一种右丙亚胺的分析方法技术

本发明专利技术提供了一种右丙亚胺有关物质的高效液相色谱分析方法，该方法采用耐纯水的低密度键合反相C18色谱柱；以流动相A和流动相B作为洗脱液进行梯度洗脱，所述流动相A为缓冲液，所述流动相B为有机溶剂；梯度洗脱的第一阶段中流动相A在洗脱液中的体积百分含量不低于90％，梯度洗脱的第一阶段的时长为15‑30分钟。本分析方法实现了右丙亚胺与主要杂质的有效分离，更好地控制了右丙亚胺原料药及其制剂的产品质量。

【技术实现步骤摘要】
一种右丙亚胺的分析方法
本专利技术属于药物分析
，具体来说，本专利技术涉及一种右丙亚胺有关物质的高效液相色谱分析方法。
技术介绍
右丙亚胺(Dexrazoxane)化学名为(S)-(+)-4,4’-(1-甲基-1,2-乙二基)-双-2,6-哌嗪二酮，其结构式为：右丙亚胺是丙亚胺(razoxane)的右旋异构体，又名右雷佐生、得拉唑沙或ICRF-187，是螯合剂乙二胺四乙酸的亲脂性衍生物，在临床上用作化学保护剂，主要用于预防蒽环类药物诱发的心脏毒性。蒽环类药物引起心脏毒性的机理主要是由于蒽环类药物与铁在形成稳定复合物过程中产生了活性氧，该活性氧对心肌膜发生脂质过氧化反应，损害心肌膜。右丙亚胺作为化疗药物的心脏保护剂，通过捕获自由铁和铁—蒽环类复合物中的铁，减少了对心肌组织产生毒性作用的氧自由基的生成而降低蒽环类药物心脏毒性。右丙亚胺由美国的Chiron公司开发，1992年首先在意大利上市，1995年FDA批准在美国上市。目前，右丙亚胺是临床上唯一用于减轻蒽环类抗肿瘤药物诱发心脏毒性的保护剂。专利WO2007/062076中披露了右丙亚胺有三种主要的降解杂质；专利文献CN201310326280.0公开了一种右丙亚胺冻干组合物杂质与含量的测定方法，其采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(15：85)为流动相。现有色谱分析技术对右丙亚胺原料药或制剂的杂质分离能力很弱，分离度不达标；杂质保留时间过短，无法达到分离目的；杂质检出数量很少，现有技术目前只能检测出3-4个杂质，与实际杂质数量差别很大。本领域亟需一种新的右丙亚胺的分析检测方法，使其能够有效、简便、快速地分析右丙亚胺原料药或其制剂中的有关物质，从而更好地控制产品质量。
技术实现思路
为解决现有技术问题，本专利技术提供了一种新的右丙亚胺的分析方法，该分析方法采用梯度洗脱方式实现了杂质之间以及杂质与主峰之间的有效分离，适用于右丙亚胺原料药及其制剂(如冻干粉针及其他剂型)的有关物质分析。本专利技术主要采用了如下技术方案：一种右丙亚胺有关物质的高效液相色谱分析方法，所述分析方法采用耐纯水的低密度键合反相C18色谱柱；以流动相A和流动相B作为洗脱液进行梯度洗脱，所述流动相A为缓冲液，所述流动相B为有机溶剂；所述梯度洗脱的第一阶段中流动相A在所述洗脱液中的体积百分含量不低于90％，所述梯度洗脱的第一阶段的时长为15～30分钟。优选地，本专利技术中所采用的耐纯水的低密度键合反相C18色谱柱为WatersAtlantisT3或WatersACQUITYHSST3；更优选地，所述耐纯水的低密度键合反相C18色谱柱为WatersAtlantisT3；进一步优选地，所述WatersAtlantisT3色谱柱的规格为内径4.6mm，长度250mm，填料粒径5μm。本专利技术的分析方法采用梯度方式以流动相A和流动相B作为洗脱液进行洗脱，所述流动相A为缓冲液，所述流动相B为有机溶剂。优选地，所述缓冲液为选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸氢二铵或磷酸二氢铵的缓冲盐溶液；更优选地，所述缓冲液为磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液，进一步优选地，所述缓冲液为磷酸二氢钾溶液。优选地，所述缓冲液的浓度为1～50mmol/L，pH值为1～6；更优选地，所述缓冲液的浓度为5～15mmol/L，pH值为3.5～5.5；进一步优选地，所述缓冲液的浓度为8～12mmol/L，pH值为4.5～5。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述缓冲液为10mmol/L、pH4.5～5的磷酸二氢钾溶液。优选地，所述有机溶剂选自甲醇、乙腈或异丙醇；更优选地，所述有机溶剂为甲醇或乙腈；进一步优选地，所述有机溶剂为甲醇。优选地，所述梯度洗脱的第一阶段中流动相A在所述洗脱液中的体积百分含量不低于95％，所述梯度洗脱的第一阶段的时长为15～20分钟。更优选地，所述梯度洗脱的第一阶段中流动相A在所述洗脱液中的体积百分含量不低于98％，所述梯度洗脱的第一阶段的时长为15～18分钟。在梯度洗脱的第一阶段，右丙亚胺三种主要降解杂质依次被洗脱出峰。本专利技术中的“第一阶段”是指梯度洗脱开始后的一段时间，例如从时间点0分钟至15分钟，从时间点0分钟到20分钟，从时间点0分钟到30分钟等。第一阶段的时长通常为15～30分钟，优选为15～20分钟。在本专利技术的一个具体实施方案中，第一阶段的时长为15分钟。优选地，所述梯度洗脱的条件具体为：其中10≤n≤90；优选地，50≤n≤80；进一步优选地，60≤n≤80。在本专利技术的一个具体实施方案中，n＝70，亦即所述梯度洗脱的条件如下：优选地，在本专利技术的分析方法中，还具有如下任选的色谱条件：流动相流速为0.6～1.5ml/min，更优选为0.8～1.2ml/min，和/或色谱柱温度为5～20℃，优选为10～20℃，和/或检测器采用紫外检测器，检测波长为200～220nm，优选为203～213nm。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述流动相流速为1.0ml/min；色谱柱温度为15℃；检测波长为208nm。本领域技术人员应知晓的是，除上述紫外检测器外，本专利技术的分析方法还可以灵活选用常用的其他类型高效液相色谱检测器，如荧光检测器、电化学检测器、示差检测器、蒸发光散射检测器、电导检测器、质谱检测器、电雾式检测器等。本专利技术的分析方法包括供试品溶液的制备、对照溶液的制备、系统适用性试验溶液的制备以及检测四个步骤。所述供试品溶液的制备包括：取右丙亚胺或含右丙亚胺的相关制剂适量，用稀释液配制成浓度为每1ml含0.5～2mg右丙亚胺的溶液，作为供试品溶液；所述对照溶液的制备包括：取供试品溶液，用稀释液稀释至100倍体积，作为对照溶液；所述系统适用性试验溶液的制备包括：取右丙亚胺或含右丙亚胺的相关制剂、杂质I对照品、杂质II对照品、杂质III对照品适量，加稀释液溶解并稀释制成每1ml含右丙亚胺0.5～2mg、杂质各5～20μg的溶液，作为系统适用性试验溶液；所述检测步骤包括：取系统适用性试验溶液10～20μl，注入液相色谱仪，右丙亚胺峰与相邻各杂质峰的分离度应符合要求；取对照溶液10～20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10～20％；精密量取供试品溶液10～20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；其中所述稀释液为盐酸溶液，各杂质的化学结构如下所示：优选地，本专利技术的分析方法包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备：取右丙亚胺或含右丙亚胺的相关制剂适量，用盐酸溶液配制成浓度为每1ml含0.8～1.1mg右丙亚胺的溶液，作为供试品溶液；(2)对照溶液的制备：精密量取上述(1)制备的供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用(1)中所述盐酸溶液稀释至刻度，作为对照溶液；(3)系统适用性试验溶液的制备：取右丙亚胺或含右丙亚胺的相关制剂、杂质I对照品、杂质II对照品、杂质III对照品适量，加(1)中所述盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml含右丙亚胺0.8～1.1mg、杂质各8～12μg的溶液，作为系统适用性试验溶液；(4)检测：取系统适用性试验溶液10μl，注入液相色谱仪，右丙亚胺峰与相邻各杂质峰的分离度应符合要求；取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种右丙亚胺有关物质的高效液相色谱分析方法，其特征在于，采用耐纯水的低密度键合反相C18色谱柱；以流动相A和流动相B作为洗脱液进行梯度洗脱，所述流动相A为缓冲液，所述流动相B为有机溶剂；所述梯度洗脱的第一阶段中流动相A在所述洗脱液中的体积百分含量不低于90％，所述梯度洗脱的第一阶段的时长为15～30分钟。

