一种免疫增强剂及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种免疫增强剂及含该免疫增强剂的猪口蹄疫疫苗组合物与应用。所述免疫增强剂包括三条猪口蹄疫病毒CTL表位多肽，即为序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽中的一种或两种以上任意组合。所述猪口蹄疫疫苗组合物包含免疫增强剂和猪口蹄疫抗原。所本发明专利技术的免疫增强剂可通过固相化学合成方法进行大量制备，与灭活抗原以一定比例混合，便于规模化的生产制备疫苗组合物，该疫苗组合物既可诱导机体产生体液免疫应答水平，也可增强机体的细胞免疫应答水平，且可获得较好的免疫效果。本发明专利技术的免疫增强剂安全、可靠，具有广阔的应用前景。

An immunoenhancer and its application

The invention provides an immunoenhancer and a pig foot and mouth disease vaccine composition containing the immunoenhancer and application. The immune enhancer includes three CTL epitopes of the pig foot-and-mouth disease virus, that is, a polypeptide shown in sequence 1, one of the peptides in sequence 2 in sequence table and one or more arbitrary combinations of the polypeptide shown in sequence 3 in sequence table. The pig foot and mouth disease vaccine composition comprises an immunoenhancer and a Swine Foot and mouth disease antigen. The immunoenhancer of the present invention can be prepared in a large amount by a solid phase chemical synthesis method, mixed with inactivated antigen in a certain proportion and facilitates the preparation of the vaccine composition for large-scale production. The vaccine composition can induce both the body humoral immune response level and the cellular immune response level of the body, and can be obtained. Better immune effect. The immunoenhancer of the invention is safe and reliable, and has broad application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种免疫增强剂及其应用
本专利技术属于兽用生物制品
，具体地说，本专利技术涉及一种免疫增强剂及含该免疫增强剂的猪口蹄疫疫苗组合物与应用。
技术介绍
口蹄疫(FootandMouthDisease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-MouthDiseasevirus，FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄动物发生的一种急性、热性、高度接触传染性和快速远距离传播的烈性传染病，以传染性强、疾病传播速度快、危害严重而著称，该病的暴发流行给发表地区的畜牧业造成巨大的经济损失(常慧云，2017)。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须通报的多种动物共患传染病之一，我国将其列为一类动物传染病。口蹄疫传染性高，传播迅速，感染猪、牛、羊等牲畜后常导致幼畜的死亡，成年动物感染后生长能力急剧下降。该病传播速度迅速，可以引起世界性的大流行，不仅对畜牧业造成巨大的经济损失，而且严重的影响动物及其畜产品的国际贸易和声誉。FMDV属于小RNA病毒科，为单股正链RNA病毒，因其基因组具有高度的变异性，导致FMDV不断进化产生新的病毒亚型，给FMD的防控与净化带来了困难。FMD是关系到国家经济安全的重大动物疫病。目前，大多数发展中国家和地区都通过接种灭活疫苗的方法来控制FMD的流行，而传统的灭活疫苗主要诱导机体产生体液免疫应答，缺少细胞免疫应答。此外，随着抗原纯化技术的不断革新，FMD亚单位疫苗、病毒样颗粒(VLP)疫苗以及合成肽疫苗等新型疫苗的将大量出现，疫苗的安全性虽然得到了提高，但其免疫原性往往不理想，缺乏均衡的体液免疫应答和细胞免疫应答，因此需要开发更为安全高效的免疫增强剂以提高疫苗的细胞免疫应答水平。抗原表位是指抗原可与T细胞受体、B细胞受体或抗原结合片段发生特异性的结合，具有特殊结构和免疫活性的化学基团，是引起免疫应答的物质基础。相比于FMD的B细胞表位、Th细胞表位，目前对于细胞毒性T细胞CTL表位的研究还较少，有研究证实FMDV特异性的CTL表位可诱导机体产生细胞性免疫应答，因此开发CTL表位的免疫增强剂对于细胞介导的抗FMDV免疫具有重要的应用意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种免疫增强剂，以及含该免疫增强剂的猪口蹄疫疫苗组合物与应用。该猪口蹄疫疫苗组合物既能诱导机体产生体液免疫应答，又能增强机体产生细胞免疫应答，能获得较好的免疫效果。本专利技术提供的免疫增强剂，由序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽中的一种或两种以上任意组合的多肽组合物组成。当所述免疫增强剂由序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽中的两种组成时，它们的重量分数比为0.5-1：0.5-1；当所述免疫增强剂由序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽组成时；所述序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽或序列表中序列3所示的多肽的重量份数比为0.5-1：0.5-1：0.5-1。