一种荔枝核颗粒HPLC指纹图谱的建立方法技术

本发明专利技术提出了一种荔枝核颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，包括供试品的制备、色谱条件的确定，使用高效液相色谱仪进行测定，得到荔枝核颗粒的HPLC指纹图谱，全面准确的表达了荔枝核颗粒的化学信息，该指纹图谱有共有峰的分离度及峰型较好、重复性好、可操作性强等特点，能够有效地控制荔枝核颗粒的质量。 1

【技术实现步骤摘要】
一种荔枝核颗粒HPLC指纹图谱的建立方法
本专利技术涉及中药制剂质量控制领域，具体涉及一种荔枝核颗粒HPLC指纹图谱的建立方法。
技术介绍
荔枝核为无患子科植物荔枝的干燥成熟种子。其味甘、微苦，性温。归肝、肾经，具有行气散结、祛寒止痛的功能，用于寒疝腹痛，睾丸肿痛。根据研究，荔枝核的主要化学成分为荔枝核皂苷、黄酮类、挥发油、有机酸及酯、氨基酸、糖类及微量元素等。虽然现今中药的正在快速发展，但仍有大部分中药的有效成分没有明确。现行的荔枝核颗粒的质量控制标准已不能真实反映荔枝核颗粒的内在品质及批与批之间产品质量的一致性。因此，针对荔枝核颗粒目前存在的不足，本专利技术以HPLC梯度洗脱法对荔枝核颗粒指纹图谱进行研究，选用不同批次的荔枝核颗粒完成指纹图谱适用性检验，所建立的指纹图谱能较全面地体现荔枝核颗粒的整体化学信息；建立的荔枝核颗粒HPLC指纹图谱中各化学成分共有峰的分离度及峰型较好，且重复性好，可操作性强，为荔枝核颗粒提供了一种全新的、普遍适用、方便易行的质量控制方法。
技术实现思路
本专利技术目的为荔枝核颗粒HPLC指纹图谱提供一种组建方法，以及由此方法所得到的指纹图谱。本专利技术的荔枝核颗粒HPLC指纹图谱建立方法如下：一种荔枝核颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：称取荔枝核颗粒适量，研细，精密称定取约0.2g～1.0g，加水溶解，沸水浴加热处理10～20min后，冷却、离心，取上清并用微孔滤膜过滤后，制得供试品溶液；(2)对照溶液的制备：精密称取荔枝核对照药材0.2～1.0g，加水溶解，沸水浴加热处理10～20min后，冷却、离心，取上清并用微孔滤膜过滤后，制得参比对照溶液；(3)测定：分别精密吸取供试品溶液和参比对照溶液各10～20μL，注入液相色谱仪，依照高效液相色谱法进行测定，记录30分钟内的色谱图，用指纹图谱软件进行处理，得到荔枝核颗粒的指纹图谱。色谱条件：色谱柱HypersilTMODSC18，流动相A为甲醇；流动相B为0.5～1.0％的磷酸水溶液；检测波长：240～280nm；柱温：20-30℃；流速：1.0～1.5mL·min－1；洗脱程序为梯度洗脱程序。梯度洗脱程序中流动相A与流动相B的体积比随时间的关系为：0min：5％:95％；6min：10％:90％；12min：30％:70％；18min：50％:50％；24min：70％:30％；30min：100％:0％。作为本专利技术进一步的改进，色谱柱的规格为100mm×4.6mm，5μm，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶作为本专利技术进一步的改进，十八烷基硅烷键合硅胶的孔径为作为本专利技术进一步的改进，检测波长：260nm；柱温：32℃；流速：1.2mL·min－1。作为本专利技术进一步的改进，微孔滤膜为0.45μm。作为本专利技术进一步的改进，离心是在2000～40000r/min下，处理5～10min本专利技术采用上述方法建立的荔枝核颗粒HPLC指纹图谱中共有10个特征共有峰。本专利技术具有如下有益效果：1、本专利技术提供了一种荔枝核颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，建立的指纹图谱可以全面的体现荔枝核颗粒的整体化学信息；2、本专利技术建立的指纹图谱中化学成分共有峰分离度及峰型好，该指纹图谱的重复性好，可操作性强，可用于评价和控制荔枝核颗粒的质量，确保荔枝核颗粒的安全性和有效性。附图说明图1为10批不同批次荔枝核颗粒指纹图谱叠加图。图2为荔枝核对照药材水溶物的指纹图谱色谱图。具体实施方式实施例1仪器：安捷伦高效液相色谱仪。药材：广西合浦果香园食品有限公司提供的荔枝核颗粒；对照药材荔枝核购于广西玉林鑫康药材有限公司。试剂：流动相A甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。供试品溶液制备：称取荔枝核颗粒适量，研细，精密称定取约1.0g，加水溶解，沸水浴加热处理20min后，冷却、离心，取上清并用微孔滤膜过滤后，制得供试品溶液。对照品溶液制备：精密称取荔枝核对照药材1.0g，加水溶解，沸水浴加热处理20min后，冷却、离心，取上清并用微孔滤膜过滤后，制得参比对照溶液。