端粒酶易位的肽抑制剂及其治疗用途制造技术

本公开提供了用于治疗或预防正接受化疗剂的对象中心脏或血管毒性的组合物和方法，其中该心脏或血管毒性与给予该化疗剂相关。还提供了用于治疗或预防内皮功能障碍或用于调节内皮功能和氧化应激的组合物和方法。

Telomerase translocation peptide inhibitors and their therapeutic use

The present disclosure provides a composition and method for the treatment or prevention of an object center or vascular toxicity of a chemotherapeutic agent, in which the cardiac or vascular toxicity is associated with the administration of the chemotherapeutic agent. Compositions and methods for treatment or prevention of endothelial dysfunction or for regulating endothelial function and oxidative stress are also provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】端粒酶易位的肽抑制剂及其治疗用途相关申请的交叉引用本申请要求2015年8月28日提交的美国临时专利申请序列号62/211,524的优先权和权益，该申请通过引用全部纳入本文用于所有目的。关于联邦资助研究的声明无。
技术介绍
端粒酶的过度表达与心脏和血管保护有关；然而，鉴于端粒酶在细胞永生化和增殖中的作用，在某些细胞类型中端粒酶的再活化也可能是致癌转化中的重要事件。端粒酶再活化在预防和改善心脏和血管疾病中的有益作用的基础机制至今尚不清楚。因此，希望开发克服了标准方案的缺陷的组合物和治疗和预防方法，并提供了血管疾病的新治疗范例，同时缓解化疗癌症治疗的不良或脱靶副作用。需要用于实现上述目标的组合物和方法。
技术实现思路
本专利技术通过提供如本文所述的组合物和方法克服了上述缺点。在第一方面，本文提供了分离的肽，其包含与SEQIDNO：6所示序列(RRRGGX1ASRSLPLPKRPRR)至少80％同源的氨基酸序列，其中X1是选自以下的仿磷酸化(phosphomimetic)残基：天冬氨酸和谷氨酸，所述分离的肽能够防止TERT核易位，其中所述分离的肽少于20个氨基酸。分离的肽可以具有如SEQIDNO：2所示的序列。肽可以是血脑屏障(BBB)-透过性的。另一方面，本文提供了分离的多核苷酸，其包含编码包含本文所提供的分离的肽的肽的核酸序列。在另一方面，本文提供了包含相对于SEQIDNO：1的位置6处的丝氨酸残基的不可磷酸化取代(non-phosphorylatablesubstitution)的分离的肽，其中所述分离的肽少于20个氨基酸，包含与SEQIDNO：1所示序列至少80％同源的氨基酸序列，并且能够阻止TERT核易位。分离的肽可以具有如SEQIDNO：3所示的序列。该肽可以是BBB透过性的。本文还提供了分离的多核苷酸，其包含编码包含相对于SEQIDNO：1的位置6处的丝氨酸残基的不可磷酸化取代的肽的核酸序列。在另一方面，本文提供了一种防止人细胞中端粒酶核易位的方法，所述方法包括使所述人细胞与TERT核易位抑制剂接触。TERT核易位抑制剂可以是肽。抑制剂可以是包含选自SEQIDNO：2，SEQIDNO：3和SEQIDNO：4的序列的肽。抑制剂可以是具有选自SEQIDNO：2，SEQIDNO：3和SEQIDNO：4的序列的肽。给药可以是肠胃外给药。另一方面，本文提供了减少对象的不良心脏作用的方法，所述方法包括向对象给予治疗有效量的TERT核易位抑制剂，其中给予所述合成肽减少对象中不良心脏作用的出现。不良心脏作用可以是与向对象给予化疗剂相关的心脏毒性。对象将接受或正在接受化疗剂。TERT核易位抑制剂可以是肽。肽可以具有选自SEQIDNO：2，SEQIDNO：3和SEQIDNO：4的序列。给药可以是肠胃外给药。在一些情况下，本文还提供拮抗血管紧张素II(ANGII)的不良心脏作用的方法，血管紧张素II引起显著的心脏和血管损伤并且与高血压和许多其他CV疾病状态相关。另一方面，本文提供治疗对象的过度增殖性疾病的方法，所述方法包括向所述对象给予治疗有效量的分离的肽到所述对象中，其中所述分离的肽少于20个氨基酸并且包含与SEQIDNO：6所示序列(RRRGGX1ASRSLPLPKRPRR)至少80％同源的氨基酸序列；其中X1是相对于SEQIDNO：1中的相应位置选自天冬氨酸和谷氨酸的仿磷酸化残基，所述分离的肽能够阻止TERT核易位，由此治疗过度增殖性疾病。过度增殖性疾病可以是癌症。肽可以包含如SEQIDNO：3所示的氨基酸序列。该肽可以被聚乙二醇化(PEG化)。该聚乙二醇化肽可包含SEQIDNO：4所示序列。本文还提供了减少氧化应激的方法，所述方法包括向对象给予有效量的TERT核易位抑制剂。TERT核易位抑制剂可以是肽。肽可以包含选自SEQIDNO：2，SEQIDNO：3和SEQIDNO：4的序列。在另一方面，本文提供了一种防止人细胞中端粒酶(TERT)的线粒体易位的方法，所述方法包括使所述人细胞与TERT线粒体易位抑制剂接触。抑制剂可以是包含SEQIDNO：5的肽。通过以下描述可以清楚地了解本专利技术的上述和其他方面和优势。在以下说明书中，参照构成说明书的一部分的附图，其中以说明性方式显示了本专利技术的优选实施方式。这类实施方式不必然代表本专利技术的全部范围，而是因此对权利要求进行说明并在本文中解释本专利技术的范围。附图简要说明图1A-1B显示，在正常条件下，端粒酶在NLS处被激酶(包括Akt)磷酸化，导致核输入。(A)端粒酶主要定位于细胞核。(B)nucXTERT作为诱饵肽，与端粒酶竞争参与磷酸化NLS的激酶。这导致细胞质和线粒体中端粒酶的核输入和端粒酶积聚的减少。图2A-2B。(A)显示解剖的人微血管。顶图是明场图像，而底部三个图是激光激发下相同血管的图像，带有滤波器以观察5-FAM的发射。用10μM浓度的5-FAM标记的肽(nucXTERT-W)处理血管8小时(h)，或不处理(对照)。(B)将H1299非小细胞肺癌细胞接种在载玻片上并用0，50或100μM5-FAM标记的nucXTERT-W处理8小时。DAPI＝蓝色；5-FAM标记的肽＝绿色。图3A-3B。(A)使用指定剂量的nucXTERT-W过夜处理后使用分级分离为核和胞质隔室的H1299细胞进行的Western印迹。GAPDH作为细胞质加载对照，而组蛋白H3用作核加载对照。(B)A中呈现的Western印迹的光密度量化表示为分别归一化至核和细胞质加载对照后的核：细胞质信号比。图4A-4B证明nucXTERT肽保护人血管免受应激物影响。(A)从健康供体的脂肪中解剖得到活的人微血管并用BIBR1532(端粒酶抑制剂)，mitoXTERT或nucXTERT(和nucXTERT+BIBR1532)处理过夜。然后对血管进行考验，用乙酰胆碱(ACh)扩张刺激，用或不用ANGII应激物。(B)将如A中制备的人微血管用BIBR1532，mitoXTERT或nucXTERT(和nucXTERT+BIBR1532)处理过夜。然后对血管进行考验，采用压力梯度扩张刺激，有或没有ANGII。图5A-5C。(A)nucXTERT-A(序列详述于C)用于过夜处理人微血管。然后将流和ACh用作扩张刺激，有或没有ANGII。(B)nucXTERT-E(序列详述于C)用于过夜处理人微血管。然后将流和ACh用作扩张刺激，有或没有ANGII。(C)表格详述了各种测试的nucXTERT变体的序列和有效性。图6证明nucXTERT肽恢复冠状动脉疾病人微血管的功能。从患有临床确诊的冠状动脉疾病(CAD)的个体的脂肪中解剖得到活的人微血管。在载剂或L-NAME或PEG-过氧化氢酶存在下用nucXTERT处理血管。评估对压力梯度(流)刺激的响应。用或不用NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)或PEG-过氧化氢酶，用载剂或mitoXTERT处理来自健康人供者的脂肪的微血管。评估血管响应压力梯度(流)扩张的能力。图7A-7C显示了分离血管研究中PEG化nucXTERT-E的剂量滴定。具有S-＞E取代的nucXTERT在C-末端聚乙二醇化以增加生物稳定性和细胞渗透性。测试了从10μM到1nM的有效剂量。聚乙二醇化肽可以滴定低至1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的肽，其包含与SEQ ID NO：6(RRRGGX1ASRSLPLPKRPRR)所示的序列至少80％同源的氨基酸序列；其中X1是选自以下的仿磷酸化残基：天冬氨酸和谷氨酸，所述分离的肽能够防止TERT核易位，其中所述分离的肽少于20个氨基酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.28 US 62/211,5241.一种分离的肽，其包含与SEQIDNO：6(RRRGGX1ASRSLPLPKRPRR)所示的序列至少80％同源的氨基酸序列；其中X1是选自以下的仿磷酸化残基：天冬氨酸和谷氨酸，所述分离的肽能够防止TERT核易位，其中所述分离的肽少于20个氨基酸。2.如权利要求1所述的分离的肽，其如SEQIDNO：2所示。3.如权利要求1所述的分离的肽，其中所述肽是血脑屏障(BBB)-透过性的。4.一种分离的多核苷酸，其包含编码包含权利要求1所述的分离的肽的肽的核酸序列。5.一种包含相对于SEQIDNO：1的位置6处的丝氨酸残基的不可磷酸化取代的分离的肽，其中所述分离的肽少于20个氨基酸，包含与SEQIDNO：1所示序列至少80％同源的氨基酸序列，并且能够阻止TERT核易位。6.如权利要求5所述的分离的肽，其如SEQIDNO：3所示。7.如权利要求3所述的分离的肽，其中所述肽是BBB-透过性的。8.一种分离的多核苷酸，其包含编码包含权利要求5所述的分离的肽的肽的核酸序列。9.一种防止人细胞中端粒酶核易位的方法，所述方法包括使所述人细胞与TERT核易位抑制剂接触。10.如权利要求9所述的方法，其中所述TERT核易位抑制剂是肽。11.如权利要求9所述的方法，其中所述抑制剂是包含选自SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、和SEQIDNO：4的序列的肽。12.如权利要求9所述的方法，其中所述抑制剂是具有选自SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、和SEQIDNO：4的序列的肽。13.如权利要求9所述的方法，其中给药是胃肠外给药。14.一种减少对象的不良心脏作用的方法，所述方法包括向对象给予治疗有效量的TERT核易位抑制剂，其中给予合成肽减少...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·D·艾本，A·M·拜尔，
申请(专利权)人：威斯康星州医药大学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US