一种白酒酿造过程中微生物菌落多样性的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种白酒酿造过程中微生物菌落多样性的检测方法，该方法包括以下步骤：1)酒曲样品的前处理，将酒曲中的微生物菌种用生理盐水洗涤、并沉淀；2)DNA的提取，将得到的微生物用液氮粉碎，再用氯仿和乙醇等提取得到DNA产物，随后用TEbuffer溶解得到DNA溶解液；3)基因组DNA的扩增，以样品总DNA为模板，采用PCR进行扩增；4)基因的测序，使用llumina Miseq测序平台对DNA扩增片段进行高通量测序；5)数据的分析，将得到的高通量测序数据采用Flash软件融合处理后，与现有数据库进行比对得到菌株信息。与现有技术相比，本发明专利技术具有分辨率高、样品需求量少、稳定性好、易控制等优点，适合于各类白酒酿造过程中微生物菌落多样性的检测。

A method for detecting microbial diversity in liquor making process

The invention relates to a method for detecting microbial colony diversity in liquor brewing process, which comprises the following steps: 1) pretreatment of liquor starter samples, washing and precipitating microbial strains in liquor starter with normal saline, 2) DNA extraction, crushing the obtained microorganisms with liquid nitrogen, and then extracting them with chloroform and ethanol, etc. DNA products were then dissolved with TEbuffer to obtain DNA lysate; 3) genomic DNA amplification, using total DNA as template, using PCR amplification; 4) gene sequencing, using the llumina Miseq sequencing platform for high-throughput DNA amplification fragments sequencing; 5) data analysis, the high-throughput sequencing data will be obtained using Flash soft data. After the fusion is processed, the strain information is obtained by comparing with the existing database. Compared with the prior art, the invention has the advantages of high resolution, less sample demand, good stability and easy control, and is suitable for detecting the diversity of microbial colonies in the brewing process of various liquors.

【技术实现步骤摘要】
一种白酒酿造过程中微生物菌落多样性的检测方法
本专利技术设计涉及一种微生物菌落多样性的检测方法，具体是一种白酒酿造过程中微生物菌落多样性的检测方法。技术背景白酒是中国独特的微生物固态酿造与蒸馏的产物。白酒的主要成分是乙醇和水(占总量的98％～99％)，同时其中还含有极少量的酸、酯、醇、醛等有机化合物，这些化合物以一定的比例共存在酒体中，形成了不同香型和不同风格的白酒。在我国传统酿酒工艺中，酒曲、酒醅、酒糟等的酿造不仅孕育了丰富的微生物，而且还是生产优质白酒的重要原料。微生物的存在不仅能使高粱、稻谷、小麦等原料发生一系列复杂的生化反应，分解脂肪、淀粉等使其生成糖脂、氨基酸等物质，进而引发一系列其他的反应，从而生成白酒独特的风味前驱物。不同的微生物对淀粉、蛋白质、脂肪等物质的分解也不尽相同，其分解得到的小分子物质最终是形成醇、醛、酮、酯等物质，进而从整体上影响白酒的风味品质。然而，由于地域的不同、环境的差异、加工环境的不同，不同企业在白酒酿制过程中使得微生物的多样性也相差许多，从而呈现了不同风味的白酒香型。有鉴于此，研究白酒酿造过程中微生物系统的多样性及其生长规律，对于弄清微生物的生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种白酒酿造过程中微生物菌落多样性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)酒曲样品的前处理；2)DNA的提取及分析；3)基因组DNA的扩增；4)基因的测序；5)数据的分析。

【技术特征摘要】
1.一种白酒酿造过程中微生物菌落多样性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)酒曲样品的前处理；2)DNA的提取及分析；3)基因组DNA的扩增；4)基因的测序；5)数据的分析。2.根据权利要求1所述的白酒酿造过程中微生物菌落多样性的检测方法，其特征在于，所述的酒曲样品的前处理步骤包括：取一定量的酒曲样品加入锥形瓶中，加入质量浓度为0.8-0.9％的无菌生理盐水，将锥形瓶置于温度为20-25℃、转速为200-500rpm摇床中摇晃20-40min，采用灭菌后的粗棉布过滤去除酒曲固体渣，将滤液置于12000rpm、5℃下离心10-15min，去除滤液，得到的沉淀物即为微生物。3.根据权利要求2所述的白酒酿造过程中微生物菌落多样性的检测方法，其特征在于，所述的DNA的提取步骤包括：(1)取10-20mg上述微生物于EP管中，用液氮研磨成粉末后，加入0.3-0.5mlDzup，超声震荡3-5min,常温静置5-10min，再加入0.3-0.5ml氯仿，超声震荡3-5min，常温静置3-5min，得到混合液1；(2)将所述的混合液1置于10000rpm、室温下离心10-15min，得到上清液1；(3)向所述的上清液1中加入与所述上清液1等体积的无水乙醇，置于震荡仪上震荡混合2-3min，然后于7000-9000rpm、室温下离心4-8min，去除离心液，向得到的沉淀物中加入2-3ml的70-75％乙醇，于震荡仪上震荡混合10-15min，进行漂洗，然后在12000rpm、室温下离心2-5min，去除离心液，得到DNA沉淀物；(4)将所述的DNA沉淀物置于5-15℃真空干燥器中干燥5-10min，得到干燥后DNA产物；(5)将所述的干燥后的DNA产物溶于TEbuffer，置于震荡仪上震荡混合3-5min，然后在12000rpm、室温下离心2-5min，得到1-2ng/μl的DNA溶解液。4.根据权利要求1所述的白酒酿造过程中微生物菌落多样性的检测方法，其特征在于，所述的基因组DNA的扩增步骤包括：(1)在PCR管中加入以下组分：所述的DNA溶解液，6.0μl；引物1，1.0μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴奕杰，田志强，孟望霓，杨波，孙宗奇，刘廷菊，陈梅，肖莉，何洪，舒梅宝，
申请(专利权)人：贵州省产品质量监督检验院，
类型：发明
国别省市：贵州,52