诊断或评估哺乳动物中的疾病或紊乱的新型多重分析制造技术

本发明专利技术包括可以用于同时测定多种抗体中的抗体是否存在于样品中的方法和试剂盒。在某些实施方式中，抗体的至少一种包括自身抗体。在其它实施方式中，本发明专利技术的方法和试剂盒可以被用于同时测定对象是否可能发展或已经发展多种疾病或紊乱的每一种。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】诊断或评估哺乳动物中的疾病或紊乱的新型多重分析相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2015年11月17日提交的美国临时申请号62/256,624的优先权，该申请通过引用以其全部并入本文。关于联邦资助的研究或研发的声明本专利技术在由国立卫生研究院授予的DK32083下利用政府支持完成。政府享有本专利技术中的某些权利。
技术介绍
自身抗体是由哺乳动物的免疫系统产生并针对哺乳动物的自身蛋白质中一种或多种的抗体。许多自身免疫疾病(尤其是红斑狼疮)由这些自身抗体引起。正常地，免疫系统能够识别并忽略身体的自身健康蛋白质、细胞和组织，不与环境中的非威胁性物质比如食物过度反应。但是，免疫系统有时可能停止识别身体的正常组分中的一种或多种为“自身的”，导致产生病理学自身抗体。这些自身抗体攻击身体的自身健康细胞、组织和/或器官，引起炎症和损害。自身抗体也可以起非病理性作用。例如，它们可以帮助身体破坏癌症和消除废物。自身抗体也可以在正常免疫功能中起作用。自身抗体产生的起因是多样化的并且未被充分了解。一些自身抗体产生是由于遗传易感性与环境诱因(例如，病毒性疾病或长期暴露于某些有毒化学品)的结合。虽然家庭可能易受自身免疫病症的影响，但是单个家庭成员可能具有不同的自身免疫紊乱，或者从来都不会发展自身免疫病症。1型糖尿病(T1D)——免疫介导形式的糖尿病——的发病率在过去20年中已经加倍，尤其是在幼儿中。仅在美国，T1D影响预计1.4×106个人，其中相等数目的人患有临床前疾病，其特征在于多种胰岛自身抗体(iAb)，但是仍然具有正常葡萄糖稳态。iAb的存在、它们的数目和水平当前被用于评估糖尿病风险(或糖尿病发展阶段)和作为预防试验的入选标准。几乎所有对iAb——其针对选自胰岛素(IAA)、谷氨酸脱羧酶(GADA)、胰岛抗原2(IA-2A)和锌转运蛋白8(ZnT8A)的两种或更多种靶标——阳性的儿童发展为临床T1D。当在症状开始之前被鉴定时，这些儿童可以避免威胁生命的糖尿病酮症酸中毒和住院治疗，以及参加阻止T1D的试验或定义T1D的起因的研究。此外，三分之一的患者在诊断T1D时存在有自身免疫甲状腺炎或腹腔自身免疫。乳糜泻的患病率在欧洲和北美为约1:100。但是，大多数患者未被诊断或者在显著延迟的情况下被诊断。无麸质饮食是有效的治疗，并且通过测量转谷氨酰胺酶自身抗体(TGA)的早期检测已经被广泛地推荐。乳糜泻和T1D共享II类HLA和非HLA遗传易感性，并且在多达10％的患者中同时发生。美国糖尿病协会推荐在T1D诊断的时候进行乳糜泻的例行筛查。临床前T1D和乳糜泻的组合群体筛查将是合理搭配。T1D的预防试验在进行中并且可能扩展至多重候选干预；但是，对合格对象的大规模筛查仍然是艰难的瓶颈。因此，在本领域中存在对于鉴定处于发展自身免疫疾病或紊乱的风险下或者已经发展自身免疫疾病或紊乱的患者的新型方法的需要。多重自身抗体分析的可利用性可以极大地简化T1D的诊断和对相关自身免疫病症的筛查。本专利技术解决并满足了该需要。
技术实现思路
本专利技术提供了同时检测样品中多种抗体的每一种的存在或不存在的方法。本专利技术进一步提供了同时测定哺乳动物是否可能发展或已经发展多种疾病或紊乱的每一种的方法，其中多种疾病或紊乱的每一种的特征在于在哺乳动物的生物学样品中存在至少一种自身抗体。本专利技术进一步提供了用于测定哺乳动物是否可能发展或已经发展多种疾病或紊乱的每一种的试剂盒，其中多种疾病或紊乱的每一种的特征在于在哺乳动物的生物学样品中存在至少一种自身抗体。