测定样品中脱氢乙酸的方法技术

本发明专利技术提出了一种测定样品中脱氢乙酸的方法。所述方法包括：(1)将所述样品、正己烷、水及甲醇进行混合，并将所得到的混合液进行离心，得到具有上、下两层第一分离液的混合液，收集下层第一分离液；(2)将甲醇、水和所述上层第一分离液进行混合，并将所得到的混合液进行离心，得到具有上、下两层第二分离液的混合液，收集下层第二分离液；(3)合并所述下层第一分离液和下层第二分离液，用氢氧化钠溶液调节所述合并后溶液的pH值，并进行定容，得到待测液；以及(4)利用液相色谱法对所述待测液1进行检测，并基于检测结果确定所述样品中脱氢乙酸含量。本发明专利技术能够准确地测定黄油或奶油中脱氢乙酸含量，且操作快速、简便。

【技术实现步骤摘要】
测定样品中脱氢乙酸的方法
本专利技术涉及食品领域。具体地，本专利技术涉及测定样品中脱氢乙酸的方法。
技术介绍
脱氢乙酸是一种低毒、高效、广谱抗菌剂，广泛应用于涂料、油料、皮革制品、食品、饲料、包装材料和化妆品，具有防霉防腐的作用。由于脱氢乙酸有抗菌的作用，加入乳及乳制品中起到的抗菌作用比较明显，从而增加保存时间；虽然抗菌作用比较明显，但是在食品中都有最大允许用量，在酸性食品中最大允许添加量为0.6％，一般添加量为为0.02％～0.2％。然而，目前测定样品中脱氢乙酸的方法仍有待改进。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题。为此，本专利技术提出了一种测定样品中脱氢乙酸的方法。本专利技术能够准确地测定黄油或奶油中脱氢乙酸含量，且操作快速、简便。需要说明的是，本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的：目前，主要采用GB/T23377-2009《食品中脱氢乙酸的测定-高效液相色谱法》(简称国标法)检测脱氢乙酸含量的方法，但是该方法检测过程复杂，且回收率低。有鉴于此，专利技术人过大量实验发现，采用正己烷、热水和甲醇联用的方式，与待测样品混合，得到混有油脂的正己烷层和混有脱氢乙酸的甲醇-水层，起到提取脱氢乙酸的同时避免油脂干扰的效果。接着，用甲醇和水提取正己烷层中混有的少量脱氢乙酸。合并两次提取的脱氢乙酸，用氢氧化钠溶液调节pH值，使其与后续液相色谱所需流动相的pH值相近。最后，进行定容、过滤及液相色谱检测。由此，根据本专利技术实施例的测定样品中脱氢乙酸的方法能够准确地测定黄油或奶油中脱氢乙酸含量，且操作快速、简便。为此，本专利技术提出了一种测定样品中脱氢乙酸的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：(1)将所述样品、正己烷、水及甲醇进行混合，并将所得到的混合液进行离心，得到具有上、下两层第一分离液的混合液，收集下层第一分离液；(2)将甲醇、水和所述上层第一分离液进行混合，并将所得到的混合液进行离心，得到具有上、下两层第二分离液的混合液，收集下层第二分离液；(3)合并所述下层第一分离液和下层第二分离液，用氢氧化钠溶液调节所述合并后溶液的pH值，并进行定容，得到待测液；以及(4)利用液相色谱法对所述待测液进行检测，并基于检测结果确定所述样品中脱氢乙酸含量，其中，所述样品为黄油或奶油，所述用氢氧化钠溶液调节合并后溶液的pH值和所述液相色谱法所采用的流动相的pH值分别独立地为7.0～8.5。专利技术人经过大量实验得到上述最优检测方法。具体地，由于黄油或奶油中存在大量油脂，而待检测的脱氢乙酸被包覆在油脂中，影响检测。由此，先用正己烷、水及甲醇与样品进行混合，从而有效地使脱氢乙酸与油脂分离，得到主要溶有脱氢乙酸的甲醇-水层(下层)以及主要溶有油脂的正己烷层(上层)。由此，能够有效地防止油脂对检测结果的干扰。接着，用甲醇和水与正己烷层进行混合，以进一步提取混有的少量脱氢乙酸。