和复合微生物肥料。过量施用化肥对土壤物理、化学及生物的变化、对地下水、农产品品质带来的问题已引起人们极大的关注。作物连作及解决连作障碍需要微生物肥料，农产品质量安全也需要微生物肥料，增施有机肥、菌肥已成为人们的共识。微生物肥料可以增加土壤养分，改变土壤养分的存在状态利于作物吸收，产生多种活性物质促进作物生长，增强作物的抗病、抗虫和抗旱能力，土壤环境净化和土壤修复，参与土壤有机物降解、促进秸秆腐熟，改善农产品品质，提高农产品产量。多菌种复合是当今菌肥领域广泛采用的技术。不同的菌种有不同的功能，不同功能的菌种复合，功能可以互补，但不是菌种越多越好。多菌种复合要考虑微生物之间的相互关系，生物之间的相互关系有共处、互生、共生、寄生、拮抗、竞争、捕食7种。菌种复合要求菌种之间要共处、互生、共生，不能是寄生、拮抗、竞争、捕食。多菌种复合还要考虑微生物的增代时间(繁殖一代所需要的时间)，相差太大，使用过程中繁殖慢的就丢失了。多菌种复合也要考虑生产设备数量的可行性。某些细菌生长到后期，在其菌体内形成厚壁，折光性强，具有抗逆性的休眠体称为芽胞。由外到内结构依次为芽胞外壁－芽胞衣－皮层－核心，芽胞核心又分为芽胞壁，芽胞膜，芽胞质，芽胞核区。芽胞不是细菌的繁殖型。芽胞具有极强的抗热，抗辐射，抗化学药物和抗静水压，抗干燥等能力。用芽胞杆菌生产的菌肥产品保质期长，对化肥、农药和除草剂有一定的耐受性。依据植物病原真菌尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)和南方根结线虫(Meloidogyneincongnita(Kofold&White)Chitwood)与植物、动物及人体在细胞结构及组成方面的差异，以作用于植物病原真菌和南方根结线虫细胞的特异成分为靶位，筛选抗植物病原真菌和根结线虫而对植物、动物及人体安全的芽胞杆菌用做生产微生物肥料的菌种，且这些菌种防病、抗虫效果明显，将具有重要的理论和实际意义。几丁质是植物病原真菌细胞壁的组成成分，也是根结线虫卵壳的组成成分，研究证实几丁质酶可以破坏南方根结线虫的虫卵，而对其有明显的防治效果。根结线虫二龄幼虫的体壁主要是由各类蛋白质、纤维交联而成，破坏二龄幼虫的体壁也可以杀死根结线虫。因此筛选蛋白酶高酶活菌株用于生物防治具有一定的研究意义。已经证实产几丁质酶的芽胞杆菌对植物病原真菌和根结线虫都有很好的防治效果。从黄海沿岸海水养殖场淤泥样品中分离到耐盐、耐化肥及抗真菌作用较强的几丁质酶产生菌B2-3-2，经鉴定为枯草芽胞杆菌(BacillusSubtilis)。产几丁质酶芽胞杆菌B2-3-2的耐盐性和耐化肥性能有正相关性，对尖孢镰刀菌ACCC30373等多种植物病原真菌有明显抑制作用，同时具有抗南方根结线虫活性，对植物种子萌发及幼苗生长安全(陶树兴,王婷婷,徐珊,徐姗娜,苏蕊，黄海沿岸及内陆盐湖几丁质酶产生菌的筛选及特性[J].陕西师范大学学报，2010年4期，73-78页；陶树兴、张娟妮、郭贤、柴霞、魏园媛、冯晓磊，枯草芽胞杆菌2-3-2的抗线虫作用和产酶条件与酶特性[J].陕西师范大学学报，2013年3期，45-49页。丝氨酸蛋白酶是一类活性中心含有丝氨酸的蛋白酶，在医学方面、工业方面均有应用。近年来，产丝氨酸蛋白酶微生物在植物病原真菌和根结线虫生物防治中的应用引起关注。筛选丝氨酸蛋白酶高酶活菌株，对丰富相关菌种资源、开展基础研究及应用开发都具有重要的理论和实践意义。从多年连作大棚栽培的番茄根际土壤样品中分离到多株蛋白酶产生菌，用丝氨酸蛋白酶的特殊底物Na-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基酰胺盐酸盐(BApNA)和特异性抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)确定产丝氨酸蛋白酶菌株，获得丝氨酸蛋白酶产生菌株B19，PMSF对B19粗酶液的抑制率为91.20％。依据形态特征、生理生化特性和16SrDNA比对分析对菌株进行鉴定，结果菌株B19为枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)。枯草芽胞杆菌B19对多种植物病原真菌有显著的抑制作用，它的无菌滤液对南方根结线虫二龄幼虫有较强的杀虫效应。枯草芽胞杆菌B19是一株具有抗植物病原真菌和杀根结线虫双重功效的生防菌株，有重要的应用价值(唐娜,陶树兴,梁健,冯晓磊,户引红,许真珍,熊平，产丝氨酸蛋白酶芽胞杆菌的鉴定及其生防作用[J].陕西师范大学学报(自然科学版)，2016年1期，81-86页)。已有的研究表明，土传真菌病害与根结线虫危害常常相伴发生且相互影响导致病害的加重(张绍升.植物线虫病害诊断与治理[M].福州:福建省科学技术出版社,1999:67-97)，单一防治真菌病害或根结线虫在实际生产中效果并不理想。枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)B2-3-2和枯草芽胞杆菌B19单独作为农用微生物菌剂的效果已有报道(陶树兴,王婷婷,徐珊,徐姗娜,苏蕊，黄海沿岸及内陆盐湖几丁质酶产生菌的筛选及特性[J].陕西师范大学学报，2010年4期，73-78页；陶树兴、张娟妮、郭贤、柴霞、魏园媛、冯晓磊，枯草芽胞杆菌2-3-2的抗线虫作用和产酶条件与酶特性[J].陕西师范大学学报，2013年3期，45-49页；唐娜,陶树兴,梁健,冯晓磊,户引红,许真珍,熊平，产丝氨酸蛋白酶芽胞杆菌的鉴定及其生防作用[J].陕西师范大学学报(自然科学版)，2016年1期，81-86页)。但这两株枯草芽胞杆菌菌株复合后对植物病原真菌和南方根结线虫的拮抗效果如何，未见报道。专利技术人通过实验证实，不同的枯草芽胞杆菌菌株在抗真菌和抗南方根结线虫方面具有功能多样性，有的菌株可以产生抗生素，另一些菌株则可以产生溶解真菌菌丝细胞和破坏线虫虫卵及幼虫体壁的水解酶。产几丁质酶和丝氨酸蛋白酶的菌株分别在农用微生物制剂方面应用已有报道，但在已公开的报道和专利中，尚未发现用产几丁质酶和产丝氨酸蛋白酶的两株枯草芽胞杆菌复合制作农用微生物菌剂及菌肥的报道和专利。
技术实现思路
本专利技术所要解决的一个技术问题在于克服上述现有微生物制剂的缺点，提供一种抗尖孢镰刀菌所致作物病害、抗南方根结线虫危害效果显著的含有枯草芽胞杆菌B2-3-2和枯草芽胞杆菌B19的复合菌剂。本专利技术所要解决的另一个技术问题在于为含有枯草芽胞杆菌B2-3-2和枯草芽胞杆菌B19的复合菌剂提供一种抗尖孢镰刀菌所致病害的新用途。本专利技术所要解决的还有一个技术问题在于为含有枯草芽胞杆菌B2-3-2和枯草芽胞杆菌B19的复合菌剂提供一种抗南方根结线虫危害的新用途。解决上述技术问题所采用的技术方案是：含有枯草芽胞杆菌B2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有枯草芽胞杆菌B2‑3‑2和枯草芽胞杆菌B19的复合菌剂，枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)B2‑3‑2，于2017年12月21日保藏于北京中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.15114，枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)B19，于2017年12月21日保藏于北京中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.15113，其特征在于：所述的复合菌剂由枯草芽胞杆菌B2‑3‑2和枯草芽胞杆菌B19以液体或固体型式按常规方法混合制成，在1mL的液体复合菌剂中，含有4.8～5.2×108cfu枯草芽胞杆菌B2‑3‑2，含有4.8～5.2×108cfu枯草芽胞杆菌B19；在1g的固体复合菌剂中，含有2.48～2.52×109cfu枯草芽胞杆菌B2‑3‑2，含有2.48～2.52×109cfu枯草芽胞杆菌B19。

【技术特征摘要】
1.一种含有枯草芽胞杆菌B2-3-2和枯草芽胞杆菌B19的复合菌剂，枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)B2-3-2，于2017年12月21日保藏于北京中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCCNo.15114，枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)B19，于2017年12月21日保藏于北京中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCCNo.15113，其特征在于：所述的复合菌剂由枯草芽胞杆菌B2-3-2和枯草芽胞杆菌B19以液体或固体型式按常规方法混合制成，在1mL的液体复合菌剂中，含有4.8～5.2×108cfu枯草芽胞杆菌B2-3-2，含有4.8～5.2×108cfu枯草芽胞杆菌B19；在1g的固体复合菌剂中，含有2.48～2.52×109cfu枯草芽胞杆菌B2-3-2，含...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶树兴，芦晓飞，凌键，刘甲启，孙宏斌，张万里，郝小武，田星，
申请(专利权)人：西安德龙生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61