脱细胞外基质及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种脱细胞外基质的制备方法，该脱细胞外基质的制备方法制得的脱细胞外基质以及该脱细胞外基质在制备医疗器械领域的应用。一种脱细胞外基质的制备方法，包括如下步骤：对哺乳动物的组织器官进行预处理后得到组织前体；对组织前体分别进行病毒灭活处理、DNA清除处理、脱细胞处理和脱脂处理，得到脱细胞外基质前体；对脱细胞外基质前体依次进行梯度脱水处理和交联处理，最后定型干燥得到脱细胞外基质，梯度脱水处理为：对所述脱细胞外基质前体依次浸泡在浓度依次增加的有机物溶液中。这种脱细胞外基质的制备方法，通过梯度脱水处理组织前体，可以使得最终制得的脱细胞外基质的胶原纤维的有序结构不被破坏。

Acellular extracellular matrix and its preparation methods and Applications

The invention discloses a preparation method of the acellular outer matrix, the acellular outer matrix prepared by the preparation method of the acellular outer matrix and the application of the acellular outer matrix in the field of preparing medical instruments. A preparation method of the acellular extracellular matrix, including the following steps: preprocessing the tissues and organs of the mammal to get the tissue precursor; the precursor of the acellular matrix is obtained by virus inactivation treatment, DNA scavenging treatment, decellularized treatment and degreasing treatment of the tissue precursor, and the precursor of the acellular matrix is in turn in turn. A gradient dehydration treatment and crosslinking treatment were performed, and the acellular extracellular matrix was finally dried and the gradient dehydration was treated as an organic solution in order that the precursors of the acellular matrix precursor were soaked in turn. The preparation of this acellular extracellular matrix, through the gradient dehydration treatment of the tissue precursor, can make the final structure of the collagen fibers of the acellular matrix not destroyed.

【技术实现步骤摘要】
脱细胞外基质及其制备方法和应用
本专利技术涉及医疗材料领域，特别是涉及一种脱细胞外基质及其制备方法和应用。
技术介绍
