鼠尾草酸在制备抗肝纤维化药物中的应用及该药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及鼠尾草酸在制备抗肝纤维化药物中的应用及该药物组合物，属于天然药物领域。该发明专利技术发现从鼠尾草酸在抗肝纤维化方面效果显著，鼠尾草酸抑制肝星状细胞增殖和活化，尤其是可作为治疗TAA诱导的肝纤维化的药物。本发明专利技术的鼠尾草酸在治疗肝纤维化疾病药物中具有重要作用。

Application of oxalic acid in preparation of anti hepatic fibrosis drug and its pharmaceutical composition

The invention relates to the application of oxalic acid in the preparation of anti hepatic fibrosis drugs and the pharmaceutical composition, belonging to the field of natural medicine. The invention has found that the effect of oxalic acid on liver fibrosis is significant. The oxalic acid inhibits the proliferation and activation of hepatic stellate cells, especially as a drug for the treatment of liver fibrosis induced by TAA. The oxalic acid of the invention plays an important role in the treatment of liver fibrosis diseases.

【技术实现步骤摘要】
鼠尾草酸在制备抗肝纤维化药物中的应用及该药物组合物
本专利技术涉及鼠尾草酸的应用，尤其是鼠尾草酸在制备抗肝纤维化药物中的应用，还涉及该药物组合物，属于天然药物领域。
技术介绍
肝纤维化（HF）是指肝脏组织和细胞发生变性、坏死及各种炎症刺激时，肝细胞、内皮细胞、库普弗细胞及血小板等通过旁分泌作用激活肝星状细胞（HSC），使肝星状细胞转变为肌成纤维细胞，激活后的肌成纤维细胞通过细胞增殖，合成大量的细胞外基质（ECM），导致肝脏细胞中胶原等细胞外基质的沉积与降解失去平衡，从而使肝组织外基质性纤维异常沉积的病理过程。肝纤维化是多种慢性肝损伤发展至肝硬化的中间病理过程，HSC的激活、增殖和ECM的过渡分泌与沉积是肝纤维化的主要特征。因此，抑制HSC的活化增殖是防治肝纤维化的重要靶点。肝纤维化是慢性肝病向肝硬化发生发展的必经病理阶段，是一个可逆的病理过程，而当肝纤维化发展至肝硬化时，病程一般就无法逆转。因此，研究如何在肝纤维化阶段的药物干预以及阻断发展，是治疗各种病因导致的肝硬化之关键。鼠尾草酸（Carnosicacid，CA）属于松香烷型三环二萜类化合物，外观为无色至淡黄色粉末晶体，易溶于油脂而不溶于水，主要存在于迷迭香、三叶鼠尾草、南欧丹参等植物中，是这些植物中主要的天然抗氧化成分，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤、神经保护等多种生物活性，这样的化合物是否还有其他价值十分值得探索。
技术实现思路
为了寻找对肝纤维化具有显著疗效的新药物，为肝纤维化疾病的治疗提供新的选择，我们发现鼠尾草酸有这方面的价值，进而第一目的提供鼠尾草酸在制备抗肝纤维化药物中的应用，第二目的在于提供该药物组合物。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术提供鼠尾草酸在制备抗肝纤维化药物中的应用。进一步地，所述药物是由药物活性成分鼠尾草酸和药学上可接受的辅料组成的药物组合物。进一步地，所述药物可采用医学领域常规的方法，将鼠尾草酸作为活性成分，与药学上可接受的辅料制成药物制剂，所述的药物制剂中，活性成分的重量含量为0.1%-99.9%。进一步地，所述鼠尾草酸从迷迭香中提取。进一步地，抗肝纤维化药物为治疗TAA诱导的肝纤维化的药物，鼠尾草酸抑制肝星状细胞增殖和活化。本专利技术提供一种抗肝纤维化药物组合物，包括重量含量为0.1%-99.9%活性成分鼠尾草酸和药物上可接受的辅料。本专利技术的有益效果如下：该专利技术发现从迷迭香中提取的化合物鼠尾草酸在抗肝纤维化方面效果显著，鼠尾草酸抑制肝星状细胞增殖和活化，尤其是可作为治疗TAA诱导的肝纤维化的药物。本专利技术的鼠尾草酸在治疗肝纤维化疾病药物中具有重要作用。附图说明图1为鼠尾草酸的结构式及碳原子编号。图2为masson染色检测鼠尾草酸对大鼠肝纤维化程度的组织观察，其中图2（a）为40倍放大，图2（b）为100倍放大；图2（a）和图2（b）中，A表示空白组、B表示模型组、C表示阳性组、D表示CA-高剂量组、E表示CA-中剂量组、F表示CA-低剂量组。图3为免疫组化检测鼠尾草酸对肝纤维化大鼠肝脏TGF-β1蛋白表达的影响；其中，A表示空白组、B表示模型组、C表示阳性组、D表示CA-高剂量组、E表示CA-中剂量组、F表示CA-低剂量组。