在某些实施方式中，方法包括如下步骤：(1)使一定体积的样品与多种抗体的每一种的抗原接触，其中每种抗原包括利用可检测标签衍生的抗原(第一衍生的抗原)和利用标记标签衍生的抗原(第二衍生的抗原)，从而形成第二溶液，其中，如果选自多种抗体的给定抗体存在于样品中，则对应的第一衍生的抗原-给定抗体-第二衍生的抗原复合物在第二溶液中形成；(2)使第二溶液与包括多个非重叠区域的固体表面接触，其中多个非重叠区域的每个利用特异性地结合至标记标签之一的捕获分子衍生，其中标记标签的每个不与多个非重叠区域的多于一个结合，从而如果存在于第二溶液中，则在不同的非重叠区域(其从而已知为与给定抗体相关联)中固定第一衍生的抗原-给定抗体-第二衍生的抗原复合物的每种；和(3)通过测定固定至与给定抗体相关联的非重叠区域的可检测标签的存在或不存在检测第一衍生的抗原-给定抗体-第二衍生的抗原复合物的每种的存在或不存在。在某些实施方式中，多种抗体的至少一种包括自身抗体。在其它实施方式中，多种抗体的每一种包括自身抗体。在某些实施方式中，样品包括来自哺乳动物的生物学样品。在其它实施方式中，来自哺乳动物的生物学样品包括选自尿、血液、血清、血浆和唾液的至少一种。在某些实施方式中，可检测标签包括电化学发光(ECL)标签。在其它实施方式中，ECL标签包括钌络合物。在又其它实施方式中，ECL标签包括[Ru(BPy)3]2+。在某些实施方式中，对于多种抗体的每一种独立地，步骤(1)包括下列步骤的一个：(a)使样品与多种抗体之一的抗原接触，其中抗原包括利用可检测标签衍生的抗原，因而形成第一溶液；和随后使第一溶液与相同抗体的抗原接触，其中抗原包括利用标记标签衍生的抗原；(b)使样品与多种抗体之一的抗原接触，其中抗原包括利用标记标签衍生的抗原，因而形成第一溶液；和随后使第一溶液与相同抗体的抗原接触，其中抗原包括利用可检测标签衍生的抗原；和(c)使样品与多种抗体之一的抗原接触，其中抗原包括利用标记标签衍生的抗原和利用可检测标签衍生的抗原。在某些实施方式中，标记标签包括选自生物素、糖类和免疫球蛋白或其片段的至少一种。在其它实施方式中，捕获分子包括选自抗生物素蛋白、链霉亲和素、凝集素、蛋白A/G和适配体的至少一种。在又其它实施方式中，多种抗体包括至少四种抗体。在又其它实施方式中，多种抗体包括至少六种抗体。在又其它实施方式中，多种抗体包括至少八种抗体。在又其它实施方式中，多种抗体包括至少十种抗体。在又其它实施方式中，样品体积在大约6μL至大约20μL、大约6μL至大约18μL、大约6μL至大约16μL、大约6μL至大约14μL、大约6μL至大约12μL、大约6μL至大约10μL、或大约6μL至大约8μL的范围内。在某些实施方式中，多种抗体包括选自下列的至少一种：IAA(胰岛素自身抗体)、GADA(谷氨酸脱羧酶自身抗体)、IA-2A(胰岛抗原2自身抗体)、TGA(转谷氨酰胺酶自身抗体)、TPOA(甲状腺过氧化物酶自身抗体)、ThgA(甲状腺球蛋白自身抗体)、IFNαA(干扰素α自身抗体)、ZnT8A(8型锌转运蛋白自身抗体)、21-羟化酶自身抗体、环瓜氨酸肽(CCP)自身抗体、抗双链DNA(dsDNA)自身抗体、抗核抗体(ANA)、ATP酶自身抗体和抗髓鞘碱性蛋白(MBP)自身抗体。在其它实施方式中，多种抗体包括IAA、GADA、IA-2A、TGA、TPOA、ThgA、IFNαA和ZnT8A。在某些实施方式中，哺乳动物是人。在某些实施方式中，方法包括：(1)使样品与多种抗原接触，其中多种抗原的每种特异性地，并且彼此排他性地，结合至与多种疾病或紊乱之一相关联的一种自身抗体，其中每种抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测样品中多种抗体的每一种的存在或不存在的方法，所述方法包括如下步骤：(1)使一定体积的所述样品与所述多种抗体的每一种的抗原接触，其中每种抗原包括利用可检测标签衍生的抗原(第一衍生的抗原)和利用标记标签衍生的抗原(第二衍生的抗原)，从而形成第二溶液，其中，如果选自所述多种抗体的给定抗体存在于所述样品中，则对应的第一衍生的抗原‑给定抗体‑第二衍生的抗原复合物在所述第二溶液中形成；(2)使所述第二溶液与包括多个非重叠区域的固体表面接触，其中所述多个非重叠区域的每个利用特异性地结合至所述标记标签之一的捕获分子衍生，其中所述标记标签的每一个不与所述多个非重叠区域的多于一个结合，从而如果存在于所述第二溶液中，则在不同的非重叠区域(其从而已知为与所述给定抗体相关联)中固定所述第一衍生的抗原‑给定抗体‑第二衍生的抗原复合物的每种；和(3)通过测定固定至与所述给定抗体相关联的所述非重叠区域的所述可检测标签的存在或不存在，检测所述第一衍生的抗原‑给定抗体‑第二衍生的抗原复合物的每一种的存在或不存在。