一株副干酪乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株副干酪乳杆菌及其应用。本发明专利技术提供了一株在大理白族自治州地区泡梨中分离到的副干酪乳杆LSE‑2014ZA001‑M012‑A‑03(a)，它的保藏编号为CGMCC No.14751。本发明专利技术的具有下述有益效果：菌株具有很强的耐酸性、耐胆盐性能和较强的降解胆固醇的能力。菌株在4℃贮藏条件下能够维持很好的活力，用其制备的褐色益生菌饮料4℃贮藏24天，离心沉淀率最大不超过1.5%，且体系无分层、絮凝的现象。本发明专利技术菌株具有较高的木聚糖酶活性，适合做发酵果蔬汁或植物性发酵酸奶等。

【技术实现步骤摘要】
一株副干酪乳杆菌及其应用
本专利技术属于微生物
，尤其涉及一株副干酪乳杆菌及其应用。
技术介绍
益生菌是指当人体摄入足够数量的、某种特定活的微生物时，能够促进机体的健康，对胃肠液有耐受性、且在胆汁的作用下可以生长。副干酪/干酪乳杆菌是目前研究最为深入、应用最为广泛的益生菌之一，与嗜酸乳杆菌、双歧杆菌一同被认为是目前最为经典的三种益生菌。与其他两种益生菌相比，副干酪/干酪乳杆菌具有较强的加工性能，并且在调节人体免疫系统，及调节人体肠道环境、降解胆固醇等方面具有突出的功能。胆固醇是人体维持正常机能必须的物质，但摄入过多会积聚在血管壁上，导致血管硬化和变窄，如果胆固醇在血管壁上积得太多，阻塞了血管，人体器官便会因为无法从血液中吸取足够的氧气和养料而坏死。由于人类生活方式及饮食结构的改变，胆固醇过高引起的健康问题，已经成为威胁人类健康的普遍问题，所以筛选出降解胆盐效果显著的益生菌并将其应用到食品加工领域，对于人类健康具有重要的意义。木聚糖主要存在于植物细胞壁，在自然界中是除纤维素以外第二丰富的可再生资源，植物细胞壁中含有大量的木聚糖和纤维素，在果蔬汁加工的过程中细胞壁中的果胶、纤维素、木聚糖等形成的网状结构可以阻止细胞内容物的渗出。传统加工工艺难以分解上述物质并造成营养的大量流失。本专利技术通过耐酸、耐胆盐试验筛选出的副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)具有较强的耐酸、耐胆盐性能并具有较强的降胆固醇能力，而且还具有较高的木聚糖酶活性，能将菌株应用于益生菌饮料和发酵果蔬汁及果蔬酸奶等生产中。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的是提供一株副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)，其要解决的技术问题是该菌株具有很强的耐酸性能、耐胆盐性能，同时能降解胆固醇和木聚糖，本专利技术菌株在贮藏期间能保持较高的活菌数和更高的益生功能，适合做益生菌饮料的发酵剂及植物性发酵酸奶。本专利技术的第二个目的是提供一株副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)在制备活性乳酸菌饮料中应用。本专利技术的第三个目的是基于一株副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)的木聚糖酶活性，提供一种其在制备辣木酸奶中的应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用下述技术方案：一株副干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei）LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)，它的保藏编号为CGMCCNo.14751，保藏日期为2017年09月26日。与现有技术相比，本专利技术的有益效果有：1、本专利技术副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)具有很强的耐酸性，进入人体后能够对胃酸具有较强的抵抗能力，其在pH1.5中作用3h后活菌数仍能达到104CFU/mL，比同种属的商业菌种高一个数量级。2、本专利技术副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)具有很强耐胆盐性能，0.03g/100mL胆盐中作用3h菌株的存活率为100%，活菌数达到109CFU/mL；0.15g/100mL胆盐中作用3h活菌数达到107CFU/mL数量级；0.3g/100mL胆盐中作用3h菌株的活菌数达到104CFU/m数量级。3、本专利技术副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)具有胆盐水解酶活性。4、本专利技术副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)具有较强的降解胆固的能力，发酵24h能够降解39%的胆固醇、发酵48h能够降解44.2%的胆固醇、发酵72h可以降解49.6%的胆固醇。采用统一检测方法比很多文献报道的菌株的降胆固醇能力强。