异叶马兜铃菲内酯B下调FoxM1基因的用途及在肿瘤治疗方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了异叶马兜铃菲内酯B下调FoxM1基因的用途及在肿瘤治疗方面的应用。本发明专利技术发现异叶马兜铃菲内酯B可以下调多种肿瘤细胞中FoxM1基因的表达，而本领域技术人员知道FoxM1基因与多种肿瘤的发生、发展有关(下调FoxM1基因表达对宫颈癌细胞侵袭能力的影响，武汉大学学报2015年第36卷第2期；紫花牡荆素抑制FoxM1诱导乳腺癌细胞凋亡的研究，中国癌症杂志2012年第22卷第12期；FoxM1对肺癌中MMP‑2、MMP‑9和迁移侵袭的影响，现代肿瘤医学2014年第22卷第8期)，因此，异叶马兜铃菲内酯B可以用于制备成FoxM1基因表达抑制剂对肿瘤进行治疗。

【技术实现步骤摘要】
异叶马兜铃菲内酯B下调FoxM1基因的用途及在肿瘤治疗方面的应用
本专利技术属于生物医药领域，尤其涉及异叶马兜铃菲内酯B下调FoxM1基因的用途及在肿瘤治疗方面的应用。
技术介绍
叉头盆蛋白质M1(ForkheadboxproteinM1，FoxM1)是Forkhead家族的一个致瘤转录因子，已被证实在多种肿瘤细胞增殖和周期进展中发挥至关重要的作用。FoxM1在超过20种人类肿瘤中过表达，促进肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移、抗凋亡和化疗耐药等过程。越来越多的证据表明，FoxM1在肿瘤细胞增殖与代谢之间发挥信使作用，使肿瘤细胞的增殖与代谢相适应(FoxM1与肿瘤代谢关系的研究进展，中国肿瘤临床2015年第42卷第22期)。异叶马兜铃菲内酯B为一种存在于异叶马兜铃中的化合物，CAS登录号为205241-15-2，化学结构式如下：现有技术未见异叶马兜铃菲内酯B用于抑制FoxM1基因表达的报道。
技术实现思路
本专利技术旨在提供异叶马兜铃菲内酯B下调FoxM1基因的用途及在肿瘤治疗方面的应用。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：异叶马兜铃菲内酯B用作FoxM1基因表达抑制剂的用途。一种FoxM1基因表达抑制药物，活性成分为异叶马兜铃菲内酯B。异叶马兜铃菲内酯B用于治疗肿瘤的医药用途。优选地，所述肿瘤包括宫颈癌、乳腺癌和肺癌。一种肿瘤治疗药物，活性成分为异叶马兜铃菲内酯B。优选地，所述肿瘤包括宫颈癌、乳腺癌和肺癌。有益效果：本专利技术发现异叶马兜铃菲内酯B可以下调多种肿瘤细胞中FoxM1基因的表达，而本领域技术人员知道FoxM1基因与多种肿瘤的发生、发展有关(下调FoxM1基因表达对宫颈癌细胞侵袭能力的影响，武汉大学学报2015年第36卷第2期；紫花牡荆素抑制FoxM1诱导乳腺癌细胞凋亡的研究，中国癌症杂志2012年第22卷第12期；FoxM1对肺癌中MMP-2、MMP-9和迁移侵袭的影响，现代肿瘤医学2014年第22卷第8期)，因此，异叶马兜铃菲内酯B可以用于制备成FoxM1基因表达抑制剂对肿瘤进行治疗。附图说明图1为异叶马兜铃菲内酯B对宫颈癌细胞、乳腺癌细胞和肺癌细胞中FoxM1基因表达的影响；5μM异叶马兜铃菲内酯B作用24h可以显著抑制人宫颈癌Hela细胞、人乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌H1299细胞中FoxM1基因的表达(P<0.05)。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。实施例1：异叶马兜铃菲内酯B对宫颈癌细胞中FoxM1基因表达的影响一、实验材料异叶马兜铃菲内酯B自制，纯度不低于95％。人宫颈癌Hela细胞购自ATCC细胞库。RPMI1640培养基购自Gibco公司，胎牛血清购自Hyclone公司。BCA蛋白分析试剂盒购自美国Pierce公司。兔抗人的FoxM1多克隆抗体及内参GAPDH抗体均购于SantaCruz公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔二抗为上海申能博彩生物科技有限公司产品。TRIzol试剂购于美国Invitrogen公司。RT-PCR试剂盒购自Takara公司；引物购自上海生工生物工程服务技术有限公司；RT-PCR测定试剂盒购自日本TaKaRa公司。二、实验方法1、细胞培养Hela细胞常规培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基中，置于37℃5％CO2饱和湿度培养箱内，每2d换液1次，每3-4d传代1次，取对数生长期的细胞进行后续实验。