本实用新型专利技术公开了一种用于EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的装置，包括培育装置和支撑装置；所述支撑装置包括水培盒和矩形塑料支架，所述矩形塑料支架通过铁钩和连接绳可拆卸的固定于所述水培盒上；所述培育装置为72孔穴盘，所述72孔穴盘通过矩形塑料支架固定于水培盒之上，穴盘底部与水培盒内所盛液体的液面距离可通过连接绳进行调节。该装置可以模拟田间水盐运动规律，为耐盐紫花苜蓿的筛选提供仿真的田间水盐运动模拟环境，提高了耐盐紫花苜蓿定向诱变筛选的成功率。
【技术实现步骤摘要】
一种用于EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的装置
本技术涉及植物育种
，具体涉及一种用于EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的装置。
技术介绍
土壤盐渍化问题在世界范围内广泛存在，是农业生产面临的最严重的非生物逆境之一，严重影响作物生长发育；同时盐碱地具有光热资源充沛等自然禀赋，亟待开发和利用。紫花苜蓿(MedicagosativaL.)为豆科多年生草本植物，具有适应性强、产草量高、适口性好等优点，是世界上栽培面积最大的牧草，被誉为“牧草之王”，具有一定的耐盐性；但盐害仍是限制和决定苜蓿广泛种植的重要因素之一，在盐碱地区进一步提高苜蓿耐盐性十分必要。培育耐盐性更强的苜蓿品种，是苜蓿在盐碱地利用的物质基础。对于耐盐性强的紫花苜蓿新品种的选育，目前主要采用传统的杂交育种或基因工程育种。但传统的杂交育种选育周期性长、耗时费力。基因工程育种仍是基于人工模拟的环境，缺少相应的品种区域特性试验研究；另外，由于植物的耐盐性是一个受多基因控制的数量性状，而目前的研究报道大多只涉及单基因的转化，这可能是限制基因工程耐盐育种发展的原因之一；再者，目前的研究报道多是在转基因品系(种)的生长早期进行的耐盐性评析，而其耐盐性是否可以维持并稳定遗传尚有待证实，且某个发育阶段的耐盐性尚不能代表植物的耐盐性。化学诱变育种具有使用方便、突变率高、后代较易稳定遗传等特点，是目前农作物育种较常用的有效手段之一。在众多化学诱变剂中，甲基磺酸乙酯(EMS)是常用的高效化学诱变剂，具有突变类型广、突变频率高、突变效率高等特点。但是EMS诱变具有多方向性，其诱变性状无法定向与预测。因此，目前尚未有关于EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的报道。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本技术的目的是提供一种EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的方法。本技术的另一目的是提供用于EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的装置。为实现上述目的，本技术采用如下技术方案：本技术的第一方面，提供一种EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的方法，包括以下步骤：(1)用含盐EMS-磷酸缓冲液处理紫花苜蓿种子；(2)将步骤(1)处理后的紫花苜蓿种子置于发芽盒内，用NaCl溶液进行胁迫处理，在光照培养箱中培养至种子萌发；(3)将步骤(2)萌发的紫花苜蓿种子播种于苗期筛选装置中，并逐步提高盐胁迫浓度，筛选苗期耐盐单株；(4)将步骤(3)筛选的苗期耐盐单株移栽入大田，生长期间加强肥水管理，并进行性状观察；(5)挑选出优良变异单株，收取紫花苜蓿种子；(6)将步骤(5)的紫花苜蓿种子置于发芽盒内，用NaCl溶液进行胁迫处理，在光照培养箱中培养至种子萌发；(7)将步骤(6)萌发的紫花苜蓿种子播种于苗期筛选装置中，并逐步提高盐胁迫浓度，筛选苗期耐盐单株；(8)将步骤(7)筛选的苗期耐盐单株在大田间分单株进行播种，即获得紫花苜蓿EMS定向耐盐诱变种质。优选的，步骤(1)中，所述含盐EMS-磷酸缓冲液中，EMS的质量百分含量为1.0％，NaCl浓度为50mmol/L。优选的，步骤(1)中，紫花苜蓿种子的处理方法为：先将紫花苜蓿种子用10％的H2O2消毒处理，消毒处理后用蒸馏水冲洗，再在室温下浸种至吸胀状态，除去种子表层水分，然后用含盐EMS-磷酸缓冲液在4℃下处理3-5h，室温下处理3-5h；处理结束后，倒掉含盐EMS-磷酸缓冲液，将处理后的紫花苜蓿种子用流水冲洗1h以上。优选的，步骤(2)和步骤(6)中，采用100mmol/L的NaCl溶液进行胁迫处理。优选的，步骤(2)和步骤(6)中，在光照培养箱中保持白昼25℃，夜间20℃，进行变温培养至种子萌发。