用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒及将使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱再生的方法技术

本发明专利技术公开了用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒及将使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱再生的方法。该试剂盒包括：清洗液；以及保存液，其中，所述清洗液包含：9‑11mM的PBS缓冲液；3‑6mol/L的尿素；以及0.05‑0.1质量％的去垢剂，所述保存液包含：9‑11mM的PBS缓冲液；以及0.05‑0.1质量％的叠氮化钠。利用该试剂盒进行葡聚糖凝胶脱盐柱再生，能够完全去除葡聚糖凝胶脱盐柱残留杂质且不影响其再分离蛋白能力。

Reagent kit for dextran gel desalination column regeneration and method for regeneration of used desalted gel desalination column

The invention discloses a kit for dextran gel desalination column regeneration and a method for regeneration of the used dextran gel desalination column. The kit includes: cleaning solution; and preservative, in which the cleaning solution includes: 9 11mM PBS buffer; 3 urea 6mol/L; and 0.05% of 0.1% descaling agent; the preservative contains 9 11mM PBS buffer; and 0.05 sodium azide of 0.1 mass%. The kit can be used for regeneration of dextran gel desalination column, which can completely remove residual impurities in the desalting column and do not affect the ability of protein separation.

【技术实现步骤摘要】
用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒及将使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱再生的方法
本专利技术属于生物
，具体而言，涉及葡聚糖凝胶脱盐柱再生方法。
技术介绍
蛋白的分离纯化是现代分子生物学的重要组成部分，是其下游各种实验过程，如酶联免疫、免疫荧光、免疫比浊、免疫组化、Western等的起点。蛋白质量的好坏直接决定了后续实验的成败。蛋白分离纯化方法之一是葡聚糖凝胶柱层析法，其原理是利用大分子不能进入凝胶颗粒内部最先流出柱外，而小分子物质进入凝胶颗粒内部，流速慢而最后流出柱外，因此能将不同分子大小的物质分离开。然而，该分离方法的一个突出缺点在于脱盐柱中的小分子荧光素和蛋白质难以完全洗脱，残留的杂质为重复利用带来污染，所以商品化的脱盐柱都是一次性的，并且价格较昂贵，使用成本较高。此外，废弃的纯化柱还会对环境造成污染，具有潜在的危害性。因而，专利技术一种可以完全去除葡聚糖凝胶脱盐柱残留杂质且不影响其再分离蛋白能力的方法，具有重大意义。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种可以完全去除葡聚糖凝胶脱盐柱残留杂质且不影响其再分离蛋白能力的方法。需要说明的是，本专利技术是基于专利技术人的下列发现和工作而完成的：专利技术人发现，目前，虽然已有葡聚糖凝胶脱盐柱再生方法的报道，但是其再生过程都使用到强酸、强碱或乙醇，强酸和强碱会破坏葡聚糖凝胶的结构，乙醇会使葡聚糖凝胶缩水产生气泡。并且，常规的再生方法无法避免地对脱盐柱造成损坏，影响脱盐柱的性能。因而，专利技术人进行了一系列科学的理论探索和实验验证。最终，专利技术人惊喜地发现了一种可以完全去除葡聚糖凝胶脱盐柱残留杂质且不影响其再分离蛋白能力的试剂组合——包括清洗液和保存液。进而，在此基础上，专利技术人还对利用上述清洗液和保存液进行再生葡聚糖凝胶脱盐柱的方法进行了探索和优化，并最终获得了一种操作简单、实用性强，能够有效除去脱盐柱中残留的荧光素、蛋白质和其他杂质的葡聚糖凝胶脱盐柱再生方法。进而，在本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒。根据本专利技术的实施例，该试剂盒包括：清洗液；以及保存液，其中，所述清洗液包含：9-11mM的PBS缓冲液；3-6mol/L的尿素；以及0.05-0.1质量％的去垢剂，所述保存液包含：9-11mM的PBS缓冲液；以及0.05-0.1质量％的叠氮化钠。根据本专利技术的实施例，利用本专利技术的试剂盒进行葡聚糖凝胶脱盐柱再生，能够完全去除葡聚糖凝胶脱盐柱残留杂质且不影响其再分离蛋白能力。并且，获得的再生脱盐柱至少可以重复利用8次。需要说明的是，本专利技术对于去垢剂的种类不作严格限定，只要能够有效实现去垢功能、去除目标杂质即可。根据本专利技术的实施例，所述去垢剂为选自TritonX-100、NP-40和SDS中的至少之一。由此，根据本专利技术实施例的试剂盒用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生时，对脱盐柱中残留的荧光素、蛋白质和其他杂质去除效果好，且不影响脱盐柱的再分离蛋白能力。根据本专利技术的实施例，所述清洗液和所述保存液分开放置。在本专利技术的第二方面，本专利技术还提供了一种将使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱再生的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法采用前面所述的用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒。专利技术人惊奇地发现，利用本专利技术的方法，使用根据本专利技术实施例的试剂盒进行葡聚糖凝胶脱盐柱再生，能够完全去除葡聚糖凝胶脱盐柱残留杂质且不影响其再分离蛋白能力。并且，该方法操作简单、实用性强，获得的再生脱盐柱至少可以重复利用8次。根据本专利技术的实施例，所述方法包括以下步骤：(1)向使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱中加入清洗液，并待液体完全流干，重复2-4次；(2)向所述葡聚糖凝胶脱盐柱中加入保存液，并待液体完全流干，重复9-11次，即得再生葡聚糖凝胶脱盐柱。由此，对脱盐柱中残留的荧光素、蛋白质和其他杂质去除效果好，且不影响脱盐柱的再分离蛋白能力，获得的再生脱盐柱可重复利用次数多。根据本专利技术的实施例，在步骤(1)中，每次加入所述清洗液2-4mL，优选3mL。由此，对脱盐柱中残留的荧光素、蛋白质和其他杂质去除效果好，且不影响脱盐柱的再分离蛋白能力。根据本专利技术的实施例，在步骤(2)中，每次加入所述保存液2-4mL，优选3mL。由此，获得的再生脱盐柱可重复利用次数多。根据本专利技术的实施例，在步骤(1)中，所述重复次数为3次。由此，对脱盐柱中残留的荧光素、蛋白质和其他杂质去除效果好。根据本专利技术的实施例，在步骤(2)中，所述重复次数为10次。由此，获得的再生脱盐柱可重复利用次数多。根据本专利技术的实施例，所述方法进一步包括：(3)向所述再生葡聚糖凝胶脱盐柱中加入保存液，并立即盖上盖子，保存。由此，获得的再生脱盐柱能够有效保存，便于后续可重复利用。根据本专利技术的实施例，在步骤(3)中，加入所述保存液1-3mL，优选2mL。由此，获得的再生脱盐柱保存效果好，可重复利用次数多。此外，还需要说明的是，为了进一步展示和证明本专利技术的试剂盒和方法的效果，专利技术人利用蛋白芯片—免疫荧光法对本专利技术获得的再生葡聚糖凝胶脱盐柱进行了质量评价，结果未发现有蛋白残留污染，且再生葡聚糖凝胶脱盐柱能有效使用。并且，进一步的检测结果表明，经本本专利技术的方法再生的葡聚糖凝胶脱盐柱至少可以重复利用8次。本专利技术解决了目前的一次性葡聚糖凝胶脱盐柱产品的再利用问题，具有相当大的实际意义。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明图1是根据本专利技术一个实施例，对脱盐柱再生过程的滤液进行免疫荧光检测的扫描结果。图2是根据本专利技术一个实施例，对新的和经2次、4次、6次、8次再生的葡聚糖凝胶脱盐柱纯化的荧光抗体进行免疫荧光检测的扫描图。图3是根据本专利技术一个实施例，对新的和经2次、4次、6次、8次再生的葡聚糖凝胶脱盐柱纯化的荧光抗体进行免疫荧光检测的荧光值柱状图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例1按照下述步骤，利用葡聚糖凝胶脱盐柱纯化荧光抗体，以便获得使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱：1)柱准备：将脱盐柱垂直固定在铁架上，移去脱盐柱盖子，流干柱中的液体。2)柱平衡：用9mLPBS缓冲液将脱盐柱平衡三次，每次加入3mL，待柱中缓冲液基本流干。3)加样：将不超过0.5mL的样品加入到柱中央，使样品完全进入到凝胶中，如果样品体积不足0.5mL，继续向柱中加入PBS补足到0.5mL。4)洗脱：在脱盐柱下方放置一个合适的收集管，向柱中央加入0.5mLPBS，收集流出的溶液。由此，得到使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱。实施例2根据本专利技术的将使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱再生的方法，按照下述步骤，进行葡聚糖凝胶脱盐柱再生：一、溶液配置配置清洗液：用无菌水配置包含9mMPBS、3mol/L尿素、0.05质量％的TritonX-100的溶液作为清洗液；配置保存液：用无菌水配置包含9mMPBS、0.05质量％的叠氮化钠的溶液作为保存液。二、葡聚糖凝胶脱盐柱再生(1)将本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒，其特征在于，包括：清洗液；以及保存液，其中，所述清洗液包含：9‑11mM的PBS缓冲液；3‑6mol/L的尿素；以及0.05‑0.1质量％的去垢剂，所述保存液包含：9‑11mM的PBS缓冲液；以及0.05‑0.1质量％的叠氮化钠。

【技术特征摘要】
1.一种用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒，其特征在于，包括：清洗液；以及保存液，其中，所述清洗液包含：9-11mM的PBS缓冲液；3-6mol/L的尿素；以及0.05-0.1质量％的去垢剂，所述保存液包含：9-11mM的PBS缓冲液；以及0.05-0.1质量％的叠氮化钠。2.根据权利要求1所述的用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒，其特征在于，所述去垢剂为选自TritonX-100、NP-40和SDS中的至少之一。3.根据权利要求1所述的用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒，其特征在于，所述清洗液和所述保存液分开放置。4.一种将使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱再生的方法，其特征在于，采用权利要求1-3任一项所述的用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)向使...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈敏文，王国新，唐梅杰，廖滔，赵肃，
申请(专利权)人：深圳清华大学研究院，深圳无微华斯生物科技有限公司，纳迈达斯生物科技中心，
类型：发明
国别省市：广东,44