一种从孕妇外周血中分离游离胎儿细胞的方法技术

本发明专利技术涉及一种从孕妇外周血中分离游离胎儿细胞的方法。该方法利用微流控芯片的细胞分离作用以及特异性亲和识别原理，实现了孕妇外周血中游离胎儿细胞(胎儿有核红细胞、滋养层细胞等)的高效率、高纯度捕获分离。在微流控芯片内，设计了具有特定几何排布方式的微阵列结构，以及修饰上具有亲和识别作用的分子基团如核酸适体、抗体、多肽等。调节微阵列结构的参数，可以调控不同尺寸的胎儿细胞与微阵列的碰撞效率，进而实现不同尺寸胎儿细胞的捕获富集。

A method of isolating fetal cells from maternal peripheral blood

The invention relates to a method for separating fetal cells from maternal peripheral blood. This method utilizes the microfluidic chip cell separation function and the specific affinity recognition principle to realize the high efficiency and high purity capture and isolation of free fetal cells (fetal nucleated red blood cells, trophoblast cells, etc.) in the peripheral blood of pregnant women. In the microfluidic chip, the microarray structure with specific geometric arrangement and the molecular groups with affinity recognition such as aptamers, antibodies and peptides were designed. The collision efficiency between fetal cells of different sizes and microarrays can be adjusted by adjusting the parameters of microarray structure, and then the capture and enrichment of fetal cells of different sizes can be realized.

【技术实现步骤摘要】
一种从孕妇外周血中分离游离胎儿细胞的方法
本专利技术涉及一种从孕妇外周血中分离游离胎儿细胞的方法。
技术介绍
近年来随着二胎政策的放开，高龄产妇不断增加，出生缺陷率更是呈上升趋势。在出生缺陷的三级预防中，第二级“产前筛查和诊断”是预防出生缺陷中最为重要的手段。羊膜腔穿刺术是高危产妇产前排畸的主要手段，但侵入性强、感染、流产等风险较高。基于胎儿游离DNA的无创产前检测，已广泛应用于常染色体非整倍体的筛查，但存在假阳性率高、无法排除父母染色体异常等不足。于1969年发现的母体外周血中的胎儿细胞，具有完整的胎儿遗传信息，且取样方便，侵入性小，是最具潜力的非侵入性产前诊断对象。但是胎儿细胞一直未真正用到产前诊断最大的挑战在于外周血中胎儿细胞含量稀少(1～10个胎儿细胞/毫升，109个红细胞，106个白细胞)，背景干扰强，很难实现其高特异性捕获。如何从成千上万个背景细胞存在的复杂血液环境中准确的分离出胎儿细胞，建立高效、快速、经济的外周血胎儿细胞富集方法是实现无创、准确产前诊断的瓶颈问题。目前胎儿细胞分离捕获主要存在的问题包括：1、捕获效率非常低。现今胎儿细胞获取的主要方法是磁珠分离法、流式细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从孕妇外周血中分离游离胎儿细胞的方法，包括如下步骤：1)制备用于胎儿细胞捕获的微流控芯片；该微流控芯片设计含有至少一个进样口和至少一个出样口；进样口和出样口之间为具有特定几何排布的微阵列；所述的特定几何排布为，微流控芯片的整体临界尺寸设为Dc，其由公式Dc＝1.4×G×(Δλ/λ)0.48设定，其中，柱子间的水平间距设为G，其大小在0到50微米之间；同一行中三角形垂心之间的距离设为λ，其大小在100‑150微米之间；同一行中第二个三角形相较于第一个三角形的向上偏移值设为Δλ，其大小在0到20微米之间；微流控芯片的整体临界尺寸设为Dc；2)在所述微阵列表面修饰胎儿细胞特异性识分子；3)调...

【技术特征摘要】
1.一种从孕妇外周血中分离游离胎儿细胞的方法，包括如下步骤：1)制备用于胎儿细胞捕获的微流控芯片；该微流控芯片设计含有至少一个进样口和至少一个出样口；进样口和出样口之间为具有特定几何排布的微阵列；所述的特定几何排布为，微流控芯片的整体临界尺寸设为Dc，其由公式Dc＝1.4×G×(Δλ/λ)0.48设定，其中，柱子间的水平间距设为G，其大小在0到50微米之间；同一行中三角形垂心之间的距离设为λ，其大小在100-150微米之间；同一行中第二个三角形相较于第一个三角形的向上偏移值设为Δλ，其大小在0到20微米之间；微流控芯片的整体临界尺寸设为Dc；2)在所述微阵列表面修饰胎儿细胞特异性识分子；3)调控微阵列的临界直径为0-50微米、流速为0-10mL/h，使得微流控芯片的细胞捕获效率达到最优；4)将2-10毫升孕妇外周血进行梯度离心分离，获得单核细胞；5)将步骤4)得到的单核细胞重悬于磷酸盐缓冲液中，注入到微流控芯片中进行胎儿细胞的捕获。2.如权利要求1所述的一种从孕妇外周血中分离游离胎儿细胞的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨朝勇，张惠敏，杨园园，李星锐，施远志，朱志，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建,35