Orai1蛋白作为心肌梗塞生物标志物的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种Orai1蛋白，特别是外周血血浆中的外泌体上的Orai1蛋白，作为凝血相关疾病，如心肌梗塞，生物标志物的用途。本发明专利技术的发明专利技术人发现人外周血血浆中的外泌体上Orai1蛋白的表达水平与凝血相关的疾病具有正向相关关系，据此提供对人外周血血浆中的外泌体上Orai1蛋白的表达水平进行定量分析用于诊断凝血相关的疾病风险的方法。另外，Orai1还可以为药物治疗等临床应用提供治疗靶点和重要依据。

【技术实现步骤摘要】
Orai1蛋白作为心肌梗塞生物标志物的用途
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种Orai1蛋白，特别是外周血血浆中的外泌体上的Orai1蛋白，作为凝血相关疾病，如心肌梗塞，生物标志物的用途。
技术介绍
急性心肌梗死，又名心肌梗塞(AMI)是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死。按照世界卫生组织(WHO)标准：典型的胸痛、心电图改变和心肌酶异常三项指标中有两项符合，即可诊断AMI。AMI在临床表现上有心绞痛与无痛两种表现，在我国AMI病人无症状约占总患病人口的25％，无典型心绞痛表现的病例约占30％，临床上一般采用心电图进行诊断，心电图诊断AMI的准确性平均约60％。有确诊意义的病理性Q波常在发病6～8小时以后才出现，而目前心电图对诊断非Q波AMI缺乏特异性，由此不稳定心绞痛和小范围AMI难以鉴别，使得AMI早期心电图确诊率很低，然而其发病后1-6小时是溶栓治疗和介入手术治疗的黄金时间，所以快速诊断发病6小时内的早期心肌梗塞是决定治疗的关键环节。2015年中国心血管病报告显示，自2002年到2014年AMI死亡率总体呈上升态势，从2005年开始呈快速上升趋势。2014年中国AMI死亡率城市为55.32/10万，农村为68.6/10万。自2013年，农村心肌梗死死亡率已超过城市并持续上升。心肌损伤生化标志物的检测在急性心肌梗塞的诊断、监测、危险评估、预后和引导治疗等方面都起到了重要作用，目前常用的心肌损伤生化标志物有肌酸激酶同功酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTnI或CTNI)、肌红蛋白(Myoglobin)等。肌红蛋白作为心脏损伤早期标志物，其缺乏对心肌的特异性。心肌肌钙蛋白在数天后才会升高，因此难以在6小时内实现快速诊断。CK-MB虽然快速经济有效，但依然缺乏特异性。此三个标志物作为心肌梗塞检测的常规手段，都在心肌损伤生化标志物的在急性心肌梗塞早期诊断，尤其是发病6小时以内的早期诊断的敏感性和特异性方面有不足。因此，方便提取样本且特异性较好的诊断手段对心肌梗塞的早期诊断有着重要的意义。经研究发现，细胞膜蛋白Orai1所构成的库操控的钙通道(store-operatedcalciumchannels，SOCC)存在于人外周血血浆中提取的外泌体中。Orai1蛋白是血小板主要钙通道之一(ProgressinPhysiologicalSciences,2012,43:417-421)，Orai1蛋白激活与血小板的凝血功能相关，参与GPVI诱导的库操控的钙流入(store-operatedCa2+entrySOCE)、凝血酶源激活和血栓形成(JBiolChem,2010,285,23629-23638)。Orai1高表达于血小板，研究发现，敲除Orai1后的小鼠与野生型小鼠相比，出现严重的CRAC通道缺陷，激动诱导性钙应答，活化受损和血栓形成(Blood,2009,113:2056-63)。Orail蛋白敲除会在体外实验中导致血小板聚集降低和在体内导致血栓形成(AnnNYAcadSci.2015,1356(1):45-79)。Orai1蛋白血小板生物活动和血栓形成过程中的重要性使得其有条件成为检测血小板活性的生物标记。外泌体(exosome)，直径约为30-150nm，密度在1.13-1.21g/m1，是由细胞主动分泌的膜性囊泡，经过"内吞-融合-外排"等一系列调控过程而形成。外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、腹水和母乳。外泌体会携带源细胞独特或关键的功能分子，导致不同来源的外泌体有不同的生物学功能。因此根据外检测泌体所含的物质，去测定某些细胞内的某些蛋白质与核酸的变化具有可能性。目前，已经有许多疾病，包括某些肿瘤，可以对患者血浆中的外泌体进行检测，通过一定实验和数据分析方法研究样品中的蛋白质含量，对比正常个体的样品数据实现早期诊断，为疗效判断和预后提供重要依据。已有多篇研究在外周血提取的外泌体中发现Orai1蛋白(JBiolChem.2015,290(19):11983-11999)。血小板外泌体已被发现在凝血、血管再生等重要血液活动中有着关键作用，而血小板外泌体所携带的蛋白数量也会随着血小板功能改变而变化(Pharmacol.2016,7:293)。根据已有研究报道，本专利专利技术人假设在凝血障碍发生时，携带Orai1蛋白的外泌体大多来自于血小板，且血小板外泌体的蛋白表达及活性与血小板活动状态相关，并实验验证假设成立且外泌体较血小板更为敏感。综上所述，根据外周血提取的外泌体中Orai1蛋白表达情况，能够检测血小板功能的变化，从而有效的进行诊断。经本专利研究发现，心肌梗死患者与健康个体的外泌体中Orai1蛋白表达具有差异性，因此Orai1蛋白具有成为心肌梗死早期生物标志物的可能，为早期心肌梗死中提供诊断，为患病程度和预后治疗提供依据。
