【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗，具体涉及一种castv-orf2重组腺病毒载体活疫苗及其应用。
技术介绍
1、鸡星状病毒(castv)属于小核糖核酸病毒科,直径为25～30nm，无囊膜单链正股rna病毒。castv是可单独引起发育迟缓综合征的重要病原之一，发病鸡主要表现为腹泻性肠炎和痛风等症状，可引起雏鸡肾炎等疾病。早期castv和其他肠道病毒感染可能会产生异常的肠道环境，促使后来的菌群失调，这是一种细菌和病毒自然定殖的失衡，并且可能由于营养物质消化率降低，导致肠道的屏障保护被削弱，从而进一步影响生长性能。作为一种粪口途径感染鸡群的病毒，castv不仅感染肠道，也往往对肠道外的器官如肾脏和肝脏造成感染。castv的感染引起的白鸡综合征可对鸡的孵化造成严重影响。孵化出的雏鸡羽毛苍白，体弱精神不振，孵化不久后便会死亡，解剖显示病鸡肾脏和肝脏出现病变。受感染的胚胎死亡率高，孵化率大幅下降。
2、castv基因组由一个5′非翻译区(utr)、三个开放阅读框(orfs:orf1a、orf1b和orf2)、一个3′utr和一个多聚腺苷酸(poly a)尾组成，长度约为7.2kb。orf1a和orf1b参与编码与rna转录和复制有关的非结构蛋白(nonstructural protein,nsp)，orf2基因编码星状病毒的衣壳蛋白(cap蛋白，capsid protein)，并与病毒的致病性有关。cap蛋白是星状病毒的主要结构蛋白，具有较高的多样性，该蛋白与宿主相互作用，介导病毒入侵细胞，刺激机体产生抗体，阻止病毒感染。此外，这种蛋白能与宿
3、近年来，国内外陆续报道了castv的感染及相关的临床和病理特征，对养禽业的发展产生了严重的影响，lee等人的研究表明castv重组衣壳蛋自对子代可产生一定的保护效力。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种castv-orf2重组腺病毒载体活疫苗及其应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术第一方面，提供了一种castv-orf2重组蛋白，所述castv-orf2重组蛋白的氨基酸序列如seq id no:3所示。
4、所述castv-orf2重组蛋白氨基酸序列为删除castv-orf2衣壳蛋白氨基酸序列中抗原性低的388aa-455aa区域，加入linker连接臂(aa:ggggs)进行连接，得到castv-orf2重组蛋白的氨基酸序列。
5、本专利技术第二方面，提供了编码上述castv-orf2重组蛋白的目的基因，所述目的基因的核苷酸序列如seq id no:4所示。
6、本专利技术第三方面，提供了castv-orf2重组蛋白或者编码castv-orf2重组蛋白的目的基因在制备预防鸡星状病毒疫苗中的应用。
7、所述预防鸡星状病毒的疫苗为重组腺病毒载体活疫苗。
8、本专利技术第四方面，提供了一种rad5-castv-orf2重组腺病毒载体活疫苗，由如下步骤制备而成：
9、(1)将上述编码castv-orf2重组蛋白的目的基因3′端加上3×flag标签，将目的基因克隆到插入荧光蛋白mneongreen基因的载体pcadv-ef1-cmv-mcs上，获得重组pcadv-ef1-mneongreen-cmv-castv-orf2-3×flag穿梭质粒；
10、(2)将步骤(1)得到的穿梭质粒与腺病毒骨架载体共转染到293t细胞中进行包装，重组获得rad5-castv-orf2重组腺病毒载体活疫苗。
11、所述腺病毒骨架载体为人复制缺陷5型腺病毒载体。
12、所述rad5-castv-orf2重组腺病毒载体活疫苗的病毒滴度≥6.32x1010(pfu/ml)。
13、本专利技术第五方面，提供了上述rad5-castv-orf2重组腺病毒载体活疫苗在制备预防鸡星状病毒感染的生物制品中的应用。
14、本专利技术的有益效果：
15、(1)本专利技术对castv-orf2衣壳蛋白序列进行分析筛选，删除序列中抗原性低的388aa-455aa区域，加入linker连接臂(aa:ggggs)进行连接，得到castv-orf2重组蛋白的氨基酸序列。利用编码该重组蛋白的目的基因制备的castv-orf2重组腺病毒载体活疫苗的抗原性增加，从而更好的提高了对鸡星状病毒感染动物的保护效果。
16、(2)本专利技术在制备castv-orf2重组腺病毒载体活疫苗时，在合成的编码castv-orf2重组蛋白的目的基因3′端加上3×flag标签，将荧光蛋白mneongreen基因克隆到穿梭载体上，并利用无缝克隆技术，将编码castv-orf2重组蛋白的目的基因克隆到穿梭载体，获得pcadv-ef1-mneongreen-cmv-castv-orf2-sdau-3×flag穿梭质粒。利用admax系统，将pcadv-ef1-mneongreen-cmv-castv-orf2-sdau-3×flag穿梭质粒与人复制缺陷5型腺病毒骨架载体共转染到293t细胞进行包装，重组获得castv-orf2重组腺病毒载体活疫苗，利用本专利技术提供的方法制备的疫苗安全性高，能够诱导细胞因子和趋化因子的产生，所用人复制缺陷5型腺病毒载体自身有佐剂效应，无需再添加佐剂。本专利技术制备的rad5-castv-orf2重组腺病毒载体活疫苗可采用肌肉注射或口服免疫等免疫途径，使用方便，具有良好的市场竞争性。
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1.一种CAstV-ORF2重组蛋白，其特征在于，所述CAstV-ORF2重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.编码权利要求1所述CAstV-ORF2重组蛋白的目的基因，其特征在于，所述目的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
3.权利要求1所述CAstV-ORF2重组蛋白或者权利要求2所述编码权利要求1所述CAstV-ORF2重组蛋白的目的基因在制备预防鸡星状病毒疫苗中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述预防鸡星状病毒的疫苗为重组腺病毒载体活疫苗。
5.一种rAd5-CAstV-ORF2重组腺病毒载体活疫苗，其特征在于，由如下步骤制备而成：
6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述腺病毒骨架载体为人复制缺陷5型腺病毒载体。
7.根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述rAd5-CAstV-ORF2重组腺病毒载体活疫苗的病毒滴度≥6.32x1010(pfu/mL)。
8.权利要求5-7任一项所述的rAd5-CAstV-ORF2重组腺病毒载体活
...【技术特征摘要】
1.一种castv-orf2重组蛋白，其特征在于，所述castv-orf2重组蛋白的氨基酸序列如seq id no:3所示。
2.编码权利要求1所述castv-orf2重组蛋白的目的基因，其特征在于，所述目的基因的核苷酸序列如seq id no:4所示。
3.权利要求1所述castv-orf2重组蛋白或者权利要求2所述编码权利要求1所述castv-orf2重组蛋白的目的基因在制备预防鸡星状病毒疫苗中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述预防鸡星状病毒的疫苗为重组腺...
【专利技术属性】
技术研发人员：周德方，孟凡润，成子强，周静，李睿琪，邓兵，晋美旺杰，拉普，德吉普赤，罗桑曲珍，任增帮，普布桑珠，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：
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