5、本专利技术副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)有较高的木聚糖酶活性，适合做发酵果蔬汁或植物性发酵酸奶等。本专利技术保藏说明：分类命名：副干酪乳杆菌；拉丁名：Lactobacillusparacasei；参椐的生物材料：LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)；保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏机构简称：CGMCC；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。保藏日期：2017年9月26日保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.14751。附图说明图1为本专利技术所述副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)的菌落照片。图2为本专利技术所述副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)的镜检照片。图3为本专利技术所述副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)胆盐水解酶的定性测定结果。图4为本专利技术在胆固醇降解能力测定中绘制的胆固醇标准曲线。图5为本专利技术在发酵液木聚糖酶活力测定中绘制的木聚糖标准曲线。图6为本专利技术所述副干酪乳杆菌LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)在蛋白含量为3.5%的脱脂乳中的产酸曲线。具体实施方式下面结合实施例，进一步阐述本专利技术，但不限于实施例。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1：菌种的分离纯化鉴定1.菌种的分离纯化称取采集到的水牛奶样品10g，用生理盐水进行梯度稀释最高稀释度为8，采用采用加了碳酸钙的MRS固体培养基进行分离，取5、6、7、8四个梯度的稀释样品进倒板（37℃,48h）。初步根据菌落形态、大小、溶钙圈大小、颜色、培养基中生长位置（表面、内部、及底部）挑取不同表观特征且溶钙圈较大的菌落平板划线培养，进行纯化。再用同样的方法反复划线纯化数次，使最终平板上为同一形态菌落为止。挑取单菌落接菌于MRS液体培养基中37℃培养18h，以备保藏和鉴定使用。2.菌种的鉴定2.1菌种的形态学特见图1的菌落照片，MRS固体培养基上的菌落为乳白色中等大小。见图2镜检照片，显微镜下为短杆成链。2.1菌种的分子生物学鉴定将初步获得革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性的菌株暂定为乳酸菌，然后根据UNI-Q柱式细菌DNA抽提试剂盒的实验步骤提取细菌基因组，用0.8%的琼脂糖凝胶电泳观察提取到的基因组。以提取到的菌株的基因组为模板，以采用细菌通用引物：27F(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3')和1541R(5'-TAAGGAGGTGATCCAGCC-3')为上、下游引物，采用PCR扩增试剂盒，以50µL的反应体系进行PCR反应。反应参数为：95℃预变性5min，35个循环的参数设置为94℃30s，55℃30s，72℃90s，72℃延伸10min。用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测扩增DNA片段的大小，测序由上海生物工程技术服务有限公司完成。将经过测序所得到的序列用Blast软件在Genebank中搜索相似序列，经ClustalX序列比对后，采用MEGA4.0中的邻接法（Neighbour-joining）进行系统发育树构建，分析样品中乳酸菌的遗传距离。据设计的引物进行16SrDNA扩增，电泳显示在1500bp左右有阳性条带，与目的片段大小一致，将PCR产物送至测序公司进行测序。16SrDNA全长1422bp，全长序列如SEQIDNO.1所示。测序结果通本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracaseii）LSE‑2014ZA001‑M012‑A‑03(a)，其特征在于：它的保藏编号为CGMCC No.14751。

【技术特征摘要】
1.一株副干酪乳杆菌（Lactobacillusparacaseii）LSE-2014ZA001-M012-A-03(a)，其特征在于：它的保藏编号为CGMCCNo.14751。2.根据权利要求1所述的一株...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨子燕，赵世伟，杨子彪，李琼莹，段玉霞，尹柯如，张丽波，
申请(专利权)人：云南皇氏来思尔乳业有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53