用于治疗肿瘤的纳米粒制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗肿瘤的纳米粒制剂及其制备方法，所述制剂包括多糖接枝叶酸共聚物纳米粒和带正电的抗肿瘤药物，所述带正电的抗肿瘤药物与多糖接枝叶酸共聚物纳米粒重量比为1～5:100。该方法调节多糖接枝叶酸共聚物纳米粒溶液的pH至8～12；在冰浴条件下超声破碎，同时加入脱去盐酸的抗肿瘤药物的二甲亚砜溶液，在冰浴条件下超声破碎5～15min，调节pH至7.2～7.4；得到包载抗肿瘤药物的多糖接枝叶酸共聚物纳米粒溶液；超滤即得到纳米粒子制剂。本发明专利技术制备工艺更加简单，流程更短。抗肿瘤药物的载药量为5～15％。动态光散射的结果表明纳米粒子的水和半径在30～200nm之间并能够长期稳定。

Nanoparticle preparation for treating tumor and preparation method thereof

The invention discloses a nanoparticle preparation for the treatment of tumors and a preparation method. The preparation includes a polysaccharide graft folic acid copolymer nanore and a positive anticancer drug. The weight ratio of the positive electric antitumor drug to the polysaccharide graft folic acid copolymer nanoparticles is 1 to 5:100. The method regulates the pH to 8~12 of the polysaccharide grafted folic acid copolymer nanoparticles. Under the ice bath, it is broken by ultrasonic and added to the two methyl sulfoxide solution of the antitumor drug which is removed from hydrochloric acid. Under the ice bath, the ultrasonic fragmentation is 5 ~ 15min, and the pH to 7.2 ~ 7.4 is adjusted. The polysaccharide graft folic acid copolymer containing the antitumor drugs is obtained. Nanoparticles were prepared by ultrafiltration. The preparation process is simpler and the process is shorter. The drug loading of antitumor drugs was 5 ~ 15%. The results of dynamic light scattering showed that the water and radius of the nanoparticles ranged from 30 to 200nm and could be stable for a long time.

【技术实现步骤摘要】
用于治疗肿瘤的纳米粒制剂及其制备方法
本专利技术属于生物靶向功能高分子缓释材料领域，具体地指一种用于治疗肿瘤的纳米粒制剂及其制备方法。
技术介绍
在癌症化疗中面临的一个主要问题是化疗药物缺乏对肿瘤细胞的靶向性，这样药物不但到达肿瘤组织的含量有限，还会对正常的细胞或者组织造成损害。这些问题严重限制了化疗药物在临床上的应用。随着纳米技术的发展，利用纳米载药系统包载化疗药物靶向输送化疗药物至肿瘤部位成了现在提高化疗药物药效，减小毒性的重要手段。为了提高纳米载药系统的靶向性，主动靶向分子例如叶酸，半乳糖胺，RGD肽通常被修饰在纳米粒子的表面。叶酸由于免疫原性低，分子量小，易于修饰，与叶酸受体的结合能力强等优点，被广泛地修饰在纳米粒子的表面。通过与肿瘤表面过度表达的叶酸受体结合，识别和调节的内吞作用，可以降低纳米药物对正常组织的伤害，提高药物的抗肿瘤效果。目前叶酸共聚物被广泛的应用于组装纳米粒，包载抗肿瘤药物。