采用国标法检测脱氢乙酸时，多次转移提取容器(如容量瓶→分液漏斗→离心管)，转移过程中会容易造成溶液损失，使得检测的回收率较低。本专利技术的方法可以直接在离心管中进行，无需多次转移，从而避免溶液损失，回收率较高，且缩短了检测时间。此外，专利技术人意外地发现，采用甲醇提取脱氢乙酸的得率明显高于氢氧化钠溶液，且由于黄油和无水奶油蛋白质含量较低的特性，所以采用甲醇提取时无需另行添加蛋白沉淀剂。然而，采用其他试剂的提取效果不如甲醇好。专利技术人意外地发现，用氢氧化钠溶液调节合并后溶液的pH值和液相色谱法所采用的流动相的pH值显著影响目标峰的出峰时间。若两者的pH值差距较大，将导致待测液的出峰时间与标准品(pH值接近流动相的pH值)的出峰时间不一致，从而无法准确判断目标峰，容易造成目标峰的误判。进而，通过采用氢氧化钠溶液调节合并后的溶液的pH值，使其与流动相pH值相同或相近，且均在7.0～8.5范围内，能够有效地保证标准品和待测液的出峰时间一致，从而保证检测结果的准确性。由此，根据本专利技术实施例的测定样品中脱氢乙酸的方法能够准确地测定黄油或奶油中脱氢乙酸含量，且操作快速、简便。根据本专利技术的实施例，上述测定样品中脱氢乙酸的方法还可以具有下列附加技术特征：根据本专利技术的实施例，所述液相色谱法所采用的流动相为甲醇-乙酸铵溶液，其中所述流动相中乙酸铵溶液含量为85～99质量％、pH值为7.5～8.5。专利技术人发现，通过控制乙酸铵溶液的pH值及其与甲醇的比例，能够使得目标峰分离，且待测液的出峰时间与标准品(pH值接近流动相的pH值)的出峰时间一致。由此，根据本专利技术实施例的测定样品中脱氢乙酸的方法能够准确地测定黄油或奶油中脱氢乙酸含量，且操作快速、简便。根据本专利技术的实施例，步骤(1)中，所述水的温度为50～80℃。专利技术人经过大量实验发现，将样品与50～80℃水进行混合后，能够加速黄油或奶油溶解，提高检测效率。若温度过低，无法充分溶解黄油或奶油，延长检测时间；若温度过高，脱氢乙酸不稳定，容易分解。根据本专利技术的优选实施例，所述水的温度为60℃。由此，根据本专利技术实施例的测定样品中脱氢乙酸的方法能够进一步准确地测定黄油、奶油中脱氢乙酸的含量，且操作快速、简便。根据本专利技术的实施例，所述甲醇与水的体积比为1:1。专利技术人经过大量实验得到上述比例关系，在此条件下能够准确地测定脱氢乙酸的含量，而当甲醇与水的体积比在其它比例条件下，回收率普遍偏低。由此，根据本专利技术实施例的测定样品中脱氢乙酸的方法能够进一步准确地测定黄油、奶油中脱氢乙酸的含量，且操作快速、简便。根据本专利技术的实施例，步骤(1)中，所述正己烷、甲醇与水的体积比为2:1:1。专利技术人经过大量实验得到上述比例关系，在此条件下能够充分溶解奶油或黄油，且使油脂和脱氢乙酸充分分离，即油脂存在于正己烷中，脱氢乙酸存在于甲醇中，从而有效地提取出脱氢乙酸，防止油脂干扰。若正己烷用量较少，将导致无法充分提取油脂，使得甲醇-水层混有部分油脂，造成干扰；若甲醇与水的用量过多，相当于稀释脱氢乙酸，将导致后续液相色谱检测的峰面积过小，容易造成误差。根据本专利技术的另一个实施例，基于2～7g所述样品，步骤(1)中，所述正己烷、甲醇与水的用量分别为10mL、5mL及5mL。由此，根据本专利技术实施例的测定样品中脱氢乙酸的方法能够进一步准确地测定黄油、奶油中脱氢乙酸的含量，且操作快速、简便。根据本专利技术的实施例，采用甲醇-水溶液进行所述定容，其中，所述甲醇-水溶液中甲醇与水的体积比为1:1。由此，根据本专利技术实施例的测定样品中脱氢乙酸的方法能够进一步准确地测定黄油、奶油中脱氢乙酸的含量，且操作快速、简便。根据本专利技术的实施例，所述离心是在5000rpm的转速下进行5min。专利技术人发现，在此条件下离心，能够充分分离正己烷层和甲醇-水层，从而防止油脂等物质干扰。