图4为鼠尾草酸对HSC-T6细胞TGF-β1和α-SMA蛋白表达的影响；其中A表示空白组、B表示CA（200μM）、C表示CA（100μM）、D表示CA（50μM）。具体实施方式下面用本专利技术的实施例来进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此来限定本专利技术。实施例1鼠尾草酸对TAA诱导的大鼠肝纤维化保护作用1仪器与材料1.1仪器光学显微镜、切片机、EG1160包埋机（德国Leica公司）；Synergy2多功能酶标仪，美国BIOTEK公司；Centrifuge5804R冷冻离心机，德国Eppendorf公司；CHB-100恒温金属浴，杭州博日科技有限公司。1.2材料鼠尾草酸（纯度95%，自提）结构如图1所示；鳖甲煎丸（购于国药集团中联药业有限公司，批准文号：国药准字Z42020772SD）；大鼠（购于昆明医科大学实验动物中心）；谷丙转氨酶（ALT/GPT）、谷草转氨酶（AST/GOT）、碱性磷酸酶（AKP）、羟脯氨酸（HYP）检测试盒均购自于南京建成生物工程有限公司；LN、HA、IV-C、HPCIII、α-SMAELISA试剂盒购于武汉华美生物工程有限公司；PDGF、TGF-β1兔抗一抗和兔抗二抗购于武汉华美生物工程有限公司；Masson染色液购于南京森贝伽生物科技有限公司，硫代乙酰胺（TAA）购自美国sigma公司。2方法2.1鼠尾草酸的提取及纯化鼠尾草酸从迷迭香叶中提取分离得到：称取干燥的迷迭香叶500g，加入5L乙酸乙酯，反复超声提取。减压除去溶剂，得迷迭香浸膏78g。将78g浸膏用石油醚脱脂后，用乙酸乙酯/5%NaHCO3溶液反复萃取，重结晶，得到鼠尾草酸粗提物。鼠尾草酸粗提物经硅胶柱（石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂）纯化，得到鼠尾草酸（7.3g，1.45%）淡黄色粉末。波谱数据与现有文献报道一致。2.2动物分组及处理选用SD大鼠，6周龄，60只，雄性，体重180-200g，随机分为空白组、模型组、阳性组（鳖甲煎丸，1g/kg·d）、鼠尾草酸高剂量组（0.2g/kg·d）、鼠尾草酸中剂量组（0.1g/kg·d）、鼠尾草酸低剂量组（0.05g/kg·d）。每组10只，共6组。除空白组外均给予腹腔注射硫代乙酰胺（TAA，160mg/kg）诱导大鼠肝纤维化模型，空白组注射等量的生理盐水作为对照，隔天注射1次，造模时间为6周。造模开始2周后按剂量灌胃给药，空白组和模型组大鼠灌胃等量的溶媒作为对照，共给药4周。2.3动物实验取材于末次灌胃24小时后，大鼠称重，用水合氯醛（生理盐水配制成4%浓度，大鼠每100g大鼠注射1ml）轻度麻醉大鼠，后将其脱颈处死，眼眶取血，室温放置20min，10000rpm离心20min，分离血清保存。取肝脏称重，计算肝脏指数，肝脏指数=肝脏重量/体重x100%。肝脏取同部位1.0cm×1.0cm×1.0cm组织1块，用4%甲醛固定，其余肝脏组织保存于-80℃待用。2.4相关指标检测全自动分析法检测肝功：给药结束后检测大鼠血清中碱性磷酸酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）含量。肝纤维化指标检测：酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清中血清透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）、IV型胶原（IV-C）、III型前胶原（PC-III）的含量；酸水解法检测肝脏组织羟脯氨酸（HYP）含量。肝脏纤维化组织观察：将肝脏切片进行Masson染色，观察肝脏纤维化程度，用ipp6.0软件分析肝纤维化面积比。纤维化面积比=纤维化面积/总面积x100%。肝脏组织TGFβ1和α-SMA蛋白表达检测：免疫组化SABC法检测ipp6.0软件进行光密度分析，检测肝脏组织TGFβ1（转化生长因子-β1）的表达变化。ELISA法检测肝脏组织α-SMA表达变化。3结果及分析3.1鼠尾草酸对肝脏指数的影响肝纤维化大鼠模型给药结束后，计算肝脏指数。结果见表1。表1.鼠尾草酸对TAA肝纤维化大鼠模型肝脏指数的影响注：与空白组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较#P＜0.05本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鼠尾草酸在制备抗肝纤维化药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.鼠尾草酸在制备抗肝纤维化药物中的应用。2.根据权利要求1所述的鼠尾草酸在制备抗肝纤维化药物中的应用，其特征在于：所述药物是由药物活性成分鼠尾草酸和药学上可接受的辅料组成的药物组合物。3.根据权利要求1或2所述的鼠尾草酸在制备抗肝纤维化药物中的应用，其特征在于：所述药物可采用医学领域常规的方法，将鼠尾草酸作为活性成分，与药学上可接受的辅料制成药物制剂，所述的药物制剂中，活性成分的重量含量为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：张荣平，张志毕，于浩飞，胡炜彦，张兰春，
申请(专利权)人：昆明医科大学，
类型：发明
国别省市：云南,53