基于组织工程学原理的以动物组织为原料的细胞外基质材料是主要发展方向。细胞外基质是由多种大分子物质如胶原、非胶原糖蛋白、弹性蛋白等成分构建的复杂有机的三维整体结构，为各种细胞的生存及活动提供适宜的场所及微环境，调控组织器官功能。所以细胞外基质作为理想的组织修复材料，已经广泛用于临床，包括心包膜、胸膜、隔膜、腹膜和小肠粘膜下层等细胞外基质材料。自体和异体组织的来源极为有限，异种(如：猪、牛、马)的脱细胞外基质就成为了当今软组织修复技术研究的一大主题。脱细胞外基质的制备方法有很多种，目的是能够去除组织内所有的细胞、脂肪等成分，而最大限度地保留胶原成分和结构的完整性。脱细胞工艺和病毒灭活工艺是脱细胞外基质材料的主要工艺和技术难点，要求完全去除动物组织的病毒、细胞和动物源DNA成分，同时完整保留天然脱细胞外基质的成分和三维结构。制备脱细胞外基质的方法种类繁多，但大多不能完全去除所有的动物源性DNA成分，并且耗时长，需要使用多种有机和表面活性剂等溶剂，一方面导致了脱细胞基质材料中活性成分的破坏，另一方面，有害溶剂残留会导致细胞毒性、刺激和免疫反应，从而影响组织修复效果。且大多脱细胞外基质的亲水性和贴敷性不强，吸水速率慢，膜不够薄和柔软，从而不能适应各种表面轮廓组织的修复。现有的脱细胞外基质的制备方法制得的脱细胞外基质的胶原纤维的有序结构遭到破坏，从而影响了后续应用。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种可以避免胶原纤维的有序结构被破坏的脱细胞外基质的制备方法，以及该脱细胞外基质的制备方法制得的脱细胞外基质和应用。一种脱细胞外基质的制备方法，包括如下步骤：对哺乳动物的组织器官进行预处理后得到组织前体；对所述组织前体分别进行病毒灭活处理、DNA清除处理、脱细胞处理和脱脂处理，得到脱细胞外基质前体，其中，所述病毒灭活处理、所述DNA清除处理、所述脱细胞处理和所述脱脂处理的操作顺序可以相互更换；对所述脱细胞外基质前体依次进行梯度脱水处理和交联处理，最后定型干燥得到脱细胞外基质，其中，所述梯度脱水处理为：对所述脱细胞外基质前体依次浸泡在浓度依次增加的有机物溶液中，每次浸泡的时间为10min～60min。在一个实施例中，所述梯度脱水处理为：将所述脱细胞外基质前体依次浸泡在质量百分浓度为25％、50％、75％、90％和100％的有机物溶液中，每次浸泡的时间为10min～60min，其中，所述有机物溶液的溶质为乙醇或丙酮。在一个实施例中，所述对所述哺乳动物的组织器官进行预处理的操作为：用机械法对所述哺乳动物的组织器官进行初步去除脂肪、肌肉以及附属的其他器官后，用纯水清洗干净。在一个实施例中，所述哺乳动物的组织器官为猪、牛或马的组织器官。在一个实施例中，所述哺乳动物的组织器官包括哺乳动物的心包膜、胸膜、隔膜、腹膜和小肠粘膜下层。在一个实施例中，所述哺乳动物的组织器官为猪的腹膜。在一个实施例中，所述病毒灭活处理为：将所述组织前体浸泡在病毒灭活溶液中1h～10h进行病毒灭活处理，所述病毒灭活溶液为质量百分浓度为0.1％～5％的过氧化物溶液，或所述病毒灭活溶液为含有0.1wt％～5wt％的过氧化物和20wt％～70wt％的乙醇的混合溶液；所述DNA清除处理为：将所述组织前体浸泡在碱溶液中1h～24h，再浸泡在酸溶液中1h～12h；所述脱细胞处理为：将所述组织前体浸泡在质量百分浓度为0.05％～0.5％的蛋白酶溶液中6h～48h，再浸泡在浓度为0.5M～3M的NaCl溶液中6h～48h；所述脱脂处理为：将所述组织前体浸泡在脱脂有机物中，浸泡次数为1次～5次，每次浸泡的时间为1h～24h；所述交联处理为：在温度为90℃～150℃的条件下，对经过梯度脱水处理的所述脱细胞外基质前体进行高温真空交联1h～24h；或者，所述交联处理为：将经过梯度脱水处理的所述脱细胞外基质前体浸泡在质量百分浓度为0.25％～3％的交联剂溶液中1h～24h。在一个实施例中，所述过氧化物溶液选自过氧化氢溶液和过氧乙酸溶液中的至少一种；所述过氧化物选自过氧化氢和过氧乙酸中的至少一种；所述碱溶液选自碳酸钠溶液、碳酸氢钠溶液、氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，所述碱溶液的质量百分浓度为0.5％～4％；所述酸溶液选自盐酸和醋酸溶液中的至少一种，所述酸溶液的质量百分浓度为0.05％～2％；所述蛋白酶选自胰蛋白酶、胃蛋白酶和中性蛋白酶中的至少一种；所述脱脂有机物选自正己烷、异丙醇、乙二醇和乙醚中的至少一种；所述交联剂溶液选自戊二醛溶液、碳化二亚胺溶液、京尼平溶液和环氧化合物溶液中的至少一种。一种脱细胞外基质，采用上述的脱细胞外基质的制备方法制备得到。上述的脱细胞外基质，在制备医疗器械领域的应用。这种脱细胞外基质的制备方法，通过病毒灭活处理、DNA清除处理、脱细胞处理和脱脂处理去除了组织前体的免疫原性，接着通过将组织前体依次浸泡在浓度依次增加的有机物溶液中梯度脱水，接着交联处理和定性干燥，得到脱细胞外基质。通过梯度脱水处理组织前体，可以使得最终制得的脱细胞外基质的胶原纤维的有序结构不被破坏。此外，同时由于具有有序的胶原纤维结构，这种脱细胞外基质具有优异的柔韧性、良好的生物相容性和骨诱导能力，同时吸水速率快并且吸水不膨胀，具有良好的应用前景。