一株海洋放线菌及其筛选、应用制造技术

本发明专利技术属于海洋放线菌资源开发与利用领域，具体涉及一株能够抑制黄曲霉、金黄色葡萄球菌、产气杆菌生长的海洋放线菌及其筛选、应用。该海洋放线菌的保藏编号为CGMCC No.15129。本发明专利技术提供的菌株对于黄曲霉、金黄色葡萄球菌、产气杆菌具有明显的抑制作用，抑菌效果显著，具有广阔的应用前景。本发明专利技术筛选出的菌株具有旺盛的生长能力，可大批发酵。

Marine actinomycetes and their screening and Application

The invention belongs to the field of marine actinomycete resources exploitation and utilization, in particular relates to a marine actinomycete capable of inhibiting the growth of Aspergillus flavus, Staphylococcus aureus and Aerobacterium, and its screening and application. The preservation number of the marine actinomycete is CGMCC No.15129. The strain provided by the invention has obvious inhibitory effect on Aspergillus flavus, Staphylococcus aureus and Aerobacterium, has remarkable bacteriostatic effect and broad application prospect. The strains screened by the invention have strong growth ability and can be fermented in large quantities.

【技术实现步骤摘要】
一株海洋放线菌及其筛选、应用
本专利技术属于海洋放线菌资源开发与利用领域，具体涉及一株能够抑制黄曲霉、金黄色葡萄球菌、产气杆菌生长的海洋放线菌及其筛选、应用。
技术介绍
放线菌是产生天然生物活性物质的重要微生物资源，其开发利用一直备受各国重视。迄今所发现的20000余种微生物来源的生物活性物质中，约有50%是由放线菌产生的。因此，放线菌资源的开发以及采用新方法对放线菌资源的深入挖掘一直是放线菌代谢产物研究的重要内容。海洋具有低温、低营养、高盐、无光照、缺氧等独特的物理、化学和生态环境，故海洋放线菌必然产生与陆地微生物不同的代谢途径和机体防御机制，这对发现新型药物先导化合物、研究药物作用新机理、新靶点等具有重要的意义。黄曲霉，半知菌类，一种常见腐生真菌。多见于发霉的粮食、粮制品及其它霉腐的有机物上。菌落生长较快，结构疏松，表面灰绿色，背面无色或略呈褐色。菌体有许多复杂的分枝菌丝构成。营养菌丝具有分隔;气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端产生烧瓶形或近球形顶囊，表面产生许多小梗(一般为双层)，小梗上着生成串的表面粗糙的球形分生孢子。黄曲霉毒素是一种毒性极强的剧毒物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。黄曲霉能够引起人的中毒主要是损害肝脏，发生肝炎、肝硬化、肝坏死等。临床表现有胃部不适、食欲减退、恶心、呕吐、腹胀及肝区触痛等，严重者出现水肿、昏迷以至抽搐而死。同时黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质，其致癌力是奶油黄的900倍，其诱发肝癌能力比二甲基硝胺大75倍。类健康受黄曲霉毒素的危害主要是由于食用被黄曲霉毒素污染的食物。对于这一污染的预防是非常困难的，其原因是真菌在食物或食品原料中的存在是很普遍的。产气杆菌为革兰氏阳性粗大梭菌，致病条件与破伤风梭菌相似。产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素，又有多种侵袭性酶，并有荚膜，构成其强大的侵袭力，引起感染致病。毒素的毒性虽不如肉毒毒素和破伤风毒素强，但种类多，外毒素有α、β、γ、δ、ε、η、θ、ι、κ、λ、μ、ν等12种，和具有毒性作用的多种酶，如卵磷脂酶、纤维蛋白酶、透明质酸酶、胶原酶和DNA酶等，构成强大的侵袭力。目前还没有利用绣赤蜡黄链霉菌发酵液抑制黄曲霉等菌生长的报道。
技术实现思路
本专利技术提供了一株海洋放线菌。本专利技术还提供了上述海洋放线菌的筛选方法。本专利技术还提供了上述筛选的海洋放线菌在抑制黄曲霉、金黄色葡萄球菌、产气杆菌生长的应用。本专利技术为了实现上述目的所采用的技术方案为：本专利技术提供了一株海洋放线菌，该海洋放线菌的保藏编号为CGMCCNo.15129。本专利技术还提供了一种上述海洋放线菌的筛选，包括以下步骤：（1）称取1g海泥，加入10mL胆酸钠溶液和玻璃珠10颗，振荡，离心；将上层海泥悬液转移至管(1)中，下层海泥沉淀加入l0ml冷的0.05mol/LTris缓冲液，振荡离心，将上层土壤悬液合并入管(1)中，得到第一步海泥处理液；（2）下层海泥沉淀加入l0mL胆酸钠溶液，,超声波水浴温和处理1min，再加入l0mL胆酸钠溶液，振荡，离心；将上层土壤悬液转移至管(2)内；加入l0ml冷的0.05mol/LTris缓冲液，振荡，离心；将上层海泥悬液合并至管(2)内，得到第二步海泥处理液；将剩余小颗粒沉淀重新悬浮在40mL冷水中，200r/min振荡30min，得到第三步海泥处理液；将3部分海泥处理液均于5000g离心20min，弃上清，沉淀物分别重新悬浮10ml生理盐水中，做10-2到10-4系列梯度稀释，每个稀释度各取0.2mL涂布在腐植酸培养基平板上，添加浓度为50ug/mL的萘啶酮酸，同时添加浓度为75ug/mL的重铬酸钾；挑取单菌落做进一步的纯化，分离单菌落所用的培养基为高氏一号培养基，连续进行3次划线以纯化出单一菌落；（3）将纯化出来的单菌落在高氏一号液体培养基上进行发酵，发酵完成后离心取上清过滤除菌进行抑菌试验；所述发酵为在30℃下，150-180r/min摇床发酵5-7d即可。进一步的，所述胆酸钠溶液的质量浓度为0.1%。进一步的，步骤（1）和（2）中，所述振荡为200r/min条件下振荡30min；所述离心为500g离心1min。本专利技术所使用的Tris缓冲液的pH为7.4。进一步的，所述腐殖酸培养基优化的配方为：腐殖酸1g，Na2HPO40.5g，KCl1.7gMgSO4,0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，CaCO30.02g，复合维生素1mL进一步的，所述高氏一号培养基优化的配方为：可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，FeSO4·7H2O0.01g，MgSO4·7H2O0.5g，NaCl0.5g。本专利技术还提供了一种上述筛选的海洋放线菌在抑制黄曲霉、金黄色葡萄球菌、产气杆菌方面的应用。本专利技术提供的菌株中，所使用的海泥来源于日照海岸线海泥，经过腐殖酸培养基的筛选，然后利用高氏一号培养基进行划线纯化获得。本专利技术涉及的菌株经16SrDNA鉴定属于绣赤蜡黄链霉菌（Streptomycesrubiginosohelvolus）。本专利技术的有益效果为：（1）本专利技术提供的菌株对于黄曲霉、金黄色葡萄球菌、产气杆菌具有明显的抑制作用，抑菌效果显著，具有广阔的应用前景。（2）本专利技术筛选出的菌株具有旺盛的生长能力，可大批发酵。菌种保藏信息保藏时间：2017年12月26日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCCNo.15129，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101分类命名：Streptomycesrubiginosohelvolus。附图说明图1为本专利技术筛选的海洋放线菌抑制黄曲霉菌的抑菌图片。图2为本专利技术筛选的海洋放线菌抑制金黄色葡萄球菌的抑菌图片。图3为本专利技术筛选的海洋放线菌抑制产气杆菌的抑菌图片。具体实施方式下面通过具体的实施例对本专利技术的技术方案作进一步的解释和说明。实施例1绣赤蜡黄链霉菌（Streptomycesrubiginosohelvolus）的获取采用分散和差速离心法（Dispersionanddifferentialcentrifugation,DDC)进行样品处理，其步骤如下：（1）称取1g海泥，加入10mL胆酸钠(0.1%w/v)和玻璃珠10颗，200r/min振荡30min，500g离心1min。将上层海泥悬液转移至另一干净管(1)中，下层海泥沉淀加入l0ml冷的0.05mol/LTris缓冲液(pH7.4)，200r/min振荡30min,500g离心1min，将上层土壤悬液合并入管(1)中，得到第一步海泥处理液。（2）下层海泥沉淀加入l0mL胆酸钠(0.1%w/v)，30w超声波水浴温和处理1min,再加入l0mL胆酸钠(0.1%w/v)，200r/min振荡30min，500g离心1min。将上层土壤悬液转移至管(2)内;加入l0ml冷的0.05mol/LTris缓冲液(pH7.4)，200r/min振荡30min,500g离心1min。将上层海泥悬液合并至管(2)内，得到第二步海泥处理液。将剩余小颗粒沉淀重新悬浮在40mL冷水中，200r/min振荡30min，得到第本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种海洋放线菌，其特征在于，该海洋放线菌的保藏编号为CGMCC No.15129。