【技术特征摘要】
1.一种右丙亚胺有关物质的高效液相色谱分析方法，其特征在于，采用耐纯水的低密度键合反相C18色谱柱；以流动相A和流动相B作为洗脱液进行梯度洗脱，所述流动相A为缓冲液，所述流动相B为有机溶剂；所述梯度洗脱的第一阶段中流动相A在所述洗脱液中的体积百分含量不低于90％，所述梯度洗脱的第一阶段的时长为15～30分钟。2.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述耐纯水的低密度键合反相C18色谱柱为WatersAtlantisT3或WatersACQUITYHSST3；优选地，所述耐纯水的低密度键合反相C18色谱柱为WatersAtlantisT3。3.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述缓冲液为选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸氢二铵或磷酸二氢铵的1～50mmol/L、pH1～6的缓冲盐溶液；所述有机溶剂选自甲醇、乙腈或异丙醇；优选地，所述缓冲液为5～15mmol/L、pH3.5～5.5的磷酸二氢钾溶液，所述有机溶剂为甲醇或乙腈；更优选地，所述缓冲液为8～12mmol/L、pH4.5～5的磷酸二氢钾溶液，所述有机溶剂为甲醇。4.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱的第一阶段中流动相A在所述洗脱液中的体积百分含量不低于95％，所述梯度洗脱的第一阶段的时长为15～20分钟。5.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱的条件具体为：其中10≤n≤90；优选地，50≤n≤80；进一步优选地，60≤n≤80。6.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述分析方法有如下任选的色谱条件：流动相流速为0.6～1.5ml/min，和/或色谱柱温度为5～20℃，和/或检测器采用紫外检测器，检测波长为200～220nm。7.如权利要求6所述的分析方法，其特征在于，所述流动相流速为0.8～1.2ml/min；色谱柱温度为10～20℃；检测波长为203～213nm。8.如权利要求1至7中任一项所述的分析方法，其特征在于，所述分析方法包括供试品溶液的制备、对照溶液的制备、系统适用性试验溶液的制备以及检测四个步骤，所述供试品溶液的制备包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈祥峰，陈虹宇，田帅华，孙敏，范昌俊，
申请(专利权)人：江苏奥赛康药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32