叶酸共聚物具有良好的主动靶向叶酸受体高表达细胞的优势，通过叶酸共聚物组装的纳米粒具有易于靶向至叶酸受体高表达的肿瘤细胞例如乳腺癌细胞、膀胱癌细胞、宫颈癌细胞等。然而，目前的叶酸共聚物组装过程大多较为繁琐。专利CN102973512A公开了一种负载阿霉素并具有叶酸靶向功能的白蛋白纳米粒子制剂的制备办法。该专利技术通过Maillard反应，将葡聚糖-叶酸和葡聚糖同时接到白蛋白上，得到白蛋白-葡聚糖-叶酸复合物；然后在酸性条件下混合阿霉素和白蛋白-葡聚糖-叶酸共价复合物的水溶液，调整溶液的pH值以后加热制备得到稳定的具有叶酸受体靶向功能的阿霉素/白蛋白-葡聚糖-叶酸纳米粒子。然而，这种制备方法流程较为繁琐，需要通过两步反应才能得到白蛋白-叶酸复合物，进一步加热后才能得到葡聚糖-叶酸的白蛋白纳米粒。专利CN103638528公开了一种叶酸-海藻酸钠-植物甾醇的纳米粒，纳米粒将抗肿瘤药物阿霉素包载在其疏水和核内，具备安全性、有效性和靶向性的特点。然而，该专利技术中需要先合成得到海藻酸钠-植物甾醇共聚物，组装该共聚物得到海藻酸钠-植物甾醇纳米粒，在纳米粒上继续偶联叶酸才能得到叶酸-海藻酸钠-植物甾醇纳米粒。纳米粒经过透析法得到包载阿霉素的叶酸-海藻酸钠-植物甾醇纳米粒。该专利技术中采用的植物甾醇成本较高，需要通过两步合成得叶酸-海藻酸钠-植物甾醇，流程较为繁琐，需要通过透析得到包载阿霉素的纳米粒，制备工艺较为冗长，增加了生存成本。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术缺陷，提供了一种用于治疗肿瘤的纳米粒制剂及其制备方法，该纳米粒制剂具有良好的负载效果同时，该制备方法解决了现有的叶酸共聚物制备流程复杂，组装工艺冗长问题。该纳米制剂相对于阿霉素，降低了阿霉素的体内毒性，提高了阿霉素的治疗效果。为实现上述目的，本专利技术提供的一种用于治疗肿瘤的纳米粒制剂，所述制剂包括多糖接枝叶酸共聚物纳米粒和带正电的抗肿瘤药物，所述多糖接枝叶酸共聚物纳米粒包载有带正电的抗肿瘤药物，所述带正电的抗肿瘤药物与多糖接枝叶酸共聚物纳米粒重量比为1～5:100。进一步地，所述多糖接枝叶酸共聚物纳米粒的粒径小于或者等于150nm；所述带正电的抗肿瘤药物为阿霉素。其以多糖接枝叶酸共聚物为载体，通过静电吸附的方式负载阿霉素，通过pH调节的方式得到阿霉素-葡聚糖-叶酸纳米粒子。本专利技术还提供了一种用于治疗肿瘤的纳米粒制剂的制备方法，包括以下步骤：1)调节多糖接枝叶酸共聚物纳米粒的pH至8～12；在冰浴条件下超声破碎，同时加入脱去盐酸的抗肿瘤药物的二甲亚砜溶液，得到超声后的溶液；抗肿瘤药物的二甲亚砜溶液中阿霉素与多糖接枝叶酸共聚物纳米粒投料质量比为1：5～100；2)再超声后的溶液在冰浴条件下超声破碎5～15min，随后调节pH至7.2～7.4；得到包载抗肿瘤药物的多糖接枝叶酸共聚物纳米粒；3)将步骤2)所得的包载抗肿瘤药物的多糖接枝叶酸共聚物纳米粒离心超滤，超滤管截留分子量为3000～100000Da，超滤5～10次，得到包载抗肿瘤药物的多糖接枝叶酸共聚物纳米粒，即为纳米粒制剂。作为优选方案，所述步骤1)中，pH值为9，所述步骤1)中，多糖接枝叶酸共聚物纳米粒的制备方法，包括以下步骤：a.将多糖接枝叶酸共聚物溶解于水中，得到浓度为0.1～100mg/ml的多糖接枝叶酸共聚物的溶液；b.调节多糖接枝叶酸共聚物的溶液pH值至8～12，优选pH为9，在该状态下搅拌5～30min；然后快速加入盐酸溶液，控制时间0～10s之内将溶液pH调节至7.2～7.4，得到了多糖接枝叶酸共聚物纳米粒，其中，上述溶液中多糖接枝叶酸共聚物纳米粒的粒径小于或者等于150nm。再进一步地，所述步骤a中，多糖接枝叶酸共聚物，其具有如下的通式：其中，R为分子量为5000～500000Da的多糖。进一步，R选自葡聚糖、壳寡糖、普鲁兰多糖、羟乙基纤维素和透明质酸。再进一步地，所述多糖-叶酸共聚物为葡聚糖接枝叶酸共聚物，其具有如下的通式：其中，n为100～10000；作为优选方案，n为640。再进一步地，所述叶酸在多糖上的取代度为20％～50％；为保证多糖-叶酸共聚物能够组装成粒径小于或者等于150纳米的纳米粒；进一步优选为42％，该取代度下，纳米粒拥有小于或者等于150纳米的均一的粒径分布。