【技术特征摘要】
1.一种海洋放线菌，其特征在于，该海洋放线菌的保藏编号为CGMCCNo.15129。2.一种如权利要求1所述的海洋放线菌的筛选，其特征在于，包括以下步骤：（1）称取1g海泥，加入10mL胆酸钠溶液和玻璃珠10颗，振荡，离心；将上层海泥悬液转移至管(1)中，下层海泥沉淀加入l0ml冷的0.05mol/LTris缓冲液，振荡离心，将上层土壤悬液合并入管(1)中，得到第一步海泥处理液；（2）下层海泥沉淀加入l0mL胆酸钠溶液，,超声波水浴温和处理1min，再加入l0mL胆酸钠溶液，振荡，离心；将上层土壤悬液转移至管(2)内；加入l0ml冷的0.05mol/LTris缓冲液，振荡，离心；将上层海泥悬液合并至管(2)内，得到第二步海泥处理液；将剩余小颗粒沉淀重新悬浮在40mL冷水中，200r/min振荡30min，得到第三步海泥处理液；将3部分海泥处理液均于5000g离心20min，弃上清，沉淀物分别重新悬浮10ml生理盐水中，做10-2到10-4系列梯度稀释，每个稀释度各取0.2mL涂布在腐植酸培养基平板上，添加浓度为50ug/mL的萘啶酮酸，同时添加浓度为75ug/mL的重铬酸钾；挑取单菌落做...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨革，曹利，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东,37