由此，根据本专利技术实施例的测定样品中脱氢乙酸的方法能够进一步准确地测定黄油、奶油中脱氢乙酸的含量，且操作快速、简便。根据本专利技术的实施例，所述氢氧化钠溶液的浓度为0.2mol/L。由此，根据本专利技术实施例的测定样品中脱氢乙酸的方法能够进一步准确地测定黄油、奶油中脱氢乙酸的含量，且操作快速、简便。根据本专利技术的实施例，所述液相色谱法检测条件如下：柱温箱：30～40℃；检测波长：293nm；进样量：20μL；色谱柱：C8，规格为250×4.6mm，5μm；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定样品中脱氢乙酸的方法，其特征在于，包括：1)称取无水奶油或黄油5.0g于50mL离心管中，加入10mL的正己烷、5.0mL 60℃的热水以及5.0mL的甲醇，涡旋混合两分钟，在5000rpm离心约5min，将下层提取液吸入25mL容量瓶中；2)向所述离心管中加入5.0mL甲醇及5.0mL纯水，涡旋两分钟，在5000rpm离心约5min，将下层提取液吸入所述25mL容量瓶中，用0.2mol/L氢氧化钠溶液将所述容量瓶中的溶液pH值调至8.2，然后用甲醇‑水溶液(甲醇与水的体积均为50mL)定容到刻度，摇匀，过0.22μm有机系滤膜，得到待测液；3)利用液相色谱法分别测定脱氢乙酸标准品工作液及所述待测液，将所述标准品工作液的浓度和峰面积绘制标准曲线，并将所述待测液的峰面积代入所述标准曲线中，从而计算得到样品中脱氢乙酸的含量，其中，所述液相色谱法的检测条件如下：柱温箱：30～40℃；紫外检测器：293nm；进样量：20μL；色谱柱：迪马C8，规格为250×4.6mm，5μm；流速：1.0mL/min；流动相：含有10体积％的甲醇和90体积％的0.02mol/L乙酸铵溶液，所述乙酸铵溶液的pH值为7.8，所述流动相的pH值为8.2。...

【技术特征摘要】
1.一种测定样品中脱氢乙酸的方法，其特征在于，包括：1)称取无水奶油或黄油5.0g于50mL离心管中，加入10mL的正己烷、5.0mL60℃的热水以及5.0mL的甲醇，涡旋混合两分钟，在5000rpm离心约5min，将下层提取液吸入25mL容量瓶中；2)向所述离心管中加入5.0mL甲醇及5.0mL纯水，涡旋两分钟，在5000rpm离心约5min，将下层提取液吸入所述25mL容量瓶中，用0.2mol/L氢氧化钠溶液将所述容量瓶中的溶液pH值调至8.2，然后用甲醇-水溶液(甲醇与水的体积均为50mL)定容到刻度，摇匀，过0.22μm有机系滤膜，得到待测液；3)利用液相色谱法分别测定脱氢乙酸标准品工作液及所述待测液，将所述标准品工作液的浓度和峰面积绘制标准曲线，并将所述待测液的峰面积代入所述标准曲线中，从而计算得到样品中脱氢乙酸的含量，其中，所述液相色谱法的检测条件如下：柱温箱：30～40℃；紫外检测器：293nm；进样量：20μL；色谱柱：迪马C8，规格为250×4.6mm，5μm；流速：1.0mL/min；流动相：含有10体积％的甲醇和90体积％的0.02mol/L乙酸铵溶液，所述乙酸铵溶液的pH值为7.8，所述流动相的pH值为8.2。2.一种测定样品中脱氢乙酸的方法，其特征在于，包括：(1)将所述样品、正己烷、水及甲醇进行混合，并将所得到的混合液进行离心，得到具有上、下两层第一分离液的混合液，收集下层第一分离液；(2)将甲醇、水和所述上层第一分离液进行混合，并将所得到的混合液进行离心，得到具有上、下两层第二分离液的混合液，收集下层第二分离液...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁凤琴，王佳，任丽，李红，李秋琴，宿烨，林立民，李照，白鹏，薛志清，常建军，王雅娟，宋晓东，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15