用于量化内源蛋白质致病聚集体的标准物制造技术

本发明专利技术涉及用于量化作为蛋白质聚集疾病、淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的特征的内源蛋白质致病聚集体或寡聚物的标准物，以及这些标准物用于量化这些致病聚集体或寡聚物的用途。

【技术实现步骤摘要】
用于量化内源蛋白质致病聚集体的标准物本分案申请是基于申请号为201280064164.X，申请日为2012年12月21日，专利技术名称为“用于量化内源蛋白质致病聚集体的标准物”的原始中国专利申请的分案申请。本专利技术涉及用于量化作为蛋白质聚集疾病、淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的特征的内源蛋白质致病聚集体或寡聚物的标准物，以及这些标准物用于量化这些致病聚集体或寡聚物的用途。蛋白质错误折叠疾病或蛋白质聚集疾病或淀粉样变性被描述为一种由不同种类组成的临床状态，其共同标准在许多情况(但不排除其它情况)下是各个特定蛋白质以β折叠结构的有序构象的细胞外全身性或局部沉积。阿尔茨海默病(AD,阿尔茨海默痴呆，拉丁语＝MorbusAlzheimer)或帕金森氏病也落在该组之中。由年龄决定的痴呆是当今社会中一个越来越大的问题，这是因为由于提高的预期寿命，越来越多的人遭受其苦并因此对社会保险系统和其可资助性产生影响。内源蛋白质病理学聚集体，例如寡聚物或纤丝，出现于许多神经变性疾病中。在阿尔茨海默痴呆的情况下，例如在大脑中发现β淀粉样肽沉积物(Aβ肽沉积物)和在帕金森氏病情况下，共核蛋白(Synuclein)沉积物。然而，β淀粉样肽沉积物(或斑点，由肽-纤丝构成)仅是过程的最后阶段，其以从来自APP(淀粉样前体蛋白)的单体β淀粉样肽的分裂开始，然后形成神经毒性的β淀粉样肽寡聚物并最后以斑点中的β淀粉样肽纤丝的沉积物结束。AD的主要病理学特征是由Aβ肽组成的老年斑或淀粉样斑的形成。此外，产生来自Tau蛋白的神经纤丝沉积物。Aβ肽的前体蛋白质，APP,定位于神经元的细胞膜中。通过蛋白质水解降解和可能地之后的修饰，由此产生不同长度和类型的Aβ片段，例如Aβ1-40、Aβ11-40、Aβ1-42、Aβ11-42或pyroGluAβ3-42、pyroGluAβ3-40。单体Aβ肽也在健康机体的整个一生期间都产生。按照自1990年代的淀粉样蛋白级联假说，以斑点形式的Aβ沉积物是疾病症状的触发者。然而近年来，不同的研究表明，特别是小的、自由扩散的Aβ寡聚物具有最大的毒性，并且对AD的发生和进展负责。因此，Aβ肽的聚集体与AD发病机理直接相关。然而目前，可靠的诊断在引人关注的临床症状出现以后才是可能的，在这种情况下，以最大90％的可靠性为出发点。目前存在的至今唯一可靠的诊断可能，直到患者死亡后通过大脑中各种不同改变的组织学检测。因此，存在对用于鉴定和量化记录造成和/或作为蛋白质聚集疾病、淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的特征的内源蛋白质病理学聚集体或寡聚物的方法的需要。迄今只描述了很少的用于表征和量化组织和体液中的造成蛋白质聚集疾病、淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的内源蛋白质致病聚集体或寡聚物的方法。为了发展此类方法，以及保证用此测定的结果的可比较性，需要准确定义的标准物，即准确经表征的(合成的)聚合物。为了作为标准物使用，这些必须以各种不同的大小和形式存在，然而其必须是准确定义的。然而，肽的聚集由许多因素决定，例如温度、样品的盐含量、蛋白质的制备公司、纯度等。因此，通过单体肽的聚集制备作为标准物的聚合物对于测试发展和验证是难以再现的。此外，例如迄今制备的Aβ寡聚物不是足够稳定的，即它不能确保在不同的时间点从制备物取出Aβ寡聚物的情况下，总是存在相同的Aβ聚集体种类。迄今已知的寡聚物制备物通常由各种不同的中间形式组成，其具有不均一的大小，并且因此是不足以再现的。然而，描述了一系列与抗淀粉样单克隆体结合的化合物。此类化合物例如从Manea等人,(BiopolymeresPeptideScience2004，第76卷，第503-511页和Peptid-Science2008，第90卷第2期第94-104页)以及Chafekar等人(ChemBioChem2007,8,1857-1864)已知。这些化合物基于与Aβ表位(4-10)或(16-20)结合的聚合物。从US5,593,846已知用于检测β淀粉样肽的方法，其中使用与所述肽的13-28以及1-16位结合的抗体。然而，本文不仅检测Aβ寡聚物，而且也检测单体。特别地，在检测在来自组织或体液的样品中的Aβ寡聚物的领域内，迄今作为比较值使用由合成制备的Aβ单体借助各种不同的实验方案制备的Aβ寡聚物。不能确保的是，在寡聚物制备物中仅存在一种寡聚物大小，且制备物不包含Aβ单体或Aβ纤丝。进一步显示，这些探针没有表现出足够的存放稳定性并且鉴于其寡聚物-单体组成而改变其特性。由于这些缺点，迄今寡聚物检测系统的精确校准和表征是不准确的，或更确切而言，不可能的。特别是由于各种不同实验室中的不同实验方案，使世界范围的协调一致和因此测试系统的建立变得困难。因此存在用于量化造成蛋白质错误折叠疾病、淀粉样变性或和/或蛋白质聚集疾病或作为其特征的内源蛋白质病理学聚集体或寡聚物的标准物的需要。本专利技术的任务是提供这样的标准物，其使得内源蛋白质致病聚集体或寡聚物的精确和量化测定成为可能。所述标准物应当可作为内标准物或外标准物使用。进一步，本专利技术的任务是，提供用于量化内源蛋白质致病聚集体或寡聚物的标准物的准确定义的、均一的和稳定的制备物。该任务通过用于量化造成作为蛋白质聚集疾病或淀粉样变性或或蛋白质错误折叠疾病的特征的寡聚物或致病聚集体的标准物而得到解决，其特征在于，所述聚合物由多肽序列构建，所述多肽序列就其序列而言在相应的部分区域中与内源蛋白质是相同的或与内源蛋白质在相应的部分区域上具有至少50％的同源性，所述内源蛋白质作为蛋白质聚集疾病或淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的特征，其中所述聚合物不聚集。在本专利技术的意义下，作为标准物，描述普遍有效和接受的、固定的参考量，其用于比较和测定特性和/或量，特别是用于测定内源蛋白质致病聚集体的大小和量。本专利技术意义下的标准物可用于仪器和/或测量的校准。在本专利技术的意义下，术语“蛋白质聚集疾病”，也包括淀粉样变性和蛋白质错误折叠疾病。此类疾病的实例和与此相关的内源蛋白质为：关于AD的Aβ蛋白和Tau蛋白，关于帕金森氏病的α-共核蛋白或关于朊病毒病例如人克雅氏病(CJD)、羊瘙痒病和牛海绵脑病(BSE)的朊蛋白。“同源序列”，在本专利技术的意义下，意味着氨基酸序列与造成蛋白质聚集疾病的内源致病聚集体或寡聚物的氨基酸序列具有至少50、55、60、65、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100％的同一性。在本说明中，代替术语“同一性”，同等意义地使用术语“同源的”或“同源物”。两个核酸序列或多肽序列之间的同一性通过借助于基于Smith,T.F.和Waterman,M.S(Adv.Appl.Math.2：482-489(1981))的算法的BESTFIT程序的比较来计算，通过设置下列对于氨基酸的参数：空隙产生罚分(Gapcreationpenalty)：8，和空隙延伸罚分(Gapextensionpenalty)：2；和下列对于核酸的参数：空隙产生罚分：50，和空隙延伸罚分：3。优选地，两个核酸序列或多肽序列之间的同一性通过核酸序列/多肽序列相对于各自的总序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于量化作为蛋白质聚集疾病或淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的特征的内源蛋白质致病聚集体或寡聚物的标准物，其特征在于，所述聚合物由多肽序列构建，所述多肽序列就其序列而言在相应的部分区域中与内源蛋白质是相同的或与那内源蛋白质在相应的部分区域上具有至少50％的同源性，所述内源蛋白质作为蛋白质聚集疾病或淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的特征，其中所述聚合物不聚集。

