【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】DNA重组中的或与DNA重组相关的改进本专利技术总的来说涉及DNA重组，具体来说涉及一种用于生产DNA重组片段的方法，所述DNA重组片段具有靶DNA的基于重组的操作所需的与所述靶DNA内的所需遗传操作位点同源的必需的侧接区。因此，本专利技术涉及基于CrispR/Cas9、基于E/T和其他基于重组的技术，所述技术使用这些DNA片段作为它们的重组系统的组成部分。重组的机制仍未被完全确定，但涉及DNA序列的拷贝、切割和共价连接。重组可以发生在两个不同DNA分子之间(分子间重组)或单个DNA分子的两个区域之间(分子内重组)。本专利技术提供了一种将所需遗传元件插入到任何靶基因组中的方法，所述方法包括将如本文中所述形成的同源侧接的遗传元件重组到所述靶基因组中。本专利技术还涉及用于病毒和基于病毒的载体的快速遗传操作的技术。所述靶DNA可以是病毒基因组，例如疱疹病毒基因组如CMV。根据本专利技术的一种情况，提供了一种用于构建DNA重组片段的不基于PCR的方法，所述DNA重组片段具有靶DNA的基于重组的操作所需的与所述靶DNA内的所需遗传操作位点同源的必需的侧接区。用于DNA病毒(疱...
【技术保护点】
1.一种用于构建DNA重组片段的不基于PCR的方法，所述DNA重组片段具有靶DNA的基于重组的操作所需的与所述靶DNA内的所需遗传操作位点同源的必需的侧接区，所述方法包括下述步骤：A)鉴定所述靶DNA中用于遗传元件的所需插入位点；B)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点上游的所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定上游同源区的5'范围；C)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点下游的同一所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定下游同源区的3'范围；D)合成侧接区基因盒(FRC)，其引起上游半位点和下游半位点的并置，从...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.08 GB 1514034.61.一种用于构建DNA重组片段的不基于PCR的方法，所述DNA重组片段具有靶DNA的基于重组的操作所需的与所述靶DNA内的所需遗传操作位点同源的必需的侧接区，所述方法包括下述步骤：A)鉴定所述靶DNA中用于遗传元件的所需插入位点；B)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点上游的所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定上游同源区的5'范围；C)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点下游的同一所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定下游同源区的3'范围；D)合成侧接区基因盒(FRC)，其引起上游半位点和下游半位点的并置，从而导致形成侧接有所述上游同源区和下游同源区的所选限制性内切核酸酶的完整限制性位点；以及E)将所述FRC插入到包含用于操作所述靶DNA的遗传元件的质粒载体中，在所述质粒载体上提供所述必需的侧接同源区，用于在所述所需插入位点处在所述靶DNA内的重组。2.一种用于构建DNA重组片段的不基于PCR的方法，所述DNA重组片段具有靶DNA的基于重组的操作所需的与所述靶DNA内的所需遗传操作位点同源的必需的侧接区，所述方法包括下述步骤：A)鉴定所述靶DNA中用于遗传元件的所需插入位点；B)选择所选限制性内切核酸酶的异源的、非本源的半位点，其中限制性位点的选择是基于在与待靶向的DNA区域侧接的上游同源区和下游同源区内不存在完整形式的所述限制性位点；C)合成侧接区基因盒(FRC)，其包括上游同源区和下游同源区并引起被它们的非本源半位点隔开的所述上游侧接同源区和下游侧接同源区的并置，从而导致形成侧接有所述同源区的所选限制性内切核酸酶的完整限制性位点；以及D)将所述FRC插入到包含用于操作所述靶DNA的遗传元件的质粒载体中；在所述载体上提供所述必需的侧接同源区，用于在所述靶位点处在所述基因组内的重组。3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述方法还包括以下步骤：通过使用所选限制性内切核酸酶在所述FRC内切开来将所述载体线性化以形成重组片段，由此使所述重组片段具有所述必需的侧接同源区，以在所述靶位点处在所述基因组内指导重组。4.前述权利要求任一项的方法，其中所述限制性内切核酸酶位点不存在于在所述靶DNA的操作期间使用的所述侧接同源区或遗传元件内。5.前述权利要求任一项的方法，其中所述内切核酸酶是稀有切点切割酶。6.前述权利要求任一项的方法，其中所述内切核酸酶是8个核苷酸的切割酶。7.前述权利要求任一项的方法，其中所述上游同源区和下游同源区的长度为至...
【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔·贾维斯，艾斯灵·墨菲，彼得·巴里，
申请(专利权)人：普利茅斯大学，加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：英国,GB
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