一种抗torch-IgM型抗体谱芯片及其制备方法与TORCH检测的试剂盒技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，公开了一种抗torch‑IgM型抗体谱芯片及其制备方法与TORCH检测的试剂盒及检测方法。本发明专利技术所述抗torch‑IgM型抗体谱芯片不仅能同时定量检测TORCH多种相关病原微生物的感染，而且通过优化芯片的包被液和包被条件、封闭稳定剂，使抗torch‑IgM型抗体谱芯片稳定性更好，使用周期更长。本发明专利技术所述TORCH检测的试剂盒，不仅能有效降低相关抗原的使用量，减少抗原成本，同时使其稳定期更长，使用周期更长，降低运输成本，提高储存、运输的方便性。本发明专利技术所述TORCH检测方法能同时定量检测TORCH多种相关病原微生物的感染，灵敏度高，特异性好。

Anti torch-IgM type antibody spectrum chip and preparation method and reagent kit for TORCH detection

The invention belongs to the field of biological detection technology, and discloses an anti-torch_IgM antibody spectrum chip, a preparation method, a kit for TORCH detection and a detection method thereof. The anti-torch_IgM antibody spectrum chip can not only quantitatively detect the infection of various pathogenic microorganisms related to TORCH at the same time, but also make the anti-torch_IgM antibody spectrum chip more stable and has longer service cycle by optimizing the coating liquid, coating conditions and sealing stabilizer of the chip. The TORCH detection kit can not only effectively reduce the use of related antigens, reduce the cost of antigens, but also make the stability longer, the use cycle longer, reduce the transportation cost, and improve the convenience of storage and transportation. The TORCH detection method can simultaneously quantitatively detect the infection of various pathogenic microorganisms related to TORCH, with high sensitivity and good specificity.

【技术实现步骤摘要】
一种抗torch-IgM型抗体谱芯片及其制备方法与TORCH检测的试剂盒
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种抗torch-IgM型抗体谱芯片及其制备方法与TORCH检测的试剂盒。
技术介绍
