一种抗酶解交联透明质酸钠凝胶及其制备方法和制剂技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种抗酶解交联透明质酸钠凝胶及其制备方法和制剂。具体而言，本发明专利技术的制备方法包括下列步骤：1)采用碱液溶解具有不同分子量的两种透明质酸钠；2)两种透明质酸钠的交联；3)交联透明质酸钠的沉淀、洗涤及干燥；4)交联透明质酸钠粉末的溶胀。本发明专利技术采用高、低分子量透明质酸钠互相交联的方式获得抗酶解交联透明质酸钠凝胶，其具有稳定的三维网络结构，抗热解性能、抗酶降解性和推注流畅性得到明显提高，制备方法减少了工艺步骤，节省了生产成本，具有操作方便、浓度可控的优点。

Anti enzymolysis crosslinked sodium hyaluronate gel and preparation method and preparation thereof

The invention belongs to the field of biological medicine, and relates to an anti enzymolysis crosslinked sodium hyaluronate gel, a preparation method and a preparation thereof. In particular, the preparation method of the invention includes the following steps: 1) two kinds of sodium hyaluronate with different molecular weights are dissolved in alkaline solution; 2) the crosslinking of two hyaluronate sodium; 3) the precipitation, washing and drying of sodium hyaluronate; 4) the swelling of the crosslinked sodium hyaluronate powder. The invention uses high and low molecular weight sodium hyaluronate crosslinking method to obtain anti enzyme crosslinked sodium hyaluronate gel, which has a stable three-dimensional network structure. The anti pyrolysis performance, anti enzyme degradation and push fluency are obviously improved. The preparation method reduces the process step, saves the production cost and has operation. The advantages of convenient and controllable concentration.

【技术实现步骤摘要】
一种抗酶解交联透明质酸钠凝胶及其制备方法和制剂
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种抗酶解交联透明质酸钠凝胶及其制备方法和制剂。
技术介绍
透明质酸(又名玻尿酸)是一种由葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖通过糖苷键连接而成的线性大分子多糖。在生理状态下，透明质酸通常以钠盐形式存在。透明质酸钠是细胞外基质的重要组成部分，具有调节免疫、屏障保护、调节渗透压、调控大分子物质的转运等多种作用。透明质酸钠可用于眼科手术辅助用药及骨关节炎的辅助治疗，并且在创伤修复、组织生成等方面具有重要的生理功能。用于提高交联透明质酸钠抗酶解性能的传统方法是通过增加交联剂浓度、提高交联时起始透明质酸钠浓度等方法来实现，但往往会导致交联透明质酸钠透明度降低、生物相容性差、推注性能差等缺点，不利于产品的临床应用。
技术实现思路