高效液相色谱条件：色谱柱HypersilTMODSC18(100mm×4.6mm，5μm)，流动相A为甲醇；流动相B为0.5～1.0％的磷酸水溶液；检测波长：240～280nm；柱温：20-30℃；流速：1.0～1.5mL·min－1；洗脱程序为梯度洗脱程序。梯度洗脱程序的体积比浓度为：时间(min)甲醇(％)0.7％磷酸水溶液(％)059561090123070185050247030301000线性关系考察：分别精密吸取供试品溶液(0.04048g·mL-1)0、2、4、6、8、10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以第10个峰的峰面积(Y)为纵坐标，以供试品溶液的进样量(X，μg)为横坐标绘制标准曲线，求得回归方程:Y＝4.7752X+2.1127，r＝0.9997，表明荔枝核颗粒溶液进样量在0～404.8μg与峰面积呈良好的线性关系。精密度试验：精密吸取供试品溶液(0.04048g·mL-1)10μL，按上述色谱条件连续进样5次，结果表明，5个图谱主要色谱峰保留时间的相对标准偏差(RSD)在0.12％～0.30％之间，峰面积的RSD值在2.7％以内，5次连续进样所得液相色谱图中主要峰的保留时间与峰面积的精密度较高，证明仪器的精密度良好表明仪器精密度良好。稳定性试验：取同一批次的供试品溶液(0.04048g·mL-1)，分别于制备后0、4、8、l2、24h进行HPLC检测得到相应的色谱图，通过中药指纹图谱相似度评价系统进行分析。结果表明，5个图谱主要色谱峰保留时间的RSD值在0.12％～0.27％之间，峰面积的RSD值在3.0％以内，试验所得液相色谱图中主要峰的保留时间与峰面积的精密度较高，证明在24h内样品溶液的稳定性良好。重复性试验：取同一批次的供试品溶液(0.04048g·mL-1)进行HPLC检测得到相应的色谱图，通过中药指纹图谱相似度评价系统进行分析。结果表明，5个图谱主要色谱峰保留时间的RSD值在0.15％～0.32％之间，峰面积的RSD值在3.0％以内，试验所得液相色谱图中主要峰的保留时间与峰面积的精密度较高，证明本方法测定的重复性良好。加样回收试验：取同一批号的荔枝核颗粒适量，研细，取约0.20g，平行6份，精密称定，分别精密加入已配好的供试品溶液(0.04048g·mL-1)5mL，按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，按上述色谱条件测定第十个峰的面积，计算回收率，结果如下表1：表1荔枝核颗粒回收率试验测定结果：按上述方法，通过对10批不同批次的荔枝核颗粒建立HPLC指纹图谱并进行分析比较，找出其共有特征峰(共10个峰)，得到荔枝核颗粒的指纹图谱，10个共有峰的保留时间分别是：5.0分钟、5.5分钟、6.2分钟、6.7分钟、7.3分钟、8.0分钟、9.6分钟、9.8分钟、10.7分钟、24.8分钟。本领域的技术人员在不脱离权利要求书确定的本专利技术的精神和范围的条件下，还可以对以上内容进行各种各样的修改。因此本专利技术的范围并不仅限于以上的说明，而是由权利要求书的范围来确定的。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种荔枝核颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

【技术特征摘要】
1.一种荔枝核颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：称取荔枝核颗粒适量，研细，精密称定取约0.2g～1.0g，加水溶解，沸水浴加热处理10～20min后，冷却、离心，取上清并用微孔滤膜过滤后，制得供试品溶液；(2)对照溶液的制备：精密称取荔枝核对照药材0.2～1.0g，加水溶解，沸水浴加热处理10～20min后，冷却、离心，取上清并用微孔滤膜过滤后，制得参比对照溶液；(3)测定：分别精密吸取供试品溶液和参比对照溶液各10～20μL，注入液相色谱仪，依照高效液相色谱法进行测定，记录30分钟内的色谱图，用指纹图谱软件进行处理，得到荔枝核颗粒的指纹图谱。2.如权利要求1所述荔枝核颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，高效液相色谱条件为：色谱柱HypersilTMODSC18，流动相A为甲醇；流动相B为0.5～1.0％的磷酸水溶液；检测波长：240～280nm；柱温：20-30℃；流速：1.0～1.5mL·min－1；洗脱程序为梯度洗脱程序。3.如权利要求2所述荔枝核颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述色谱柱...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵立春，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：广西,45