TORCH是导致先天性宫内感染及围产期感染而引起围产儿畸形的病原体，它是一组病原微生物的英文名称缩写，其中T(Toxoplasma)是弓形虫，O(Others)是其他病原微生物，如梅毒螺旋体、带状疱疹病毒、细小病毒B19、柯萨奇病毒等，R(Rubella.Virus)是风疹病毒，C(Cytomegalo.Virus)是巨细胞病毒，H(Herpes.Virus)即是单纯疱疹I/II型。TORCH感染是严重危害新生儿健康的重要因素之一，在围生医学中称为TORCH综合征，其感染呈世界性分布。我国人群中，TORCH感染广泛存在，孕妇在妊娠期间发生TORCH感染后无明显临床症状，但胎儿感染后，可能引起胎儿或新生儿的肝、肾、心、脑等多个器官出现发育缺陷和功能障碍，有可能引起胚胎/胎儿流产、早产、宫内发育迟缓、畸形、死胎和新生儿死亡等不良后果，对优生优育与人口素质构成极大的威胁。因此，为减少病残儿的出生率及提高出生人口素质，应极做好TORCH感染的血清学筛查以便及早发现不良妊娠并及时处理。对新生儿也应常规开展TORCH检测，了解新生儿TORCH感染情况，以便早干预、早治疗。TORCH的检测中弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹I/II型四种病原微生物的感染约占90％，其余的10％为其他病原微生物，包括细小病毒B19、柯萨奇病毒、梅毒螺旋体、乙肝病毒、衣原体等感染。目前对TORCH的检测方法主要有ELISA、免疫荧光试验(IFT)、胶体金以及基因芯片等。在我国最方便、最常用的早期筛查方法是采用ELISA诊断技术。ELISA是检测人体血清中的特异性IgM、IgM抗体，由于IgM为早期感染指标，对胎儿影响巨大，所以IgM的检测备受关注，胎盘中特异性IgM的检测是诊断胎儿宫内感染的可靠依据。ELISA试剂因其稳定、灵敏度高、特异性强、成本低等优点而在普通实验室中广泛采用，但一般用来做定性，不能定量。而IFT一般只针对单项指标的检测，胶体金的方法一般也只是定性或者半定量，基因芯片技术虽然效果好，但成本高，一般价格昂贵。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术针对现有技术中的缺陷，提供了一种抗torch-IgM型抗体谱芯片及其制备方法与TORCH检测的试剂盒。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案。一种抗torch-IgM型抗体谱芯片，包被有TORCH检测相关的病原微生物的抗原的蛋白芯片。本专利技术采用蛋白质芯片技术，将TORCH的多种病原体集成在蛋白芯片上制备了高通量、多检测指标、性能稳定、重复性好、准确度高的TORCH相关抗体IgM芯片。其中，作为优选，所述TORCH检测相关的病原微生物为弓形虫(TOX)、巨细胞病毒(CMV)、风疹病毒(RV)、单纯疱疹病毒(HSV)、人类微小病毒B19、柯萨奇病毒，梅毒螺旋体、乙肝病毒(HBV)、衣原体中至少一种。在一些实施方案中，所述TORCH检测相关的病原微生物为弓形虫(TOX)、巨细胞病毒(CMV)、风疹病毒(RV)、单纯疱疹病毒(HSV)、人类微小病毒B19、柯萨奇病毒，梅毒螺旋体、乙肝病毒(HBV)和衣原体，TORCH相关的病原微生物共9种。其中单纯疱疹病毒(HSV)包括单纯疱疹病毒-I型、单纯疱疹病毒-II型。本专利技术所述抗torch-IgM型抗体谱芯片，所述蛋白芯片还包含质控点和/或参考点。其中，所述质控点包含至少一个阳性质控点(PC)、至少一个阴性质控点(NC)、至少一个样品质控点(SC)和/或至少一个酶标质控点(EC)。所述参考点包含不同浓度的参考曲线点(S1-S5)和/或至少一个芯片位置参考点(Loc)。在一些实施方案中，本专利技术所述芯片包含一个阳性质控点(PC)、一个阴性质控点(NC)、一个样品质控点(SC)、一个酶标质控点(EC)、5个参考曲线点(S1-S5)和一个芯片位置参考点(Loc)。在本专利技术的一些实施例中，所述阳性质控点可以是人IgM，使用的酶联免疫标记物是抗人IgM的酶标。在其他的一些实施例中，所述阳性质控点也可以包被BSA-DNP偶联物，使用的酶联免疫标记物就是酶标记抗人IgM以及抗DNP-BSA的酶标记抗体的混合液。在本专利技术的一些实施例中，所述阴性质控点可以是低于反应信号值的微量浓度的人IgM。在其他的一些实施例中也可用其他的无关蛋白来替代。在本专利技术的一些实施例中，样品质控点可以是鼠抗人的IgM。在其他的一些实施例中也可使用其他的抗人IgM。在本专利技术的一些实施例中，所述酶标质控点可以是人IgM。在其他的一些实施例中也可使用其他的抗兔的抗体(酶标用的是兔抗人IgM)，例如羊抗兔IgM抗体。本专利技术的一些实施例中，所述参考曲线点是五种不同浓度的人IgM。如0.5μg/ml、1μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml的人IgG。本专利技术中，所述芯片本身的位置参考点包被的是2μg/ml的人IgM溶液，主要就是对阵列取值时的定位作用。