2、细胞分组和给药培养实验分为对照组和给药组。将对数生长期的细胞接种在6孔板中，每孔约1×104个细胞，继续培养24h当细胞密度达到70％～80％时候，给药组加入5μM异叶马兜铃菲内酯B，对照组添加等体积溶媒DMSO，24h后，0.25％的胰蛋白酶消化收集细胞，PBS漂洗2遍，待测。3、RT-PCR法测定FoxM1mRNA表达水平按照说明书使用Trizol试剂提取细胞中的总RNA，紫外分光光度计上测定260nm和280nm处的A值，如A260/A280＞1.8，证明纯度较高。计算核酸浓度，并将提取的总RNA溶于DEPC水中。根据RT-PCR试剂盒说明书，对各组细胞中的FoxM1进行RT-PCR反应，以GAPDH为内参。RT反应条件如下：30℃10min，然后42℃30min，99℃5min，5℃5min。PCR反应条件如下：94℃2min，然后94℃30s，55℃30s，72℃1min，30个循环。RT-PCR产物在1.5％的琼脂糖凝胶上进行电泳并鉴定。使用图像分析软件进行分析。RT-PCR引物序列如下：FoxM1正向引物：5’-AGCGACAGGTTAAGGTTGAG-3’FoxM1反向引物：5’-GTGCTGTTGATGGCGAATTG-3’GAPDH正向引物：5’-ACGGATTTGGTCGTATTGGGCG-3’GAPDH反向引物：5’-CTCCTGGAAGATGGTGATGG-3’。4、Westernblot法测定FoxM1蛋白表达水平用细胞裂解液裂解细胞提取总蛋白，将提取的总蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳结束后，取下凝胶，将电泳产物电转移至PVDF膜上，以含5％脱脂奶粉的TBST液封闭2h。按说明书加入一抗，包括FoxM1(1:500)，4℃摇床孵育过夜。加入二抗，室温孵育1h。将PVDF膜置于增强化学发光试剂中反应2分钟，于暗室中利用X射线曝光，显影、定影。蛋白表达的灰度值利用QuantityOne软件进行分析。5、数据处理实验数据用x±s表示，采用SPSS17.0统计软件行OneWayANOVA方差分析，两两比较用Student’st检验，P<0.05为差异有统计学意义。三、实验结果与对照组相比，给药组细胞中FoxM1mRNA表达水平和FoxM1蛋白表达水平均显著下调(P<0.05)，结果如表1和图1所示。可见异叶马兜铃菲内酯B可以有效抑制人宫颈癌Hela细胞中FoxM1基因的表达。表1异叶马兜铃菲内酯B对肿瘤细胞中FoxM1基因表达的影响实施例2：异叶马兜铃菲内酯B对乳腺癌细胞中FoxM1基因表达的影响一、实验材料异叶马兜铃菲内酯B自制，纯度不低于95％。人乳腺癌MDA-MB-231细胞购自ATCC细胞库。DMEM培养液购自美国Invitrogen公司，胎牛血清购自Hyclone公司。BCA蛋白分析试剂盒购自美国Pierce公司。兔抗人的FoxM1多克隆抗体及内参GAPDH抗体均购于SantaCruz公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔二抗为上海申能博彩生物科技有限公司产品。TRIzol试剂购于美国Invitrogen公司。RT-PCR试剂盒购自Takara公司；引物购自上海生工生物工程服务技术有限公司；RT-PCR测定试剂盒购自日本TaKaRa公司。二、实验方法1、细胞培养MDA-MB-231细胞常规培养于含10％胎牛血清的DMEM培养液中，置于37℃5％CO2饱和湿度培养箱内，每2d换液1次，每3-4d传代1次，取对数生长期的细胞进行后续实验。2、细胞分组和给药培养实验分为对照组和给药组。将对数生长期的细胞接种在6孔板中，每孔约1×104个细胞，继续培养24h当细胞密度达到70％～80本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.异叶马兜铃菲内酯B用作FoxM1基因表达抑制剂的用途。

【技术特征摘要】
1.异叶马兜铃菲内酯B用作FoxM1基因表达抑制剂的用途。2.一种FoxM1基因表达抑制药物，其特征在于：活性成分为异叶马兜铃菲内酯B。3.异叶马兜铃菲内酯B用于治疗肿瘤的医药用途。4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：李世龙，
申请(专利权)人：李世龙，
类型：发明
国别省市：江苏,32