The invention relates to a nickel magnetic microsphere and a preparation method and application thereof. In the present invention, magnetic silica microspheres with magnetic matrix particles as core, tetraethyl orthosilicate as silicon source and shell reaction are prepared by sol-gel method. The microspheres are used as templates, and the ligands formed by epoxy-silane coupling agent KH_560 and iminodiacetic acid modification are used as complexing agents. The chelating alloy belongs to nickel ion, and the surface is prepared. Magnetic silica microspheres which chelate nickel ions. The magnetic silica microspheres modified by iminodiacetic acid can provide multiple coordination sites for metal nickel ions, which not only ensures the strong interaction between the modified microspheres and metal nickel ions, but also ensures that the unsaturated coordination sites of metal ions can interact with proteins, so as to realize the magnetic dimerization of metal nickel ions on the surface chelated alloys. Silica microspheres separate proteins from solution.
【技术实现步骤摘要】
一种镍化磁性微球及其制备方法和其应用
本专利技术涉及一种磁性微球,尤其涉及一种镍化磁性微球及其制备方法和其应用。
技术介绍
目前用于His标签蛋白纯化的主要是商品化的具有一定交联度的多孔琼脂糖微球,其具有高的表面积的,其可蛋白质相互接触,并可以容纳大量的液体。但是在纯化大量蛋白的时候,这种多孔的结构也会带来一些问题,如:1)抗体被困在孔内,难以洗去,因此需要大量的洗涤来降低背景;2)免疫沉淀的洗涤是在微量离心管中进行的,液体之间的交换通过移液枪来完成,很容易丢失样品。3)微球上的抗体与目标蛋白接触的慢,需要长的孵育时间。4)长的孵育时间及大量的洗涤导致目标蛋白的机械及生物(蛋白酶水解)损失。近年来,磁分离技术被广泛应用于生物分离纯化的各个领域。磁分离技术不仅可以通过外加磁场进行简单的分离,而且磁性基质表面容易功能化,其在实际的生物应用领域易于修饰,研究和应用越来越广泛。磁性微球在His标签蛋白的纯化和分离方面也有一定的潜在应用,目前也开发一系列商品。但其主要是在传统琼脂糖微球的基础上负载一定量磁性物质,其制备繁琐,且微球结构和性能不均一。
技术实现思路
针对现有的磁分离技术存在的上述问题,现提供一种镍化磁性微球及其制备方法和其应用,旨在提供一种结构和性能均一的镍化磁性微球。具体技术方案如下:本专利技术的第一个方面是提供一种镍化磁性微球的制备方法,具有这样的特征,包括如下步骤:1)、向磁性基质中加入0.01mol/L强酸溶液,在超声条件下活化处理20-40min,磁分离后用超纯水将磁性基质洗涤至中性,再向分离出的经强酸活化过的磁性基质中依次加入无水醇、超纯水、2 ...
【技术保护点】
1.一种镍化磁性微球的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:1)、向磁性基质中加入0.01mol/L强酸溶液,在超声条件下活化处理20‑40min,磁分离后用超纯水将磁性基质洗涤至中性,再向分离出的经强酸活化过的磁性基质中依次加入无水醇、超纯水、25wt%氨水和正硅酸烷基酯,超声反应2‑5h,磁分离后用超纯水洗涤至中性得到磁性二氧化硅微球,磁性基质、强酸、无水醇、超纯水、氨水、正硅酸烷基酯的用量比为1g:10‑40mL:80‑160mL:20‑80mL:0.4‑1.6mL:0.5‑4mL;2)、向所述磁性二氧化硅微球中依次加入无水醇、超纯水、25wt%氨水和KH‑560超声反应2‑5h,磁分离后用超纯水洗涤至中性得到环氧化磁性二氧化硅微球,磁性二氧化硅微球、无水醇、超纯水、氨水、KH‑560的用量比为1g:80‑160mL:20‑80mL:0.4‑1.6mL:0.5‑4mL;3)、将亚氨基二乙酸溶解于1mol/L的第一碱溶液中,并用饱和第二碱溶液调节其pH=11‑12,向其中加入所述环氧化磁性二氧化硅微球,室温下反应6‑12h,磁分离后用超纯水洗涤至中性得到羧基化化磁性二氧化硅微球,亚氨 ...
【技术特征摘要】
1.一种镍化磁性微球的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:1)、向磁性基质中加入0.01mol/L强酸溶液,在超声条件下活化处理20-40min,磁分离后用超纯水将磁性基质洗涤至中性,再向分离出的经强酸活化过的磁性基质中依次加入无水醇、超纯水、25wt%氨水和正硅酸烷基酯,超声反应2-5h,磁分离后用超纯水洗涤至中性得到磁性二氧化硅微球,磁性基质、强酸、无水醇、超纯水、氨水、正硅酸烷基酯的用量比为1g:10-40mL:80-160mL:20-80mL:0.4-1.6mL:0.5-4mL;2)、向所述磁性二氧化硅微球中依次加入无水醇、超纯水、25wt%氨水和KH-560超声反应2-5h,磁分离后用超纯水洗涤至中性得到环氧化磁性二氧化硅微球,磁性二氧化硅微球、无水醇、超纯水、氨水、KH-560的用量比为1g:80-160mL:20-80mL:0.4-1.6mL:0.5-4mL;3)、将亚氨基二乙酸溶解于1mol/L的第一碱溶液中,并用饱和第二碱溶液调节其pH=11-12,向其中加入所述环氧化磁性二氧化硅微球,室温下反应6-12h,磁分离后用超纯水洗涤至中性得到羧基化化磁性二氧化硅微球,亚氨基二乙酸、第一碱溶液、环氧化磁性二氧化硅微球的用量比为2-4g:10-30mL:2-6g;4)、将所述羧基化磁性二氧化硅微...
【专利技术属性】
技术研发人员:王华林,张涛,张科登,
申请(专利权)人:湖北新纵科病毒疾病工程技术有限公司,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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