附图说明图1为一实施方式的脱细胞外基质的制备方法的流程图；图2是实施例1制得的制备脱细胞外基质的光滑面的扫描电子显微镜照片；图3是实施例1制得的制备脱细胞外基质的粗糙面的扫描电子显微镜照片；图4是实施例1制得的制备脱细胞外基质经过苏木精-伊红染色后的倒置显微镜照片；图5是实施例1制得的制备脱细胞外基质植入兔子体内一周后切片经过苏木精-伊红染色后的倒置显微镜照片。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。如图1所示，本专利技术公开了一实施方式的脱细胞外基质的制备方法，包括如下步骤：S10、对哺乳动物的组织器官进行预处理后得到组织前体。对哺乳动物的组织器官进行预处理的操作为：用机械法对哺乳动物的组织器官进行初步去除脂肪、肌肉以及附属的其他器官后，用纯水清洗干净(优选为清洗3～5遍)。其中，附属的其他器官指出了心包膜、胸膜、隔膜、腹膜和小肠粘膜下层之外的器官。优选的，哺乳动物的组织器官为猪、牛或马的组织器官。优选的，哺乳动物的组织器官包括哺乳动物的心包膜、胸膜、隔膜、腹膜和小肠粘膜下层。特别优选的，哺乳动物的组织器官为猪的腹膜。S10得到的组织前体可以储存在-20℃备用。S20、对S10得到的组织前体分别进行病毒灭活处理、DNA清除处理、脱细胞处理和脱脂处理，得到脱细胞外基质前体。S20中，病毒灭活处理、DNA清除处理、脱细胞处理和脱脂处理的操作顺序可以相互更换。S20中，病毒灭活处理为：将组织前体浸泡在病毒灭活溶液中1h～10h(优选为3h)进行病毒灭活处理。病毒灭活溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脱细胞外基质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：对哺乳动物的组织器官进行预处理后得到组织前体；对所述组织前体分别进行病毒灭活处理、DNA清除处理、脱细胞处理和脱脂处理，得到脱细胞外基质前体，其中，所述病毒灭活处理、所述DNA清除处理、所述脱细胞处理和所述脱脂处理的操作顺序可以相互更换；对所述脱细胞外基质前体依次进行梯度脱水处理和交联处理，最后定型干燥得到脱细胞外基质，其中，所述梯度脱水处理为：对所述脱细胞外基质前体依次浸泡在浓度依次增加的有机物溶液中，每次浸泡的时间为10min～60min。

【技术特征摘要】
1.一种脱细胞外基质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：对哺乳动物的组织器官进行预处理后得到组织前体；对所述组织前体分别进行病毒灭活处理、DNA清除处理、脱细胞处理和脱脂处理，得到脱细胞外基质前体，其中，所述病毒灭活处理、所述DNA清除处理、所述脱细胞处理和所述脱脂处理的操作顺序可以相互更换；对所述脱细胞外基质前体依次进行梯度脱水处理和交联处理，最后定型干燥得到脱细胞外基质，其中，所述梯度脱水处理为：对所述脱细胞外基质前体依次浸泡在浓度依次增加的有机物溶液中，每次浸泡的时间为10min～60min。2.根据权利要求1所述的脱细胞外基质的制备方法，其特征在于，所述梯度脱水处理为：将所述脱细胞外基质前体依次浸泡在质量百分浓度为25％、50％、75％、90％和100％的有机物溶液中，每次浸泡的时间为10min～60min，其中，所述有机物溶液的溶质为乙醇或丙酮。3.根据权利要求1所述的脱细胞外基质的制备方法，其特征在于，所述对所述哺乳动物的组织器官进行预处理的操作为：用机械法对所述哺乳动物的组织器官进行初步去除脂肪、肌肉以及附属的其他器官后，用纯水清洗干净。4.根据权利要求1或3所述的脱细胞外基质的制备方法，其特征在于，所述哺乳动物的组织器官为猪、牛或马的组织器官。5.根据权利要求1或3所述的脱细胞外基质的制备方法，其特征在于，所述哺乳动物的组织器官包括哺乳动物的心包膜、胸膜、隔膜、腹膜和小肠粘膜下层。6.根据权利要求1或3所述的脱细胞外基质的制备方法，其特征在于，所述哺乳动物的组织器官为猪的腹膜。7.根据权利要求1所述的脱细胞外基质的制备方法，其特征在于，所述病毒灭活处理为：将所述组织前体浸泡在病毒灭活溶液中1h～10h进行病毒灭活处理，所述病毒灭活溶液为质量百...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丽花，钟梅玲，朱勇军，朱光林，谭荣伟，佘振定，
申请(专利权)人：深圳兰度生物材料有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44