再进一步地，一种上述多糖接枝叶酸共聚物的制备方法，包括以下步骤：1)溶解叶酸并活化其羧基：用无水二甲亚砜溶解叶酸，随后加入1-羟基苯并三氮唑和N-N’-二环己基碳二亚胺，进行羧基活化反应，在室温下搅拌2～4h后得到端羧基活化的叶酸溶液；其中，叶酸、1-羟基苯并三氮唑和N-N’-二环己基碳二亚胺的投料摩尔比为1:1～2:1～2；2)溶解多糖：氦气保护条件下，在温度为50～70℃下将分子量为5000～500000Da的多糖充分溶解于无水二甲亚砜中，得到多糖的二甲亚砜溶液：3)酯化反应：将步骤1)得到的羧基活化的叶酸溶液与步骤2)得到的多糖的二甲亚砜溶液混合，在氮气保护和温度为40～80℃条件下发生酯化反应24～72h，纯化后得到共聚物混合物；其中，羧基活化的叶酸溶液中的叶酸与多糖的二甲亚砜溶液中的多糖质量比为1:1～4；4)纯化：将上述共聚物混合物使用PBS溶液进行共透析1～5天，除去未反应的1-羟基苯并三氮唑、N-N’-二环己基碳二亚胺、叶酸以及DMSO溶剂，透析完毕后将透析袋中的液体转移至塑料培养皿中，先在温度为-20～-25℃条件冷冻3～5h，然后放入温度为-40～-60℃条件下冷冻干燥，将冷冻干燥后得到所述的多糖接枝叶酸共聚物冻干粉；即为多糖接枝叶酸共聚物。再进一步地，所述步骤1)中，羧基活化反应中，反应温度为40～80℃，反应时间为30～60min。所述步骤2)中，所述多糖选自葡聚糖、壳寡糖、普鲁兰多糖、羟乙基纤维素和透明质酸；所述步骤4)中，透析过程中，透析袋分子量为3500Da～24000Da，冷冻温度为-20℃，冷冻时间为4h；冷冻干燥温度为-50℃。本专利技术的有益效果在于：1)本专利技术采用PH调节的方式可以高效的得到用于治疗肿瘤的纳米粒制剂，该制剂包括多糖接枝叶酸共聚物纳米粒和带正电的抗肿瘤药物，所述多糖接枝叶酸共聚物纳米粒包载有带正电的抗肿瘤药物，相对于其他的制备方法而言，制备工艺更加简单，流程更短。其中，阿霉本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗肿瘤的纳米粒制剂，其特征在于：所述制剂包括多糖接枝叶酸共聚物纳米粒和带正电的抗肿瘤药物，所述多糖接枝叶酸共聚物纳米粒包载有带正电的抗肿瘤药物，所述带正电的抗肿瘤药物与多糖接枝叶酸共聚物纳米粒质量比为1～5:100。

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗肿瘤的纳米粒制剂，其特征在于：所述制剂包括多糖接枝叶酸共聚物纳米粒和带正电的抗肿瘤药物，所述多糖接枝叶酸共聚物纳米粒包载有带正电的抗肿瘤药物，所述带正电的抗肿瘤药物与多糖接枝叶酸共聚物纳米粒质量比为1～5:100。2.根据权利要求1所述用于治疗肿瘤的纳米粒制剂，其特征在于：所述带正电的抗肿瘤药物为阿霉素，所述多糖接枝叶酸共聚物纳米粒的粒径小于或者等于150nm。3.一种权利要求1所述用于治疗肿瘤的纳米粒制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1)调节多糖接枝叶酸共聚物纳米粒的pH至8～12；在冰浴条件下超声破碎，同时加入脱去盐酸的抗肿瘤药物的二甲亚砜溶液，得到超声后的溶液；其中，抗肿瘤药物的二甲亚砜溶液中阿霉素与多糖接枝叶酸共聚物纳米粒投料质量比为1：5～100；2)再超声后的溶液在冰浴条件下超声破碎5～15min，随后调节pH至7.2～7.4；得到包载抗肿瘤药物的多糖接枝叶酸共聚物纳米粒；3)将步骤2)所得的包载抗肿瘤药物的多糖接枝叶酸共聚物纳米粒离心超滤，超滤管截留分子量为3000～100000Da，超滤5～10次，得到包载抗肿瘤药物的多糖接枝叶酸共聚物纳米粒，即为纳米粒子制剂。4.根据权利要求3所述用于治疗肿瘤的纳米粒制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，pH值为9；多糖接枝叶酸共聚物纳米粒的制备方法，包括以下步骤：a.将多糖接枝叶酸共聚物溶解于水中，得到浓度为0.1～100mg/ml的多糖接枝叶酸共聚物的溶液；b.调节多糖接枝叶酸共聚物的溶液pH值至8～12，在该状态下搅拌5～30min；然后快速加入盐酸溶液，控制时间0～10s之内将溶液pH调节至7.2～7.4，得到了多糖接枝叶酸共聚物纳米粒，其中，上述溶液中多糖接枝叶酸共聚物纳米粒的粒径小于或者等于150nm。5.根据权利要求4所述用于治疗肿瘤的纳米粒制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤a中，多糖接枝叶酸共聚物，其具有如下的通式：其中，R为分子量为5000～500000Da的多糖。6.根据权利要求5所述用于治疗肿瘤的纳米粒制剂的制备方法，其特征在于：所述R选自葡聚糖、壳寡糖、普鲁兰多糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：李子福，杨祥良，徐辉碧，唐宇翔，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42