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.17 US 62/256,6241.一种同时检测样品中多种抗体的每一种的存在或不存在的方法，所述方法包括如下步骤：(1)使一定体积的所述样品与所述多种抗体的每一种的抗原接触，其中每种抗原包括利用可检测标签衍生的抗原(第一衍生的抗原)和利用标记标签衍生的抗原(第二衍生的抗原)，从而形成第二溶液，其中，如果选自所述多种抗体的给定抗体存在于所述样品中，则对应的第一衍生的抗原-给定抗体-第二衍生的抗原复合物在所述第二溶液中形成；(2)使所述第二溶液与包括多个非重叠区域的固体表面接触，其中所述多个非重叠区域的每个利用特异性地结合至所述标记标签之一的捕获分子衍生，其中所述标记标签的每一个不与所述多个非重叠区域的多于一个结合，从而如果存在于所述第二溶液中，则在不同的非重叠区域(其从而已知为与所述给定抗体相关联)中固定所述第一衍生的抗原-给定抗体-第二衍生的抗原复合物的每种；和(3)通过测定固定至与所述给定抗体相关联的所述非重叠区域的所述可检测标签的存在或不存在，检测所述第一衍生的抗原-给定抗体-第二衍生的抗原复合物的每一种的存在或不存在。2.权利要求1所述的方法，其中所述多种抗体的至少一种包括自身抗体。3.权利要求1所述的方法，其中所述多种抗体的每一种包括自身抗体。4.权利要求1所述的方法，其中所述样品包括来自哺乳动物的生物学样品。5.权利要求4所述的方法，其中来自所述哺乳动物的所述生物学样品包括选自尿、血液、血清、血浆和唾液的至少一种。6.权利要求1所述的方法，其中所述可检测标签包括电化学发光(ECL)标签。7.权利要求6所述的方法，其中所述ECL标签包括钌络合物。8.权利要求7所述的方法，其中所述ECL标签包括[Ru(BPy)3]2+。9.权利要求1所述的方法，其中对于所述多种抗体的每一种独立地，步骤(1)包括下列步骤的一个：(a)使所述样品与所述多种抗体之一的抗原接触，其中所述抗原包括利用可检测标签衍生的抗原，因而形成第一溶液；和随后使所述第一溶液与相同抗体的抗原接触，其中所述抗原包括利用标记标签衍生的抗原；(b)使所述样品与所述多种抗体之一的抗原接触，其中所述抗原包括利用标记标签衍生的抗原，因而形成第一溶液；和随后使所述第一溶液与相同抗体的抗原接触，其中所述抗原包括利用可检测标签衍生的抗原；和(c)使所述样品与所述多种抗体之一的抗原接触，其中所述抗原包括利用标记标签衍生的抗原和利用可检测标签衍生的抗原。10.权利要求1所述的方法，其中所述标记标签包括选自生物素、糖类、和免疫球蛋白或其片段的至少一种。11.权利要求1所述的方法，其中所述捕获分子包括选自抗生物素蛋白、链霉亲和素、凝集素、蛋白A/G和适配体的至少一种。12.权利要求1所述的方法，其中所述多种抗体包括至少四种抗体。13.权利要求12所述的方法，其中所述多种抗体包括至少六种抗体。14.权利要求13所述的方法，其中所述多种抗体包括至少八种抗体。15.权利要求14所述的方法，其中所述多种抗体包括至少十种抗体。16.权利要求1所述的方法，其中所述样品的体积在大约6μL至大约20μL的范围内。17.权利要求1所述的方法，其中所述多种抗体包括选自下列的至少一种：IAA(胰岛素自身抗体)、GADA(谷氨酸脱羧酶自身抗体)、IA-2A(胰岛抗原2自身抗体)、TGA(转谷氨酰胺酶自身抗体)、TPOA(甲状腺过氧化物酶自身抗体)、ThgA(甲状腺球蛋白自身抗体)、IFNαA(干扰素α自身抗体)、ZnT8A(8型锌转运蛋白自身抗体)、21-羟化酶自身抗体、环瓜氨酸肽(CCP)自身抗体、抗双链DNA(dsDNA)自身抗体、抗核抗体(ANA)、ATP酶自身抗体和抗髓鞘碱性蛋白(MBP)自身抗体。18.权利要求17所述的方法，其中所述多种抗体包括IAA、GADA、IA-2A、TGA、TPOA、ThgA、IFNαA和ZnT8A...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·余，M·罗尔斯，A·米歇尔斯，
申请(专利权)人：科罗拉多大学评议会公司，
类型：发明
国别省市：美国,US