技术实现思路
本专利技术一方面提供一种Orai1蛋白或其活性片段、检测Orai1蛋白或其活性片段的物质在制备凝血相关疾病的诊断产品中的应用。优选地，所述诊断包括患有所述疾病的风险的诊断、所述疾病严重程度的诊断和所述疾病预后恢复的诊断等。优选地，所述凝血相关疾病为血栓；更优选为心血栓。在本专利技术的一个实施方案中，所述疾病为心肌梗塞，特别是心血栓引起的心肌梗塞。优选地，所述诊断是通过测定样品中Orai1蛋白及其活性片段的含量进行的。优选地，所述样品来源于哺乳动物，如人类、大鼠、小鼠等，更优选为人。在本专利技术的一个实施方案中，所述诊断是通过测定外周血血浆中的外泌体上的Orai1蛋白的含量进行的。在本专利技术的一个实施方案中，所述检测Orai1蛋白或其活性片段的物质为抗Orai1蛋白或其活性片段的抗体。优选地，所述抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体。优选地，所述的产品选自：试剂、药物、试纸、试剂盒、芯片等中的一种或多种。在本专利技术的一个实施方案中，所述产品为试剂盒。优选地，所述试剂盒包括抗Orai1蛋白或其活性片段的抗体。优选地，所述抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体。在本专利技术的一个实施例中，所述试剂盒为酶联免疫试剂盒。在本专利技术的一个优选实施例中，所述酶联免疫试剂盒包括抗Orai1蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体；更优选地，所述单克隆抗体用作检测抗体，多克隆抗体用作捕获抗体。本领域技术人员可通过常规实验进行捕获抗体和检测抗体的配对筛选，获得结合信号较强的一对或多对捕获抗体和检测抗体，本专利技术对此不作具体限定。在本专利技术的一个实施方案中，所述应用为Orai1蛋白或其活性片段、检测Orai1蛋白或其活性片段的物质在制备诊断患有凝血相关疾病(特别是心肌梗塞)的风险的产品中的应用。优选地；所述应用根据样品中Orai1蛋白(特别是外周血血浆中的外泌体上的Orai1蛋白)含量或含量的变化来诊断患有凝血相关疾病(特别是心肌梗塞)的风险；当样品中Orai1蛋白含量升高或其含量高于正常值时，特别是样品中Orai1蛋白含量均升高或其含量均高于正常值时，表明受试者患有凝血相关疾病(特别是心肌梗塞)的风险较高，且样品中Orai1蛋白含量偏离正常值的程度与患病风险呈正相关。在本专利技术的另一个实施方案中，所述应用为Orai1蛋白或其活性片段、检测Orai1蛋白或其活性片段的物质在制备评估凝血相关疾病(特别是心肌梗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Orai1蛋白或其活性片段、检测Orai1或其活性片段的物质在制备凝血相关疾病的诊断产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种Orai1蛋白或其活性片段、检测Orai1或其活性片段的物质在制备凝血相关疾病的诊断产品中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的诊断包括患有所述疾病的风险的诊断、所述疾病严重程度的诊断和所述疾病预后恢复的诊断；和/或，所述疾病为心肌梗塞。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述诊断是通过测定外周血血浆中的外泌体上的Orai1蛋白及其活性片段的含量进行的。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测Orai1蛋白或其活性片段的物质为抗Orai1蛋白或其活性片段的抗体。5.如权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述的产品选自：试剂、药物、试纸、试剂盒和芯片中...

【专利技术属性】
技术研发人员：董鸣，杨子仪，余卓，金娜，
申请(专利权)人：深圳承启生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44