重组的猪源TNF-α在制备药物中的用途制造技术

本申请公开了重组的猪源TNF‑α在制备药物中的用途。本申请重组猪源TNF‑α的用途包括，在制备激活人细胞中的信号通路的药物中的用途、在制备上调人细胞中的粘附因子、炎性细胞因子、趋化因子或组织因子表达的药物中的用途；并基于此提出了调节人脐静脉内皮细胞中信号通路或下游基因表达的药物，其活性成份中含有重组猪源TNF‑α。本申请研究发现，重组猪源TNF‑α可上调粘附因子E‑selectin、VCAM‑1和ICAM‑1、炎性细胞因子IL‑6、IL‑1β和TNF‑α、趋化因子MCP‑1和IL‑8，以及组织因子的表达，并可激活NF‑κB或P38信号通路；因此，重组猪源TNF‑α可以作为实现这些功能的药物的活性成分。

Application of recombinant pig TNF- alpha in the preparation of drugs

【技术实现步骤摘要】
重组的猪源TNF-α在制备药物中的用途
本申请涉及猪源细胞因子的应用领域，特别是涉及重组的猪源TNF-α在制备药物中的用途。
技术介绍
促炎细胞因子产生于各种人类疾病中，如癌症，自身免疫性疾病，肥胖症和器官移植。这些细胞因子在人类疾病的炎症中起重要作用。在异种移植中也产生各种促炎细胞因子，并与供体或受体细胞交叉反应，本申请的专利技术人预测它们将在免疫和凝血反应中发挥重要作用。许多促炎细胞因子增加组织因子(缩写TF)的表达，促进凝血反应。此前，本申请的专利技术人报道过人IL-6，IL-17，IL-1β和TNF-α以不同方式激活猪的主动脉内皮细胞(缩写PAECs)，并调节促炎相关基因和TF的表达，而人IFN-γ不能。本申请专利技术人的研究数据表明，人的IL-6，IL-17，IL-1β和TNF-α对猪的器官可能会促进炎症和凝血。除了人类细胞因子对猪内皮细胞的影响之外，猪细胞因子对这些细胞的影响也不容忽视。本申请专利技术人预测促炎性猪细胞因子，如IL-6，IFN-γ，IL-1β和TNF-α可能在异种移植中发挥重要的致病作用。这些细胞因子的促炎作用已经在小鼠或人类系统的几种病理生理学条件中得到证实。然而，猪细胞因子在异种移植中的调节作用仍未知或不确定。在异种移植后是否可以诱导猪细胞因子然后激活人类细胞或器官是一个有待研究的问题。
技术实现思路
本申请的目的是提供重组的猪源TNF-α在制备药物中的用途。为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：本申请的一方面公开了重组的猪源TNF-α在制备激活人细胞中的信号通路的药物中的用途。本申请的另一方面公开了重组的猪源TNF-α在制备上调人细胞中的粘附因子、炎性细胞因子、趋化因子或组织因子表达的药物中的用途。本申请的再一方面公开了一种调节人脐静脉内皮细胞中信号通路或下游基因表达的药物，该药物的活性成份中含有重组的猪源TNF-α。需要说明的是，猪的细胞因子在猪到灵长类动物异种移植中能否被诱导以及能否激活人类细胞仍然未知。为研究该问题，本申请的专利技术人，首先，采用人血清刺激猪的主动脉内皮细胞(缩写PAECs)和猪外周血单核细胞(缩写PBMCs)，研究体外模型中异种移植中猪的IL-6，IFN-γ，IL-1β和TNF-α的调节作用并检测下游细胞因子、趋化因子的变化。在两种细胞中，IL-6、IFN-γ和IL-1β等促炎性细胞因子和IL-8、MCP-1和CXCL2等趋化因子的表达均上调。在PAECs中，TNF-α的表达上调了十倍，但在PBMCs中表达不变。然后，本申请选择人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为靶细胞，采用western-blotting法和实时定量PCR法检测了猪IL-6、IFN-γ、IL-1β和TNF-α在异种移植中的作用，研究了信号通路和下游基因，包括粘附因子、炎症因子和凝血因子以及趋化因子。结果显示，在HUVECs中，猪IL-1β和TNF-α可显著激活NF-κB和P38，猪IL-6可激活STAT3。猪IL-1β和TNF-α可上调粘附因子E-selectin、VCAM-1和ICAM-1，炎性细胞因子IL-6，IL-1β和TNF-α，趋化因子MCP-1和IL-8以及促凝血基因的表达。其中，促凝血基因即组织因子。猪IL-6可升高ICAM-1，IL-6，MCP-1和组织因子的表达，但使IL-8表达略有下降。但是，在HUVECs中，猪IFN-γ不能激活STAT1或调节上述任何基因。这些研究发现提示，猪IL-6，IL-1β和TNF-α可激活HUVEC并调节下游基因的表达，能促进异种移植中炎症和凝血反应。基于以上研究和认识，本申请提出了重组的猪源TNF-α在制备药物中的用途及药物。还需要说明的是，本申请的药物能够调节人脐静脉内皮细胞中信号通路或下游基因表达；可以理解，一方面，本申请的药物是基于本申请研究的重组猪源TNF-α的医药用途而提出的，重组猪源TNF-α可以单独作为活性成份调节信号通路或粘附因子、炎性细胞因子、趋化因子、趋化因子或组织因子的表达，也可以与其它活性成份配合一起使用，在此不做限定。