针对现有技术中的交联透明质酸钠凝胶的抗酶解性能不佳以及用于提高交联凝胶抗酶解性能的方法会导致凝胶生物相容性差等问题，本专利技术旨在提供一种新型抗酶解交联透明质酸钠凝胶及其制备方法和制剂。本专利技术使用具有不同分子量的两种透明质酸钠作为原料，在碱性环境中进行交联，经有机溶剂沉淀、洗涤、干燥、溶胀后，得到抗酶解交联透明质酸钠凝胶。该交联透明质酸钠凝胶具有浓度可控、低交联剂残留、抗酶解性强等优点。整个制备方法便于操作，易于控制。具体而言，本专利技术采用如下技术方案：一种抗酶解交联透明质酸钠凝胶的制备方法，其包括下列步骤：1)采用碱液溶解透明质酸钠：将由高分子量透明质酸钠和低分子量透明质酸钠组成的混合物溶解于碱液中，得到透明质酸钠的碱性溶液；2)透明质酸钠的交联：在搅拌条件下，向步骤1)中得到的透明质酸钠的碱性溶液中加入交联剂，于25～55℃反应1～6小时，得到交联透明质酸钠的碱性溶液；3)交联透明质酸钠的沉淀、洗涤及干燥：使用酸将步骤2)中得到的交联透明质酸钠的碱性溶液的pH值调节至6.5～7.5，再加入沉淀用溶剂，直至不再析出沉淀为止，然后使用沉淀用溶剂将析出的沉淀洗涤5次以上，低温真空干燥，得到交联透明质酸钠粉末；4)交联透明质酸钠粉末的溶胀：在无菌条件下，将步骤3)中得到的交联透明质酸钠粉末加入到磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)中，充分溶胀后搅拌均匀，得到抗酶解交联透明质酸钠凝胶。在一项优选的技术方案中，以重量百分比计，步骤1)中所述混合物由10％～50％的所述高分子量透明质酸钠和50％～90％的所述低分子量透明质酸钠组成。在一项优选的技术方案中，步骤1)中所述高分子量透明质酸钠和所述低分子量透明质酸钠均通过细菌发酵法制得。在一项优选的技术方案中，步骤1)中所述高分子量透明质酸钠的分子量为1.0×106～4.0×106道尔顿，优选1.5×106～3.0×106道尔顿。在一项优选的技术方案中，步骤1)中所述低分子量透明质酸钠的分子量为1.0×105～1.0×106道尔顿，优选2.0×105～5.0×105道尔顿。在一项优选的技术方案中，步骤1)中所述碱液为氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液。在一项优选的技术方案中，步骤1)中所述碱液的摩尔浓度为0.1～0.5摩尔/升，优选0.25摩尔/升。在一项优选的技术方案中，步骤1)中所述混合物与所述碱液的用量比为1～2克:10毫升，优选1克:10毫升。在一项优选的技术方案中，步骤2)中所述交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)或二乙烯基砜(DVS)。在一项优选的技术方案中，步骤2)中所述交联剂与步骤1)中所述混合物的重量比为1:5～100，优选1:10～50。在一项优选的技术方案中，步骤3)中所述酸为盐酸。在一项优选的技术方案中，步骤3)中所述沉淀用溶剂为醇或其水溶液，其中所述醇为甲醇、乙醇或异丙醇。在一项优选的技术方案中，步骤3)中所述低温真空干燥的温度为0～4℃。在一项优选的技术方案中，步骤4)中所述磷酸盐缓冲液包含以重量百分比计的下列成分：0.65％～0.9％的氯化钠(NaCl)、0.05％～0.2％的磷酸氢二钠(Na2HPO4)、0.005％～0.03％的磷酸二氢钠(NaH2PO4)和余量的纯化水，所述磷酸盐缓冲液的pH值为6.5～7.5。在一项优选的技术方案中，步骤4)中所述交联透明质酸钠粉末与所述磷酸盐缓冲液的用量比为15～30毫克:1毫升，优选20毫克:1毫升。一种抗酶解交联透明质酸钠凝胶，其通过上述制备方法而制得。一种抗酶解交联透明质酸钠凝胶制剂，其由上述抗酶解交联透明质酸钠凝胶通过分装和灭菌而制得。在一项优选的技术方案中，所述分装的具体过程如下：在无菌条件下，使用全自动真空加塞灌装机将所述交联透明质酸钠凝胶分装入预灌装注射器中，并真空加塞。在一项优选的技术方案中，所述灭菌为高压蒸汽灭菌，温度为110～130℃，时间为10～15分钟。与现有技术相比，采用上述技术方案的本专利技术具有如下优点：(1)本专利技术采用高、低分子量透明质酸钠互相交联的方式获得的交联透明质酸钠凝胶，与现有的交联凝胶制备工艺相比，减少了工艺步骤，节省了生产成本；(2)本专利技术的交联透明质酸钠凝胶具有稳定的三维网络结构，与通过两相凝胶制备方法获得的产品相比，抗热解性能、抗酶降解性和推注流畅性得到明显提高；(3)本专利技术利用有机溶剂乙醇或异丙醇进行沉淀并结合低温真空干燥的方法得到交联透明质酸钠干粉，使得配制任意浓度的凝胶得以实现，与两相凝胶制备方法中采取的透析工艺相比，具有操作方便、浓度可控的优点。附图说明图1为实施例1至5中的交联透明质酸钠凝胶在灭菌前后的弹性模量对比图。