本专利技术还提供了所述抗torch-IgM型抗体谱芯片的制备方法，用包被缓冲液稀释TORCH检测相关的病原微生物的抗原、质控点蛋白和/或参考点蛋白，通过点样仪以点阵列形式包被于芯片基质上。本专利技术通过高度精密的点样仪将TORCH检测相关的10种病原微生物的抗原以及所需要的质控点蛋白、参考点蛋白以4×5的点阵列形式包被于芯片基质上其中，所述包被缓冲液为含PEG、水溶性环糊精、海藻糖、防腐剂和甘油的缓冲液。在一些实施例中，所述缓存液为pH9.6的CB缓冲液、pH8.5的Tris缓冲液或pH7.4-7.6的PBS缓冲液。本专利技术所述包被缓冲液中含有PEG。在一些实施方案中，所述PEG为PEG4000。所述PEG的含量优选为0.5％～1％，更优选为0.5％。本专利技术所述包被缓冲液中含有水溶性环糊精，使得包被更稳定、均一、包被的点更规则、更圆，CV更小。作为优选，所述水溶性环糊精为0.01％～0.02％Captisol、0.02％-0.04％的2-羟基-β-环糊精或羧甲基-β-环糊精；本专利技术所述包被缓冲液中含有海藻糖。作为优选，所述海藻糖的含量为5％～8％；本专利技术所述包被缓冲液中含有防腐剂。在一些实施方案中，所述防腐剂为Proclin300。作为优选，所述防腐剂的含量为0.05％。本专利技术所述包被缓冲液中含有甘油。作为优选，所述甘油的含量为15％。作为优选，本专利技术所述芯片的制备方法中所述包被为2-8℃，静置包被16-24h。本专利技术所述芯片基质包括但不限于为酶标反应板、玻璃片、化学膜、多孔硅胶。其它适合蛋白质附着的载体也可以作为芯片基质。进一步的，本专利技术所述芯片的制备方法还包括用封闭稳定剂封闭的步骤。作为优选，所述封闭稳定剂为含1％-4％甘露醇，2％-5％的PVP40000、1％-3％NH2-PEG、0.05％NaN3的pH7.4的0.01M磷酸氢二钠溶液。在一些实施例中，所述封闭稳定剂为1％甘露醇，2％的PVP40000、1％NH2-PEG、0.05％NaN3的pH7.4的0.01M磷酸氢二钠溶液。所述封闭优选为室温封闭1h。本专利技术还提供了一种T本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗torch‑IgM型抗体谱芯片，包被有TORCH检测相关的病原微生物的抗原的蛋白芯片。

【技术特征摘要】
1.一种抗torch-IgM型抗体谱芯片，包被有TORCH检测相关的病原微生物的抗原的蛋白芯片。2.根据权利要求1所述的芯片，所述TORCH检测相关的病原微生物为弓形虫(TOX)、巨细胞病毒(CMV)、风疹病毒(RV)、单纯疱疹病毒(HSV)、人类微小病毒B19、柯萨奇病毒，梅毒螺旋体、乙肝病毒(HBV)、衣原体中至少一种。3.根据权利要求1或2所述的芯片，所述蛋白芯片还包含质控点和/或参考点；所述质控点包含至少一个阳性质控点(PC)、至少一个阴性质控点(NC)、至少一个样品质控点(SC)和/或至少一个酶标质控点(EC)；所述参考点包含不同浓度的参考曲线点(S1-S5)和/或至少一个芯片位置参考点(Loc)。4.根据权利要求3所述的芯片，所述阳性质控点包被人IgM或包被BSA-DNP偶联物；所述阴性质控点包被低于反应信号值的微量浓度的人IgM或其他的与TORCH检测病原微生物无关的蛋白；所述样品质控点为包被抗人IgM；所述酶标质控点包被人IgM或抗兔的抗体；所述参考曲线点包被不同浓度的人IgM；所述芯片位置参考点包被已知浓度的人IgM溶液。5.权利要求1-4任意一项所述的芯片的制备方法，用包被缓冲液稀释TORCH检测相关的病原微生物的抗原、质控点蛋白和/或参考点蛋白，通过点样仪以点阵列形式包被于芯片基质上。6.根据权利要求5所述的制备方法，所述包被缓冲液为含PEG、水溶性环糊精、海藻糖、防腐剂和甘油的缓冲液；所述包被为2-8℃，静置包被16-24h；所述芯片基质为酶标反应板、玻璃片、化学膜、多孔硅胶。7.根据权利要求6所述的制备方法，所述缓存液为pH9.6的CB缓冲液、pH8.5的Tris缓冲液或pH7.4-7.6的PBS缓冲液；所述PEG为PEG4000；所述PEG的含量为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：张大准，肖川，张永顶，马伟民，王洪涛，马新民，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44