另一方面，本申请的药物还可以包含其它药学上可接受辅剂或添加剂，亦或者将本申请的药物制成各种方便给药的剂型，在此不做具体限定。由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：本申请研究发现，重组猪源TNF-α可上调粘附因子E-selectin、VCAM-1和ICAM-1、炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α、趋化因子MCP-1和IL-8，以及组织因子的表达，并可激活NF-κB或P38信号通路；因此，重组猪源TNF-α可以作为实现这些功能的药物的活性成分。附图说明图1是本申请实施例中人血清对PAECs和PBMC中的猪细胞因子/趋化因子表达的调节试验结果，其中A图是人血清对PAECs处理0、1h、2h和6h的后检测的IL-6、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、CXCL2和IL-4表达水平，B图是人血清对PBMCs处理0、1h、2h和6h的后检测的IL-6、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、CXCL2和IL-4表达水平；图中，“*”表示Student'st检验p<0.05，“**”表示Student'st检验p<0.01，“***”表示Student'st检验p<0.001；图2是本申请实施例中猪源IL-6、IL-1β和TNF-α对HUVECs中的信号通路的激活检测结果；图中，A图为猪源IL-6和人源IL-6分别对HUVECs中的信号通路的激活影响结果，A图中左图是蛋白免疫印迹试验结果，右图是实时荧光定量PCR检测的基因表达结果，图中0、15、30、60min是指处理时间；B图为猪源IFN-γ和人源IFN-γ分别对HUVECs中的信号通路的激活影响结果，B图中左图是蛋白免疫印迹试验结果，右图是实时荧光定量PCR检测的基因表达结果，图中0、15、30、60min是指处理时间；C图为猪源IL-1β和人源IL-1β分别对HUVECs中的信号通路的激活影响结果，C图由上至下四个图中，第一个图是蛋白免疫印迹试验结果，其余三个图分别为对NF-κB、p-IκBα和p-P65的实时荧光定量PCR检测的基因表达结果，图中0、15、30、60min是指处理时间；D图为猪源TNF-α和人源TNF-α分别对HUVECs中的信号通路的激活影响结果，D图由上至下四个图中，第一个图是蛋白免疫印迹试验结果，其余三个图分别为对NF-κB、p-IκBα和p-P65的实时荧光定量PCR检测的基因表达结果，图中0、15、30、60min是指处理时间；E图为添加Tocilizumab后猪源IL-6和人源IL-6分别对HUVECs中的信号通路的激活影响结果，E图中左图是蛋白免疫印迹试验结果，右图是实时荧光定量PCR检测的基因表达结果，蛋白免疫印迹图的上方0、15、30、60min是指处理时间，下方的数字是指Tocilizumab的用量；图3是本申请实施例中猪IL-6、IL-1β、IFN-γ和TNF-α对HUVECs中粘附因子E-selectin、VCAM-1和ICAM-1的表达调节结果图；图中，A图是猪源IL-6和人源IL-6对E-selectin、V本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组的猪源TNF‑α在制备激活人细胞中的信号通路的药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.重组的猪源TNF-α在制备激活人细胞中的信号通路的药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述信号通路为NF-κB或P38信号通路。3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述人细胞为人脐静脉内皮细胞。4.重组的猪源TNF-α在制备上调人细胞中的粘附因子、炎性细胞因子、趋化因子或组织因子表达的药物中的用途。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述粘附因子为E-selectin、VCAM-1或ICAM-1。6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述炎性细胞因子为IL-6、IL-1β或TNF-α。7.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟丽莎，高汉超，蔡志明，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：广东,44