优选地，所述序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽或序列表中序列3所示的多肽的重量份数比为1：1：1。其中，序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽或序列表中序列3所示的多肽，是用于免疫增强的多肽，也属于本专利技术的保护范围。本专利技术提供的猪口蹄疫疫苗组合物，包括上述免疫增强剂。具体的，所述疫苗组合物包含：(1)上述免疫增强剂，和，(2)猪口蹄疫抗原。其中，所述疫苗组合物为免疫增强剂与猪口蹄疫疫苗的混合物。所述猪口蹄疫抗原为猪口蹄疫灭活抗原、猪口蹄疫病毒样颗粒抗原、猪口蹄疫亚单位抗原或猪口蹄疫多肽抗原；其中，猪口蹄疫灭活抗原选自猪口蹄疫O型和A型疫苗毒株。优选地，所述猪FMDV灭活抗原选自猪O/Mya98/XJ/2010株、O/GX/09-7株、AF/72株、A/QH/09株中一种或两种以上任意组合的灭活病毒抗原，最优选为O/Mya98/XJ/2010株。制备猪口蹄疫疫苗组合物时，将所述免疫增强剂与猪FMDV灭活抗原在缓冲液体系中进行孵育混合，缓冲液体系优选为含50mMNaCl的20mMTris-HCl(pH8.0)溶液，所述孵育条件，优选为4℃孵育过夜。优选地，所述猪口蹄疫疫苗组合物中，免疫增强剂和猪口蹄疫抗原的重量份数比可根据抗原种类、免疫剂量等确定，重量分数比具体可以为0.1-10：1、优选1-5：1。在本专利技术的一个实施方式中，当抗原选择猪口蹄疫灭活抗原时，免疫增强剂与猪口蹄疫的重量分数比为3：1。进一步的，所述猪口蹄疫疫苗组合物还包括兽医学上可接受的佐剂，本专利技术的另一目的在于提供一种猪口蹄疫疫苗组合物，包括所述免疫增强剂、猪口蹄疫抗原以及兽医学上可接受的佐剂。本专利技术的猪口蹄疫组合物的免疫剂量可根据免疫猪的主要受被免疫动物的物种、品系、年龄、体重、健康状态等确定，比如，可以为1-300ug猪口蹄疫组合物/头份；如当上述的猪口蹄疫抗原为猪口蹄疫灭活抗原时，可根据灭活抗原的种类设置免疫剂量1-200ug猪口蹄疫抗原/头份猪。在本专利技术的一个实施例中，猪口蹄疫灭活抗原为O/Mya98/XJ/2010株灭活抗原，猪口蹄疫组合物中猪FMDV灭活抗原的免疫剂量为10ug/头份，免疫增强剂的免疫剂量为30μg/头份。本专利技术所用术语“猪口蹄疫疫苗组合物”是指可用于预防由猪FMDV感染所知症状或疾病的疫苗，该疫苗组合物可包括任何能够用于预防猪来自猪FMDV感染的疫苗。本专利技术所述术语“免疫量”是指针对猪FMD疫苗组合物的免疫剂量，免疫剂量的大小主要受被免疫动物的物种、品系、年龄、体重、健康状态以及该动物之前是否已免疫过相同毒株的疫苗等因素影响。本专利技术所述术语“佐剂”可包括油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂、铝胶佐剂、皂苷或Gel佐剂中的一种或几种；优选地，所述佐剂为MontanideISA206佐剂。所述佐剂与所述免疫增强剂和猪口蹄疫灭活抗原混合物的体积比为1:1。本专利技术的免疫增强剂可通过固相化学合成方法进行大量制备，与灭活抗原以一定比例混合，便于规模化的生产，既可诱导机体产生体液免疫应答水平，也可增强机体的细胞免疫应答水平，且可获得较好的免疫效果。安全、可靠，具有更为广阔的应用前景。附图说明图1.免疫后第14天IFN-γ的ELISPOT试验结果图2.免疫后第21天IFN-γ的ELISPOT试验结果图3.免疫后第14天IFN-γ的ELISPOT试验结果图4.免疫后第21天IFN-γ的ELISPOT试验结果具体实施方式以下参照具体的实施例来说明本专利技术。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本专利技术，其不以任何方式限制本专利技术的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。本专利技术所用术语“CTL表位多肽”是指细胞毒性T细胞表位多肽(CytotoxicTLymphocytesepitope，简称CTL表位多肽)，靶抗原经抗原递呈细胞处理以“抗原肽-MHC-I类分子”复合物的形式呈现至抗原递呈细胞或靶细胞表面后可被CD8+T细胞识别，相应的与MHC-I类分子结合的抗原肽即为CTL表位多肽。CTL表位多肽能够激活诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL细胞)，诱导机体产本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于免疫增强的多肽，为序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽或序列表中序列3所示的多肽。

【技术特征摘要】
1.一种用于免疫增强的多肽，为序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽或序列表中序列3所示的多肽。2.一种免疫增强剂，由序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽中的一种或两种以上任意组合的多肽组合物组成。3.根据权利要求2所述的免疫增强剂，其特征在于，当所述免疫增强剂由序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽中的两种组成，它们的重量分数比为0.5-1：0.5-1；当所述免疫增强剂由序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽组成；所述序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽或序列表中序列3所示的多肽的重量份数比为0.5-1：0.5-1：0.5-1。4.根据权利要求3所述的免疫增强剂，其特征在于，所述序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽的重量份数比为1：1：1。5.权利要求2-4中任意一项所述的免疫增强剂在制备猪口蹄疫疫苗组合物中的应用。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：肖进，王振豹，巴利民，张欣，王楠，董春娜，张蕾，赵洪涛，张艳宾，
申请(专利权)人：中牧实业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11