优选的，步骤(3)和步骤(7)中，所述苗期筛选装置包括：培育装置和支撑装置；所述支撑装置包括水培盒和矩形塑料支架，所述矩形塑料支架通过铁钩和连接绳可拆卸的固定于所述水培盒上；所述培育装置为72孔穴盘，所述72孔穴盘通过矩形塑料支架固定于水培盒之上，穴盘底部与水培盒内所盛液体的液面距离可通过连接绳进行调节。优选的，步骤(3)和步骤(7)中，筛选苗期耐盐单株采用的方法为：将萌发的紫花苜蓿种子播种于苗期筛选装置的穴盘中，每个穴移一株，播种深度为0.5-1厘米，逐株编号，育苗期间保证水分充足；通过控制苗期筛选装置的水培盒内NaCl的浓度和液面高度进行苗期耐盐筛选；先用清水培养7天，然后更换为营养液培养至30天，之后逐步在营养液中加入NaCl至50、100、150和200mmol/L，在盐溶液中共培养30天左右，至穴盘内苜蓿成活率在45-55％。通过调节液面的高度来模拟田间水盐运动规律，其中，用液面淹没过基质1h，模拟浇灌过程；用液面淹没过反滤层，模拟刚浇灌后田间高水位环境，用穴盘离开液面模拟水分减少供应环境。优选的，步骤(4)中，所述性状观察包括：白化、矮化、黄化、畸形苗、畸形叶、株高、分枝数、复叶数、叶片大小、生长势和生长速度。优选的，步骤(5)中，优良变异单株标准：颜色浓绿，生长势强，叶片肥大，茎叶比小，分枝多，生长速度较快，没有白化、黄化、畸形苗、畸形叶等不良性状。本技术的第二方面，提供一种用于EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的装置，所述装置包括：培育装置和支撑装置；所述支撑装置包括水培盒和矩形塑料支架，所述矩形塑料支架通过铁钩和连接绳可拆卸的固定于所述水培盒上；所述培育装置为72孔穴盘，所述72孔穴盘通过矩形塑料支架固定于水培盒之上，穴盘底部与水培盒内所盛液体的液面距离可通过连接绳进行调节。优选的，所述72孔穴盘的每个穴盘底部放置海绵作为反滤层，反滤层上方为基质层。本技术的有益效果：(1)本技术的EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的方法操作简便、高效稳定、成本低廉。生产中可以利用该方法，结合简单农艺性状的鉴定，可以定向创制并筛选出耐盐紫花苜蓿变异个体和群体，为紫花苜蓿的遗传、育种提供丰富的种质材料。(2)本技术所设计的用于EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的装置，可以模拟田间水盐运动规律，为耐盐紫花苜蓿的筛选提供仿真的田间水盐运动模拟环境，提高了耐盐紫花苜蓿定向诱变筛选的成功率。附图说明图1：本技术的苗期筛选装置结构示意图；其中，1-水培盒，2-铁钩，3-矩形塑料支架，4-72孔穴盘，5-连接绳。图2：穴盘结构示意图；其中，6-基质层，7-反滤层。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。正如
技术介绍
中所介绍的，由于EMS诱变具有多方向性，其诱变性状无法定向与预测。为了解决这一技术难题，本技术经创造性的劳动，首次提出了一种EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的方法。在本技术的一种实施方案中，所给出的EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的方法包括以下步骤：(1)种子准备与含盐EMS-磷酸缓冲液制备：选取籽粒饱满紫花苜蓿种子，并按设定量称取该种子，配制磷酸缓冲溶液(pH＝7.0)，并将甲基磺酸乙酯(EMS)和NaCl溶于该磷酸缓冲液中，制得含盐EMS-磷酸缓冲液；所述含盐EMS-磷酸缓冲液中，EMS的质量百分含量为1.0％，NaCl浓度为50mmol/L；(2)种子处理：用含盐本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的装置，其特征在于，所述装置：包括培育装置和支撑装置；所述支撑装置包括水培盒和矩形塑料支架，所述矩形塑料支架通过铁钩和连接绳可拆卸的固定于所述水培盒上；所述培育装置为72孔穴盘，所述72孔穴盘通过矩形塑料支架固定于水培盒之上，穴盘底部与水培盒内所盛液体的液面距离可通过连接绳进行调节。
【技术特征摘要】
1.一种用于EMS定向诱变、筛选耐盐紫花苜蓿的装置，其特征在于，所述装置：包括培育装置和支撑装置；所述支撑装置包括水培盒和矩形塑料支架，所述矩形塑料支架通过铁钩和连接绳可拆卸的固定于所述水培盒上；所述培育装置为72孔穴...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵岩，王秀华，张寒，潘香逾，孔凡美，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：新型
国别省市：山东,37
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