一种海洋来源高温脂肪酶及其晶体和制备方法技术

本发明专利技术属于酶工程技术领域，公开了一种海洋来源高温脂肪酶及其晶体和制备方法。海洋来源高温脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述海洋来源高温脂肪酶的制备方法，将海洋来源高温脂肪酶的序列克隆至pET22b(+)原核表达载体并将该载体转化至大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3)表达，通过亲和层析和排阻凝胶层析纯化，得到海洋来源高温脂肪酶水溶液。本发明专利技术脂肪酶具有很好的高温和有机溶剂耐受性，其酯化和水解脂质的效率高，甚至比商品化脂肪酶435(诺维信)酯化合成三甘酯的效果更好。

Marine source high temperature lipase and crystal and preparation method thereof

The invention belongs to the field of enzyme engineering technology, and discloses a marine source high-temperature lipase, a crystal and a preparation method thereof. The amino acid sequence of high temperature lipase from marine sources is shown in SEQ ID NO:1. The preparation method of high temperature lipase from marine source was used to clone the high temperature lipase from marine source to pET22b (+) prokaryotic expression vector and convert the vector to the expression of Rosetta (DE3) in Escherichia coli, and the high temperature lipase solution of marine source was obtained by affinity chromatography and exclusion gel chromatography. The lipase has good high temperature and organic solvent tolerance, the efficiency of esterification and lipid hydrolysis is high, even better than commercialized lipase 435 (noble letter) esterification of three glyceride.

【技术实现步骤摘要】
一种海洋来源高温脂肪酶及其晶体和制备方法
本专利技术涉及两种海洋来源高温脂肪酶SL1晶体及制备方法，属于酶工程

技术介绍
脂肪酶是一种广泛存在于自然界并具有重要工业应用价值的α/β水解酶类，可用于催化酯解(水解、醇解和酸解)、酯合成、酯交换等反应，被广泛应用于油脂加工、食品、造纸、洗涤剂、指示剂、生物柴油、精细化工、皮革加工等工业领域。目前，美国国立生物信息中心(NCBI)中报道的脂肪酶已超过6000条，而RCSB蛋白质数据库(PDB)已经收录了近700个脂肪酶的三维结构，而这些数字还在急速增长。虽然脂肪酶的催化机制早已被解析。但是，各种类的脂肪酶之间还是表现出了不一样的生化和催化特性，如最适反应环境，温度和溶剂耐受性，底物选择性，反应动力学特征，界面效应等的不同。这主要是因为各脂肪酶之间存在或多或少的序列差异性和结构差异性。虽然，现在人类对脂肪酶资源的挖掘已经有了一定的积累，但仍然不能完全满足生产实践上的需求。因此，对已有的脂肪酶进行改造来满足生产要求就显得很有必要了。而空间结构能为脂肪酶的改造提供了大量的结构信息，更好的指导脂肪酶的定向改造。海洋来源高温脂肪酶SL1具有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种海洋来源高温脂肪酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种海洋来源高温脂肪酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。2.权利要求1所述海洋来源高温脂肪酶的制备方法，其特征在于，将海洋来源高温脂肪酶的序列克隆至pET22b(+)原核表达载体并将该载体转化至大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3)表达，通过亲和层析和排阻凝胶层析纯化，得到海洋来源高温脂肪酶水溶液。3.海洋来源高温脂肪酶晶体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)结晶缓冲液的配制：结晶缓冲液的组成为(A)0.2±0.05M醋酸锌，0.1±0.02M咪唑，10±0.5％PEG8000，pH6.0±0.5或(B)1.0±0.1M磷酸二氢钠-磷酸氢二钠，pH5.5±0.5；(2)将权利要求2制备的海洋来源高温脂肪酶水溶液按体积比1：1与步骤1)所配制的结晶缓冲混合，在15-25℃室内放置，培养5～7天得到海洋来源高温脂肪酶的晶体。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述结晶缓冲液的组成为：(A)0.21M醋酸锌，0.1M咪唑，10％PEG8000，pH6.0或(B)1.05M磷酸二氢钠-磷酸氢二钠，pH5.0。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永华，袁红，蓝东明，赵泽鑫，杨博，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44