图2为实施例1至5中的交联透明质酸钠凝胶与市售产品的抗酶解性能对比图。图3为不同的漂洗次数对交联透明质酸钠凝胶中交联剂残留的影响效果图。具体实施方式以下将结合附图和具体实施例对本专利技术做出进一步的描述。除非另有说明，下列实施例中所使用的仪器、试剂、材料等均可通过常规商业手段获得。实施例1：抗酶解交联透明质酸钠凝胶及凝胶制剂的制备。称取由细菌发酵法制得的高分子量透明质酸钠(0.2g，3.0×106Da)和低分子量透明质酸钠(1.8g，4.0×105Da)，混合后溶解于0.25M氢氧化钠水溶液(20mL)中，得到透明质酸钠的碱性溶液。在机械搅拌条件下，向上述透明质酸钠的碱性溶液中加入BDDE(0.2g)，于40℃水浴中反应3h，得到交联透明质酸钠的碱性溶液。向上述交联透明质酸钠的碱性溶液中加入0.1M盐酸并调节至pH＝7.0，缓慢加入95％乙醇至白色沉淀完全析出。用95％乙醇将析出的沉淀漂洗5次，于4℃真空干燥，得到交联透明质酸钠粉末1.84g。按照20mg:1mL的用量比，将上述干燥后的粉末加入到PBS缓冲液(包含以重量百分比计的下列成分：0.65％～0.9％的NaCl、0.05％～0.2％的Na2HPO4、0.005％～0.03％的NaH2PO4和余量的纯化水)中，充分溶胀后搅拌均匀，得到抗酶解交联透明质酸钠凝胶。在无菌条件下，使用全自动真空加塞灌装机将上述单相交联透明质酸钠凝胶分装入预灌装注射器中，并真空加塞，然后于121℃高压蒸汽灭菌15min，得到抗酶解交联透明质酸钠凝胶制剂。实施例2：抗酶解交联透明质酸钠凝胶及凝胶制剂的制备。称取由细菌发酵法制得的高分子量透明质酸钠(1.0g，3.0×106Da)和低分子量透明质酸钠(1.0g，4.0×本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗酶解交联透明质酸钠凝胶的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括下列步骤：1)采用碱液溶解透明质酸钠：将由高分子量透明质酸钠和低分子量透明质酸钠组成的混合物溶解于碱液中，得到透明质酸钠的碱性溶液；2)透明质酸钠的交联：在搅拌条件下，向步骤1)中得到的透明质酸钠的碱性溶液中加入交联剂，于25～55℃反应1～6小时，得到交联透明质酸钠的碱性溶液；3)交联透明质酸钠的沉淀、洗涤及干燥：使用酸将步骤2)中得到的交联透明质酸钠的碱性溶液的pH值调节至6.5～7.5，再加入沉淀用溶剂，直至不再析出沉淀为止，然后使用沉淀用溶剂将析出的沉淀洗涤5次以上，低温真空干燥，得到交联透明质酸钠粉末；4)交联透明质酸钠粉末的溶胀：在无菌条件下，将步骤3)中得到的交联透明质酸钠粉末加入到磷酸盐缓冲液中，充分溶胀后搅拌均匀，得到抗酶解交联透明质酸钠凝胶。

【技术特征摘要】
1.一种抗酶解交联透明质酸钠凝胶的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括下列步骤：1)采用碱液溶解透明质酸钠：将由高分子量透明质酸钠和低分子量透明质酸钠组成的混合物溶解于碱液中，得到透明质酸钠的碱性溶液；2)透明质酸钠的交联：在搅拌条件下，向步骤1)中得到的透明质酸钠的碱性溶液中加入交联剂，于25～55℃反应1～6小时，得到交联透明质酸钠的碱性溶液；3)交联透明质酸钠的沉淀、洗涤及干燥：使用酸将步骤2)中得到的交联透明质酸钠的碱性溶液的pH值调节至6.5～7.5，再加入沉淀用溶剂，直至不再析出沉淀为止，然后使用沉淀用溶剂将析出的沉淀洗涤5次以上，低温真空干燥，得到交联透明质酸钠粉末；4)交联透明质酸钠粉末的溶胀：在无菌条件下，将步骤3)中得到的交联透明质酸钠粉末加入到磷酸盐缓冲液中，充分溶胀后搅拌均匀，得到抗酶解交联透明质酸钠凝胶。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述混合物由以重量百分比计的10％～50％的所述高分子量透明质酸钠和50％～90％的所述低分子量透明质酸钠组成；步骤1)中所述高分子量透明质酸钠的分子量为1.0×106～4.0×106道尔顿；步骤1)中所述低分子量透明质酸钠的分子量为1.0×105～1.0×106道尔顿...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘璐，吴剑英，张军东，常臻，
申请(专利权)人：上海利康瑞生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31