【技术特征摘要】
2011.12.23 DE 102011057019.51.用于量化作为蛋白质聚集疾病或淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的特征的内源蛋白质致病聚集体或寡聚物的标准物，其特征在于，所述聚合物由多肽序列构建，所述多肽序列就其序列而言在相应的部分区域中与内源蛋白质是相同的或与那内源蛋白质在相应的部分区域上具有至少50％的同源性，所述内源蛋白质作为蛋白质聚集疾病或淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的特征，其中所述聚合物不聚集。2.根据权利要求1的标准物，其特征在于，所述标准物具有准确定义数目的用于探针的结合的表位，所述表位共价地相互连接。3.根据前述权利要求之一的标准物，其包含Aβ肽的表位。4.根据权利要求3的标准物，其包含至少一个选自由下列组成的组的表位：Aβ1-8(SEQIDNO：2)、Aβ1-11(SEQIDNO：3)、Aβ1-16(SEQIDNO：4)、Aβ3-11(SEQIDNO：5)、pyroGluAβ3-11(SEQIDNO：6)、Aβ11-16(SEQIDNO：7)和pyroGluAβ11-16(SEQIDNO：8)。5.根据前述权利要求之一的标准物，其特征在于，所述标准物在水中是可溶的。6.根据前述权利要求之一的标准物，其包含官能团。7.根据前述权利要求之一的标准物，其包含至少一个间隔子分子。8.根据前述权利要求之一的标准物，其包含用于分光光度测定法测定的染料和/或芳族氨基酸。9.根据前述权利要求之一的标准物，其特征在于，所述多肽序列不通过与硫原子的键合、不通过硫醚键合和/或不通过半胱氨酸而相互地或与标准物的其他组成要素相连接，特别是共价地结合。10.根据前述权利要求之一的标准物，其特征在于，所述多肽序列以线性的、支化的或交联的构象相互联结，或作为树枝体存在。11.包含多肽的树枝体，所述多肽就其序列而言在相应的部分区域中与内源蛋白质是相同的或与内源蛋白质在相应的部分区域上...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·威尔伯尔德，S·A·丰克，
申请(专利权)人：于利希研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE